Способ определения ревматического осложнения у больных с травмой спинного мозга Советский патент 1993 года по МПК G01N33/535 

Изобретение относится к медицине, в частности к нейрохирургии и касается способа иммунодиагностики ревматических проявлений у больных с травмой спинного мозга.

Целью изобретения является ранее определение наличия ревматических осложнений у больных с травматической болезнью спинного мозга.

Поставленная цель достигается тем, что в сыворотке крови больного одновременно выявляются ревматоидные факторы к иммуноглобулинам М и G (РФ-l дМ и рф-igG) и по наличию любого из двух факторов можно диагностировать наличие ревматических проявлений заболевания. Определение сывороточных РФ-lgM и РФ-lgG проводят методом иммуно-ферментного анализа (ИФА), где в качестве антигена используют Fc- фрагмент IgG человека, стафилококковый белок А и антитела к IgM, меченные перок- сидазой хрена.

Способ осуществляют следующим образом.

1.Полистироловые 96-луночные микроплаты инкубируют при 4°С в течение ночи с раствором Fc-фрагмента IgG человека (10 мкг/мл в 0,1 М карбонатном буфере рН 9,6). Для удаления несвязавшегося с носителем после инкубации материала микроплаты промывают раствором Твина 20 (0,05%).

2.Микроплаты покрывают раствором желатины (1 мг/МЛ в Na-фосфатном буфере рН 7,2-PBS) и оставляют на 1,5 ч в термостате при 37°С.

3.Наносят исследуемые сыворотки в разведении 1:30-1:100. В качестве стандарта используют препараты РФ-lgM и РФ-lgG, выделенные и очищенные методом аффинной хроматографии. Оставляют в термостате при 37°С в течение 1 ч.

4.Наносят соответствующие перокси- дазные коньюгаты, разведенные в PBS до рабочей концентрации. Платы инкубируют в течение 1 часа при 37°С и трижды отмывают.

5.Добавляют субстратную смесь- орто- фенилендиамин с перекисью водорода и инкубируют в темноте до появления окраски.

со С

00 GO Ю Ю О О

6. После остановки реакции 50% серной кислотой измеряют интенсивность окраски (ОП) на автоматическом фотометре при длине волны 492 нм. Результаты оценивают по показателю отношения значений ОП исследуемого образца и отрицательной контрольной сыворотки „р. / - которые

сравнивают с дискриминирующим показателем (ДП), определяемом при исследовании сывороток здоровых доноров по $ ОПХ1-ХП)/ОП(-)

формуле

+2 о , где

ОП(хЬхп) - сумма значений ОП сывороток доноров, ОП(-) - значение отрицательного контроля, п - количество сывороток доноров. Выявление сероположительных сывороток позволяет ставить диагноз - наличие ревматических осложнений у больных с травмой спинного мозга. Ценность предлагаемого способа диагностики была выявлена при анализе 45 больных с травмой спинного мозга, а также группы доноров (7 человек); Проведенное исследование выявило сероположительность по IgQ у 11 из 25 обследованных больных с травмой спинного мозга в позднем периоде болезни (44%). Из 11 сероположительных больных 6 человек обнаружили высокое содержание обоих факторов - IGM и IgG, у 5 человек (20% от обследованных) присутствовал только фактор IgG. Известно, что появление в крови РФ-IGM может указывать на нарушение деятельности сердца, развитие гипохромной анемии, нарастание патологических процессов в суставах (Насонова 1989). У людей продукция IgG способствовала образованию РФ-lgG, что вело к хроническому воспалительному процессу. Описано, что при ряде заболеваний РФ-lgG может усиливать васкулярные болезни, вызванные иммунными комплексами. Сопоставление результатов серологического обследования больных с результатами клинических наблюдений показало, что развитие системных проявлений заболевания сопровождается появлением, ревматоидных факторов определенного класса. В зависимости от класса ревматоидного фактора, присутствующего в крови у больного можно прогнозировать развитие определенных клинических проявлений. Проведенное исследование показало, что при наличии в крови одного или обоих ревматоидных факторов можно ожидать у больных с травмой спинного мозга развитие ревматических осложнений, Для иллюстрации данного вывода приводим описание двух клинических случаев: I - выявление в крови

0

5

0

0

ревматоидных факторов позволило диагностировать развитие ревматических осложнений, для купирования которых и подготовки больного к операции потребова- лось провести соответствующее терапевти- ческое лечение; II - у больного ревматоидный фактор в крови в норме, и подготовка больного к операции не потребовала дополнительных лечебных мероприятий.

