Способ получения производных дипептидов или их фармацевтически приемлемых солей Советский патент 1993 года по МПК C07K5/06 A61K37/02 

Изобретение относится к способу получения производных дипептидов или их фармацевтически приемлемых солей - новых биологически активных соединений, которые могут найти применение в медицине.

Цель изобретения - способ получения новых производных дипептидов малотоксичных и обладающих более высокой активностью в отношении способности ингибировать ренин.

Поставленная цель достигается описываемым способом получения производных дипептидов общей формулы I

R2 ОН РЦ

RrW-A-B-NH-CH-CH-CH-R4

где RI - (С4-Сб)-циклоэлкил, который может быть замещен амино- или Ст-С -алкокси- карбониламино;

W - -СО-;

R2 (С4-С)-циклоалкил-(С1-С4)-алкил;

R3 - водород или гидрокси;

R4 - остаток формулы Н

CH2-CH2-D,

где D - означает 2,3- или 4-пиридиновый или 2-, 4-имидазольный остаток, которые могут быть замещены (С1-С4)-алкилом.

А и В независимо друг от друга обозна- чают связанный N-терминэльно с RI или А и С-термина льно с В или NH-CHR2-CHOH-CHR3-R4 радикал аминокислоты из ряда: фенилаланин. гистидин,

00

со о со

00

го

ico

тирозин,лейцин,изолейцин,валин,аланин, lm-метилгистидин, о-метилтирозин, о-тре- тичный бутилтирозин, норвалин, норлей- цин, или их фармацевтически приемлемых солей, отличающийся тем, что подвергают взаимодействию кислоту Rt-WAOH или ее реакционно способное производное; с H2N B-NH-CH(R2hCH(OH)CH(R3)R4, при необходимости с последующим отщеплением временно введенных защитных групп и выделением целевого продукта в свободном виде или в виде фармацевтически приемлемых солей.

Стереоизомерные смеси, в частности, диастероизомерные смеси, которые получаются при использовании рацемических ами- нокислот А или В, могут отделяться известным способом путем фракционированной кристаллизации или с помощью хроматографии.

Перечень использованных сокращений

АСС 4-аминоциклогексилкарбонил

Вое третичный бутоксикарбонил

BuLI п-бутил-литий

DCC дициклогексилкарбодиимид

DCI десорбция химической ионизации

DNP 2,4-динитрофенил

ОМЕ диметоксиэтан

DMF диметилформамид

ЕЕ этиловый эфир уксусной кислоты

EIэлектронное воздействие

FAB бомбардировка быстрыми атомами . Зч- ;

HOBt 1-гидроксибензотриазол

М молекулярный пик

Ms масс-спектр

МТЕЕ третичный метил-бутиловый эфир

NEM М-этилморфолин

п-PropPA л-ангидрид пропилфосфо- кислоты

THF тетрагидрофуран

Прочие сокращения, использованные для аминокислот, соответствуют обычному в химии пептидов трехбуквенному коду. Если четно не указано другое, то речь идет всегда об аминокислотах L-конфигурации.

Использованные растворители имеют следующие сокращения:

LMi CH2(Cl2)CH3OH 20:1

LM2 CH2(Cl2)CH3OH 9:1

1Мз СН2()СНзОН 12:1

LM4 СН2(С12)СНзОН концентрированный МНз 10:1:0,1

LMs циклогексан/эфир уксусной кислоты 9:1

Ше п-гексан/эфир уксусной кислоты 2:1

Приведенные ниже примеры предназначены для пояснения настоящего изобретения, не ограничивая его этими примерами,

Пример 1. Ы-(Ы-Третичный-бутоксикарбонил-цис-4- аминоциклогексилкарбо- нйл)-1--фенилаланин-1 -норвалин- (1-5-цик- логексилметил-2-3-гидрокси-5-(2-пиридил))- пентиламид,

235 мг М-(М-третичный-бутоксикарбо- нил-цис-4- аминоциклогексилкарбонил) фенилаланина, растворенного в 3 мл DMF, смешивают с 98 мг HOBt, 130 мг DCC и 0,08 мл NEM. К этому раствору добавляют 230 мг

5 Ьнорвалин-(1-5-циклогексилметил-2-5-гид- рокси-5-(2-пиридил))-пентидамида, растворенного в 3 мл DMF и перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. DMF отгоняется в глубоком вакууме, ос0 тавшийся раствор растворяется в эфире уксусной кислоты, отфильтровывается от выпавшей в осадок мочевины и дважды промывается насыщенным раствором NaHCOs и насыщенным раствором NaCI, органиче5 екая фаза высушивается с помощью MgSCM и концентрируется в вакууме. После хрома- тографии. на колонне (селикагель), LMI)было изолировано 315 мг,

Точка плавления 100-103°С.

0MS (FAB) 748 (М+1)

э) М-(М-третичный-бутоксикарбонил- цис-4-аминоциклогексил/ карбонил)-1-фе- нилаланин

5,5 г М-(М-третичный-бутоксикарбонил5 цис-4- аминоциклогексилкарбонил)-Ь-фени- лаланинбензилового эфира было гидрировано в 230 мл этанола с помощьюД г палладия/угле при нормальном давлении. После окончания реакции был отфильтро0 ван катализатор и отогнан растворитель. После перекристаллизации и п-гептан/эфи- ра уксусной кислоты было получено .4,1 г бесцветного продукта.

Точка плавления 160-161°С (разложе5 ние).

MS(DCI)391 (M+1)

б) М-(М-третичный-бутоксикарбонил- цис-4-аминоциклогексилкарбонил) -L-фени- лаланинбензиловый эфир

0 6,0 г М-третичный-бутоксикарбонил- цис-1,4- аминоциклогексанкарбоновой кислоты и 6.3 г L-фенилаланинбензилового эфира было растворено в 75 мл DMF, смешано с 24 мл п-ангидридом пропилфосфо5 кислоты и 15,7 мл NEM при 0°С и в течение ночи при комнатной температуре происходила реакция. Раствор был разбавлен CH2CI2 и соответственно промыт полунасыщенным раствором NaHCOa. 10%-ной лимонной кислотой и водой, высушен с

помощью MgSCU и концентрирован в вакууме. Хроматография дала 5,7 г чистого продукта.

ао:-14.6°(,1 вСНзОН)

П р и ме р 2.

М-(цис-4-аминоциклогексилкарбонил)- | -фенилэланин-1--норвалин-(1-5- циклогек- силметил-2-5-гидрокси-5-(2-пиридил)) пен- тиламид

77,7 мг описанного в примере 1 соеди- нения было растворено в 2 мл CH2CI2 и смешано при температуре 0°С в присутствии Na с 2 мл СРзСООН. По истечении 30 минут раствор был концентрирован, остаток растворен в эфире уксусной кислоты и соответственно дважды промыт насыщенным раствором NaHCOa NaCI.

Колоночная хроматография (селика- гель. LMI) дала 24,7 мг продукта.

MS(FAB)648(M+1)

Пример 3. и-(К|-третичный-бутокси- карбонил-транс-4- аминоциклогексилкар- бонил)-Ь-фенилаланин-1-норвалин-( 1-S- циклогексилметил-2-5-гидрокси-5-(2-пири-. дил))-пентиламид.

По аналогии с описанным в примере 1 соединением, указанное в заголовке соединение было получено из 1Ч-(Ы-третичный-бу- токсикэрбонил-транс-4-аминоциклогексил- карбонил}-1 - фенилаланина и L-норвалин- (1-5-циклогексилметил-2-5- гидрокси-5-(2- лиридин))-лентиламида.

Выход составил 270 мг.

Точка плавления 219-220°С.

MS (FAB) 748 (М+1)

а)Ы-(Ы-третичный-бутоксикарбонил- тран-4- аминоциклогексилкарбонил)-1.-фе- нилаланин.

4,45 г М-(М-третичный-бутоксикарбо- нил-транс-4- аминоциклогексилкарбонил)- L-фенилаланинбензилового эфира было каталитически гидрировано в 200 мл этанола при комнатной температуре и нормальном давлении с помощью 900 мг палладия на угле. После окончания реакции смесь была отфильтрована от катализатора и был отогнан растворитель в вакууме. После перекристаллизации было получено 2,67 г чистого продукта.