1. Больная 3-а, 33 лет, поступила в клинику 2.11.89 с диагнозом - осложненный перелом 12 грудного позвонка ЦЪг). с клиникой нижней спастической параплегии, нарушением функции тазовых органов. Травма получена 2,5 года назад в автоаварии. При поступлении общее состояние средней тяжести, определялись двигательные и чувствительные нарушения с уровня 10-го грудного сегмента. Больная на протяжении последних 8 месяцев страдает воспалительным процессом в мочевом пузыре, почках, с короткими ремиссиями и бурными обострениями. При поступлении температура 36,6°С, моча мутная, боли в поясничной и надлобковой области. Отмечает слабость, быструю утомляемость при выполнении комплекса лечебной физкультуры, одышка, сердцебиение. В стационаре при обследовании на электрокардиограмме - синусовая аритмия, изменения миокарда левого желудочка, снижение электрической активности миокарда. В моче лейкоциты покрывают все поле зрения, белок - 0,565 г%. В крови СОЭ - 38 мм/час, фибриноген 488%, эритроцитов 3,2 мил. Учитывая длительность воспалительного процесса, отсутствие стойкого терапевтического эффекта, частые рецидивы, поражение сердечной мышцы нами было расценено как развитие ревматических осложнений при травматической болезни спинного мозга. С целью выявления ревматоидных факторов у больной исследовали сыворотку крови и установили присутствие высоких уровней ревматоидных факторов к иммуноглобулину G и иммуноглобулину М, На основании данного серологического исследования у больной было подтверждено развитие ревматодного заболевания. С учетом этого факта больной был проведен курс неспецифической противовоспалительной терапии. Воспалительный процесс в течение 3-х недель был купирован, в моче белок снизился до 0,06 г%, лейкоцитов 3-6 в поле зрения микроскопа, в крови СОЭ снизилось до 18 мм/ч, исчезла аритмия, нормализовалась температура. Таким образом, у данной больной своевременное выявление ревматоидного фактора и и проведение соответствующего лечения позволило в короткие

0

5

0

5

сроки купировать воспалительный процесс, нарушения сердечного ритма и подготовить больную к операции на спинном мозге.

II. Больной Э-т, 25 лет, поступил в клинику 4.10.89 с клиникой осложненного ком- прессионного перелома 5 грудного позвонка (Д5), нижний спастической параплегией, нарушением функции тазовых органов. Травму получил 9 лет назад при падении с высоты. В стационаре у больного выявлено обострение хронического пиелонефрита. При лабораторном исследовании крови СОЭ - 18 мм/час, эритроцитов 3,6 мил, фибриноген - 1154 мг%. В моче следы белка, лейкоциты - 15-25 в поле зрения, эритроциты - единичны. Учитывая длительность повреждения спинного мозга, частые обострения пиелонефрита больной обследован серологически на ревматоидный фактор. Исследование сыворотки крови не выявило повышения уровней ревматоидных факторов по сравнению с нормой. С учетом результатов данного исследования больному был проведен стандартный курс лечения пиелонефрита (промывание антисептиком). Клиника пиелонефрита была купирована в течение недели. В моче лейкоцитов - единицы, в крови фибриноген снизился до нормы. В данном случае отсутствие грубых имму- ных нарушений (РФ в пределах нормы) спо- собствовало быстрому клиническому восстановлению функции тазовых органов.

Таким образом, у больных с осложненной травмой позвоночника возможно развитие ревматоидного заболевания, которое негативно влияет на состояние функции почек, печени, сердечно-легочной системы и требует проведения специфического курса лечения. При отсутствии серологических

признаков ревматоидного заболевания осложнения протекают более легко и поддаются стандартной терапии. Следовательно исследование крови у больных с травмой спинного мозга на присутствие ревматоидных факторов способствует ранней диагностике ревматических осложнений и выбору правильной тактики лечения.

Технико-экономическая эффективность.

Использование предлагаемого способа даст возможность по капле сыворотки крови в стационаре и амбулаторно быстро по единой методике даже при отсутствии выраженных клинических признаков определить наличие ревматических осложнений у обследуемого с травматической болезнью. Это позволит клиницистам - 1) выявить группы серопозитивных и серонегативных больных и определить тактику лечения; 2) своевременное обнаружение факторов, приводящих к развитию ревматических осложнений, будет способствовать большей эффективности проводимой терапии; 3) ранняя диагностика позволит ускорить подбор путей лечения, что приведет к сокращению срока пребывания в стационаре.

Формула изобретения

Способ определения ревматического осложнения у больных с травмой спинного мозга путем обследования больного, отличающийся тем, что, с целью раннего выявления осложнений в исследуемой крови брльного, определяют ревматоидные факторы к иммуноглобулинам М и G с помощью иммуно-ферментного анализа и при наличии одного или обоих ревматоидных факторов определяют ревматическое осложнение.

Изобретение относится к медицине, в частности к нейрохирургии, и касается способа иммунодиагностики ревматических проявлений у больных с травмой спинного мозга. Целью изобретения является раннее выявление осложнений. Для этого у больных берут кровь, получают сыворотку и с помощью диагностической тест-системы на основе метода иммуно-ферментного анализа определяют ревматоидный фактор. Способ позволяет в более ранний срок выявить наличие ревматического осложнения и назначить соответствующее лечение.