Точка плавления: с температуры 160°С разложение

MS(DCI):391 (M+I)

б)М-(1Ч-третичный-бутоксикарбонил- транс-4- аминоциклогексилкарбонил) нилаланинбензиловый эфир

3 г N-третичный-бутоксикарбонил- транс-4-аминоциклогексилкарбоновой кислоты и 3,2 г 1-фенилаланинбензилового эфира было растворено е 40 мл DMF и смешано при температуре 0° с 7,85 мл NEM, а затем с 12 мл п-PropPA. Смесь через ночь при комнатной температуре вводилась в реакцию. После разбавления 200 мл уксусного эфира раствор соответственно промывался дважды водой. 10%-ной лимонной кислотой, насы. щепным NaHCOan насыщенным раствором NaCI. Оставшаяся органическая фаза была высушена в помощью МдЗСм и освобождена в вакууме от растворителя. Исходный продукт был растерт с диэтиловым эфиром, выпавшие в осадок кристаллы были отсосаны и высушены. Было получено 4,45 г бесцветных кристаллов.

Точка плавления 176-177°С. . MS(DCI)481 (M+1)

Л р и м е р 4. М-{транс-4-аминоциклогек- силкарбонил)-Ь фенилалэнин-Ьнорвалин- (1-5-циклогексилметил-2-5-гидрокси-5- (2-пиридил))-пентиламид

Указанное в заголовке соединение было получено описанным в примере 2 способом из описанного в примере 3 соединения.

Выход после хроматографии (селика- гель, LM2J составил 27 мг.

Ms (FAB) 648 (М+1); RF 0,17 (метиленхло- рид/метанол 8:2).

Пример 5. М-(М-третичный-бутокси- карбонил-транс-4-аминоциклогексилкарбо- нил)-и-фенилаланин-М(1т)-третил-1 -гистид- ин-(1-5- циклогексилметил-2-5-гидрокси-5- (2-пиридил))-пентиламид.

Указанное в заголовке соединение было получено из описанной в примере За) производной фенилалаиина и РМОС-гис(тре- тичного)-(1-5-циклогексилметил-2-5-гидро- кси-5-(2-пиридил)) -пентиламида в соответствии с описанным с примере 1 способом.

После хроматографии (селикагель, LMI) выход составил 0,4 г.

MS(FAB) 1028 (М+1), 1034 (М+7). RF 0.5 (толуол/этанол 8:2).

Пример 6. М-(Ы-третичный-бутокси- карбонил-транс-4- аминоциклогексилкарбо- нил)-1 -фенилаланин-1-гистидин-(1- 3-цикло- гексилметил -2-5-гидрокси-5-(2-пиридил))- пентиламид.

40 мг, полученного в примере 5 вещества, было растворено в 5 мл 90%-ной уксусной кислоты и в течение 2 ч смесь была нагрета до температуры 60°С. Водородный показатель рН раствора с помощью Na2C03 был доведен до значения 8 и трижды экстрагирован с помощью эфира уксусной кислоты. Органическая фаза была соответственно дважды промыта насыщенным раствором N32C03 и насыщенным раствором NaCI, затем высушена с помощью и концентрирована в вакууме. Хроматография (сели- кагель, LMI) дала 16 мг чистого продукта.

MS (FAB) 786 (М+1). Разложение, начиная с температуры 155°С.

Пример 7. М-(транс-4-аминоциклогек- силкарбонил)-1- фенилаланин-Ьгистидин- (1-5-циклогексилметил-2-8-гидрокси-5- (2-пиридил))-пентиламид.

300 мг описанного в примере 5 вещества перемешивалось е 5 мл СРзСООН и 0,25 мл Н20 в течение 15 минут при температуре 0°С ив течение двух часов при комнатной температуре. Раствор был концентрирован в вакууме, подщелочен раствором NaHCOa и экстрагирован с помощью эфира уксусной кислоты.

Органическая фаза была концентрирована в вакууме и остаток хроматографиро- ван (селикагель. LlVfe).

MS (FAB) 686 (М+1). Точка плавления 114-11б°С.

Примере. М-(М-третичный-бутокси- карбонил-цис-4- аминоциклогексилкарбо- нил)-Ь-фенилаланин-М(1т)-тритил-Ь-гистид- ин-(1-5- циклогексилметил-2-3-гидрокси-5- (2-пиридил))-пентиламид.

Указанное в заголовке соединение было получено из описанной в примере la) производной фенилаланина и FMOC- гис(третичного)-(1-5-циклогексилметил-2-5 -гидрокси-5-(2-пиридил)- пентиламида в соответствии с описанным в примере 1 способом. Выход после хроматографии (селикагель, LMI) составил 0,5 г.

MS (FAB) 1028 (М+1), 1034 (М+7); RF 0,26 (LMI).

Пример 9. М-(М-третичный-бутокси- карбонил-цис-4- эминоциклогексилкарбо- нил)-1 -фенилаланин-1 -гистидин-(1-5-цикло- гексилметил -2-5-гидрокси-5-(2-пиридил))- пентиламид.

Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 6 способом из описанного в примере 8 соединения. Выход составил 61 мг. Точка плавления 127-130°С.

MS (FAB) 786 (М+1); RF 0,21 (LM2).

Пример 10. М-(цис-4-аминоциклогек- силкарбонил)-Ь- фенилаланин-Ь-гистидин- (1-5-циклогексилметил-2-5-гидрокси-5-(2- пиридил))-пентиламид.

Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 7 способом из описанного в примере 8 соединения. Выход составил 180 мг,

MS(FAB)686M+1).

Точка плавления 177°С. Разложение.

Пример 11. М-(М-третичный-бутокси- карбпнил-транс-4- аминоциклогексилкэр- бонил)-Ьтирозин(о-метил)-Ы(1т)-тритил-10

5

0

5

0

5

0

5

0

5

гистидин- (1-5-циклогексилметил-2-5-гид- рокси-5(2-пиридил))-пентиламид.

Указанное в заголовке соединение было получено из М-(М-третичного-бутоксикарбо- нил-транс-4-аминоциклогексилкарбонил) тирозин(метила) и (тритил)-(1-5-цикло- гексилметил-2-S- гидрокси-5-(2-пиридил))- пентиламида в соответствии с описанным в примере 1 способом. RF 0,54 (толуол/этанол 8:2).

MS(FAB)1058(M+-1).

Пример 12. М-(М-третичный-бутокси- карбонил-транс-4-аминоциклогексилкарбо- нил)-1-тирозин(о-метил)-1.-гистидин-(1-5- циклогексилметил -2-5-гидрокси-5-{2-пири- дил))-пентиламид.

Указанное в заготовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 6 способом из описанного в примере 11 соединения. RF 0,2 (толуол/этанол 8:2).

MS (FAB) 816 (М+1). Разложение со 180°С.

Пример 13. М {транс-4-аминоцикло- гексилкарбонил)-и- тирозин(о-метил)-1-гис- тидин-(1 -5-циклогексилметил-2-5-гидрокси - -5-(2- пиридил))-пентиламид.

Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 7 способом из описанного в примере 11 соединения.

MS(FAB)716(M+1).

Пример 14. М-(Г -третичный-бутокси- карбонил-цис-4- аминоциклогексилкарбо- нил)-1 -тирозин(о-метил)-М-(1т)-тритил-1 -гис- тидин- (1-5-циклогексилметил-2-3-гидро- кси-5-(2-пиридил))-пентиламид.

Указанное в заголовке соединение было получено из М-(1Ч-третичного-бутоксикарбо- нил-цис-4-аминоциклогексилкарбонил)-и- тирозин(о-метил) и 1-гис(тритил)-(1-5-цик ло- гексилметил-2-S -гидрокси-5-(2-пиридил))- пентиламида в соответствии с описанным в примере 1 способом. RF 0,75 (LM2).

MS(FAB)1058(M+1).

Пример 15. М-(М-третичный-бутокси- карбонил-цис-4- аминоциклогексилкарбо- нил)-1-тирозин(о-метил)-Ьгистидин-(1-5- циклогексилметил-2-5-гидрокси-5-(2-пири- дил))-пентиламид.

Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным а примере б способом из описанного в примере 14 соединения. RF 0,80 (LM4),

MS(FAB)816(M+1).

П р и м е р 16. цис-4-аминоциклогек- силкарбонил) тирозил(о-метил)1-гисти- дин-{1-5-циклогексилметил-2-5-гидрокси-5- -(2- пиридил))-пентиламид.

Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 7 способом из описанного в примере 14 соединения. RF 0.50 (LM4). MS(FAB)716(M+1).

П р и м е р 17. М-(М-М-(цис-4-третичный- бутоксикарбониламино- циклогексилкарбо- н ил-фен ил алан инил)-гистидинил)-2-(5-3- амино-б-циклогексил- 35,4И-дигидрокси-п- гексил)-пиридин.

60 мг соединения из примера 17а смешиваются с 40 мг тиофенола в 2 мл ацето- нитрила в течение 2 ч.

После концентрации раствор хроматог- рафируют (селикагель. LM4) и получают 45 мг продукта в виде аморфного порошка.

MS (FAB) 802 (М+1).

а)Вос-цис-АСС-РНе-гис-(ОМР)-2-(5-ами- но-6-циклогексил -35,4В-дигидирокси-п- гексил)-пиридин.

60 мг Вос-гис(ОМРИ35,4Я,55)-2-{5-ами- но-6-циклогексил- 3,4-дйгидрокси-гексил)- пиридина перемешиваются в5 мл DME-HCI в течение 2 ч. После концентрации исходный продукт вместе с 50 мг Ы-(Ы-третичный бутоксикарбонил-цис-4-эминоциклогексил- карбонил)-Ьфенилаланина, 120 мг DCC и 80 мг HOBt растворяется в 3 мл DMF. Водородный показатель рН раствора доводится с помощью NEM до значения 9 и раствор перемешивается 16 ч. Раствор фильтруется, разбавляется эфиром уксусной кислоты и каждый раз промывается 3%-ным раствором МаНСОз, НаО и насыщенным раствором NaCI. высушивается с помощью MgSO-i. концентрируется и хроматографируется на селикагеле LM3). Получают 60 мг указанного в заголовке соединения в виде желтой пены.

MS(FAB)968(M+1).

б)Boc-rnc(DNP)-(3S,4R.5S)-2-(5-aMHHO- 6-циклогексил- 3,4-дигидрокси-гексил)-пи- ридин.

0,5 ммоль (3S. 4R, 53)-изомера из примера 17с) перемешиваются с 5 мл HCI в ОМЕ (насыщенном) в течение 2 ч. После концентрирования в вакууме остаток растворяется в 3 мл абсолютного DMF. Добавляется по 0,5 миллимолей Boc-rnc(DNP)-OH, дицикло- гексилкарбодиимида и HOBt. Раствор с помощью NHM доводится до водородного показателя 9 и перемешивается в течение -24 часов. После фильтрации разбавляется ЕЕ и каждый раз промывается 3%-ным раствором №НСОз. высушивается с помощью MgS04 и концентрируется. Хроматография на селикагеле (LMI) дает указанное в заголовке соединение в виде желтой смолы.

MS (FAB) 696 (М+1).

с) 2-((3S,4R,5S)-5-TpeTH4Hbm-6yTOKcn- карбониламино -3.4-дигидрокси-6-цикло- гексил-п-гексил)-пиридин.

93 мг(1 миллимоль)2-пиколина в 10мл THF смешиваются при температуре 78°С с 1,4 мл (1 миллимоль) n-BuLi.

После нагревания до комнатной темпе- 5 ратуры смесь перемешивается в течение 30 мин, затем охлаждается до температуры - 40°С. Добавляется 1 ммоль (2RS.3R. тр. етич ный-бутилдиметил - -силилокси-4-третичный-бутоксикзрбонила- 0 мино-5-циклогексил-1,2-оксопентана (растворен в 5 мл THF). После выдержки в течение 10 ч при комнатной температуре смесь разбавляется водой и экстрагируется с помощью МТВЕ. Исходный продукт (0,4 г) раз- 5 бзвляется в THF и смешивается с 5 мл одномольного раствора тетрабутиламмони- евого фторангидрида в THF при 0°С в течение 1 ч. После разбавления водой и экстрагирования с помощью ЕЕ получают 0 0,15 r(3S.4R.5S}-H30MepaMS(FAB): 391 (М+1) и 0.12 г (35.45,55)-изомера MS (FAB):391 (М+1).

П р и м е р 18. Цис-4-аминоциклогексил- карбонил-1.-Рг1е-1--Н18-{1-5- циклогексилме- 5 тил-2Р,35-дигидрокси-5-(2-пиридил))-п-пен- тил- амидтристрифторацетат,

25 мг описанного в примере 17 соединения перемешиваются в 1 мл ТгА/1 мл CHaCte в течение 2 ч. После концентрирования 0 смесь растворяется в и лиофилизирует- ся. Получают 20 мг продукта в виде бесцветного порошка.

MS (FAB) 702 (М+1).

Пример 19. Вос-транс-ACC-L-Phe-L- 5 Н1з-(15-циклогексилметил- 2Р,33-дигидрок- си-5-(2-пиридил))-п-пентиламид.

Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 17 способом из описанного в примере 0 19а соединения. Rp 0,19(LM2). Выход составил 79,5 мг.

MS(FAB)802(M+1).

а)BOC-.TpaHC-ACC-LPhe-L-H s(DNPHl- S-циклогексилметил- 2Р,33-дигидрокси-5- (2-пиридил)-п-пентиламид.

5

Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 17 а способом из описанных в примерах За и 196 соединений. 0 . RF0.40(LM2).

MS (FAB) 968 (М+1).

б)H-mc(DNP)-(3S,4R,5S)-2-(5-aMHHO-6- циклогексил-3,4- дигидрокси-п-гексил)-пи- ридин-гидрохлорид.

5 400 мг соединения из примера 17) перемешиваются в 10 мл насыщенного раствора DME/HCI в течение 2 ч. После концентрирования раствор дважды растворяется в толуоле и каждый раз вновь концентрируется.

Получают указанное в заголовке соединение в виде желтой пены.

MS(FAB)596(M+1).

Пример 20. Транс-ACC-L-Phe-L-Hls- (IS-циклогексилметил- 2Я,35-дигидрокси-5- (2-пиридил))-п-пентиламид.

Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 18 способом из описанного в примере 19 соединения Выход составил 49 мг.

Ms (FAB) 702 (М+1).

П р и м е р 21. ВОС-транс-АСС-ЬТуг(0- метил)-Ь-ьи8- {15-циклогексилметил-2Р,35- дигидрокси-5-{2-пиридил)-п-пентиламид.

Указанное в заготовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 17 способом из описанного в примере 21 а) соединения.

MS(FAB)832(M+1).

а)ВОС-тракс-АСС-1-Туг(0-метил)-1-Н18 |DNP)-(IS- циклогексилметил-2Р,33-дигид- рокси-5-(2-пиридил))-п-пентил-амид.

Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 17а) способом из описанных в примерах 21 б и 19 б соединений.

MS(FAB)998(M+1).

б)ВОС-транс-АСС-тир(ОСНз)-ОН.

0,05 моль ВОС-транс-АСС-тир(ОСНз)- ОСНз растворяют в 250 мл DME, перемешивают количеством в однонормальном растворе NaOH в течение 5 ч. После этого раствор концентрируется, остаток растворяется водой, подкисляется с помощью КН804ДО получения водородного показателя рН4 и экстрагируется с помбщью ЕЕ. Исходный продукт перекристаллизовывает- ся из п-гептан/ЕЕ и получается указанное в заголовке соединение в виде белого порошка. Температура плавления 181°С. Разложение. RF 0,20 (толуол/этанол 8:2).

MS(DCI)421 (М+1).

с) ВОС-транс-АСС-Туг(ОСНз)-ОСНз 0,1 моль ВОС-транс-АСС-ОН и 0,1 моль 1 -тирозин(ОСНз)-метилового эфира растворяют в 500мл DMF и смешивают при температуре 0°С в присутствии N2 со 100 мл п-РгорРА (50-процентный раствор в CH2CI2) и 0,5 моль триэтилэмина. Раствор в течение ночи приводится в состояние реакции. После окончания реакции (DC-контроль) растворитель отгоняется в глубоком вакууме и остаток растворяется в ЕЕ. Органическая фаза соответственно дважды экстрагируется с помощью 10-процентной лимонной кислоты, воды, полунасыщенного раствора МаНСОз и насыщенного раствора Nad, высушивается с помощью , концентрируется в вакууме и хроматографируется

(селикагель, LM5). Температура плавления 150-155°С.

MS (FAB) 435 (М+1).

П р и м е р 22. Транс-АСС- -Туг(0-ме- тил)-1 -Н15-(15- циклогексилметил-2Я: 35-ди- гидрокси-5-(2-пиридил)-п-пентиламид.

Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 18 способом из описанного в примере 21 соединения.

MS (FAB) 732 (М+1).

П р и м е р 23. ВОС-цис-АСС-1-Туг(0-метил)Ч-Н1з-(15-циклогексилметил-2Р,35- Ди гидрокси-5-{2-пиридил)-п-пентиламид.

Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 17 способом из описанного в примере 23а) соединения. RF 0,21 (LM2).

MS (FAB) 832 (М+1).

а) ВОС-цис-АСС-1 -Туг(0-метил)-Ы-П5- (ОМР)-(15-циклогексиметил -2Р,35-дигид- рокси-5-(2-пиридил))-п-пентиламид. Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в при- мере 17а) способом из описанных в примерах 236) и 196) соединений. MS(FAB)998(M+1). 6) ООС-цис-АСС-Туп;ОСНз}-ОН. Указанное в заголовке соединение пол- учается по аналогии со способом примера

216), аЬ5 +18,б°С(, метанол). MS(DCI)421(M+1).

с) ВОС-цис-АСС-Туг(ОСНз)-метиловый эфир.Указанное в заголовке соединение получается по аналогии со способом примера 21 с).

MS(DCI)435(M+1).

П р и м е р 24. Цис-ACC-L-Tyr (0-метил)L-Hls-(1S- циклогексилметил-2Р,35-дигид- рокси-5-(2-пиридил))-п-пентиламид.

Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 18 способом из описанного в примере 23 соединения. RF 0,56 (LM4). MS(FAB)732(M+1).

Пример 25. ВОС-цис-ACC-Phe-His- (15-циклогексилметил-25 -гидрокси-5-(М- пропил-2-имидазолил))-пентиламид. Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 17 способом из описанного в примере 2.5 соединения.

MS(FAB)817(M+1).

a)BOC-4HC-ACC-Phe-Hls-(DNPH1S-4HK- логексилметил-25- гидрокси-5-(Ы-пропил-2- имидазолил))-пентиламид.

80 мг соединения из примера 8 перемешиваются с 4 мл HCI в- насыщенном DME в

течение 2 часов. После концентрирования в вакууме остаток абсолютно растворяется в 3 мл DMF. Добавляется 44 мг ВОС-цис-АСС- Phe-OH и по 0.11 миллимоля DCC и HOBt. Водородный показатель раствора с помощью NEM доводится до значения 9 и раствор перемешивается в течение 24 часов. После фильтрации раствор разбавляется с помощью ЕЕ и каждый раз дважды промывается 3%-ным раствором NaCOs, НаО и насыщенным раствором NaCI. высушивается с помощью MgSO4 и концентрируется. Хроматография на селикагеле дает указанное в заголовке соединение в виде желтой смолы.

MS(FAB)983(M+1).

б) ВОС-Н18-(ОЫР)-(15-циклогексилме- тил-25-гидрокси-5- (Г 1-пропил-2-имидазо- лил))-пентиламид.

100 мг соединения из примера с перемешиваются с 5 мл HcN в насыщенном ОМЕ в течение 2 ч. После концентрирования в вакууме остаток абсолютно растворяется в 3 мл DMF. Добавляется 105 мг BOC-Hls- (DNPJ-OH и по 0,3 миллимоля DCC и HOBt. Водородный показатель раствора с помощью НЕМ доводится до значения 9 и раствор перемешивается в течение 24 ч. После фильтрации раствор разбавляется с помощью ЕЕ и дважды промывается 3-процентным раствором NaCCb, HaO и насыщенным раствором NaCI, высушивается с помощью MgS04 и концентрируется. Хроматография на селикагеле дает указанное в заголовке соединение в виде желтой смолы.

MS(FAB)711 (M+1).

с) 500 мг соединения из примера б абсолютно-растворяются в 5 мл THF в атмосфере аргона при температуре 60°С, добавляют 1,9 мл 1,5 молярного раствора n-бутил-лития в п-гексан. По истечении 15 минут присоединяют 500 мг соединения из примера е, абсолютно растворенного в 5 мл THF. По истечении 1 ч при 60°С добавляют 10 мл насыщенного раствора МаНСОз. После нагревания до комнатной температуры, раствор трижды экстрагируется с помощью ЕЕ, высушивается с помощью Na2S04H концентрируется. Путем хроматографии на селикагеле (LMEE) получают указанное в заголовке соединение. - R(f) 0,3 (ЕЕ); MS (FAB) 408 (M+1).

б) 2-метил-М-п-пропил-имидазол,

10 г 2-метил-имидазола нагреваются в 40 мл п-пропилбромида в течение 2 часов до кипения. Затем до 150 мл доливается 5-процентный раствор NaHSCU, раствор трижды экстрагируется с помощью ЕЕ, высушивается в помощью №2504 и концентрируется. Остаток растворяется в эфире и путем фильтрации отделяется от нерастворимого исходного материала. Таким образом получается указанное в заголовке соединение в виде бесцветного масла.

R(f) 0.2 (ЕЕ/СНзОН 10:1).

d) 3-Вос-циклогексилметил-2,2-диметил-5-(2-бромэтил)-оксазолидин.

К 690 мг З-Вос-15-циклогексилметил- 2.2-диметил-5-(2- гидроксиэтил)-оксазоли- дина, 2.6 г трифенилфосфина и 1,6 г

пиридинбромида в 15 мл CHaCte каплями при температуре 20°С в присутствии аргона добавляется 1,6 мл диэтилового эфира азо- дикарбоновой кислоты. После выдержки в течение 16 ч при комнатной температуре

5 добавляется вода и раствор разбавляется 100 мл CH2CI2- Органическая фаза дважды промывается насыщенным раствором ЫаНСОз и один раз раствором NaCI. Высушенная с помощью №2304 органическая

0 фаза концентрируется, остаток растворяется в небольшом количестве ЕЕ и фильтруется для отделения РРпз. Очищение на селикагеле дает указанное в заголовке соединение (LM6).

5R(f) 0,3 (LM6): MS 404 (M+1).

f) 3-ВОС-45-циклогексилметил-2,2-ди- метил-5-(2-гидроксиэтил) -оксазолидин.

10 г ВОС-АСНРА-ОС2Н5 в 500 мг р-толу- олсульфокислоты и 7,2 мл диметоксипропа0 на нагреваются в 160 мл толуола в присутствии аргона в течение 2 ч 80°С. Затем раствор концентрируется. Остаток при 0°С добавляется каплями к суспензии из 2 г LiA 1 Н4 в 200 мл THF. После выдержки в

5 течение 2.5 ч при 0°С добавляется 100 мл 5%-ного раствора NaHS04 и раствор экстрагируется трижды с помощью ЕЕ. Очищенные органические фазы промываются насыщенным раствором №НСОз. После вы0 сушивания с помощью N3204 раствор концентрируется и хроматографируется с помощью селикагеля (LM6).

R(f) 0,1 (LM6); MS (DCI) 342 (M+1). Пример 26. Цис-АСС-РЬе-Н1$-(15-цик5 логексилметил -28-гидрокси-5-(М-пропил-2- имидазолил))-пентиламид.

Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 18 способом из описанного в примере

0 25 соединения.

MS(FAB)717(M+1).

Приведены биологические испытания соединений по изобретению, 1. Принцип испытания.

5 Плазма человека, которая содержит как ренин, так и ангиотензиноген, например, инкубируется при 37°С с помощью испытываемого соединения. При этом из ангиотен- зиногена под воздействием ренина высвобождается ангиотензин 1, который затем может быть измерен с помощью стандартного радиоиммуноанализа. Это высвобождение ангистензина затормаживается с помощью ингибиторов ренина.

2.Получение плазмы.

Кровь получается от добровольцев (около Oi5 л на каждое лицо, прибор для взятия крови фирмы Азид Бонцунд Зон, Унтерш- лайсгейм) и собирается при охлаждении на льду в бутылки, в которых частично создано разрежение. Свертывание предотвращается путем добавления этилендиаминтетраук- сусной кислоты (EDTA) (конечная концентрация 10 миллимолей). После центрифугирования (ротор HS4 (Сорвалл), 3500 об/мин, 0-4°С, 15 мин; при необходимости повторяется) плазма осторожно отбирается пипеткой и замораживается соответствующими порциями при температуре -30°С. Для испытания используются только плазмы с достаточно высокой активностью рени- jpa. Плазмы с низкой активностью ренина активизируются путем обработки холодом (температура -4°С в течение 3 дней) проре- нин превращается в ренин),

3.Проведение испытания.

Ангиотензин 1 определяется с помощью ренин-маиа -кит (Senono Diagnostics S.A., Швеция), Инкубация плазмы проводится в соответствии с указанной там инструкцией:

Инкубационный состав; 1000 мкл плазмы (разморожена при 0-4°С), 100 мкл фосфатного буфера (рН 7,4), добавка моль рамиприлата), 10 мкл раствора РМ, 10 мкл .0,1% генапола PFIC, 10 мкм диметилсуль- фоксида или испытываемого преп арата.

Испытываемые препараты с концентрацией моль в 100% диметилсульфоксида и соответственно разбавляются диметил- сульфоксидом, инкубационная, исходная смесь содержит максимум 1 % диметил суль- фоксида.

Исходные смеси смешиваются в присутствии льда и помещаются для инкубации на 1 ч в водяную ванну (37°С). Из дополнительной исходной смеси без ингибитора отбирается без дальнейшей инкубации всего б проб (соответственно по 100 мкл) для определения исходного содержания ангиотензина 1 использованной плазмы.

Концентрации испытываемых препаратов выбираются таким образом, что перекрыт примерно диапазон подавления фермента в 10-90% (по меньшей мере пять .концентраций). В конце времени инкубации из каждой исходной смеси три пробы по 100 мкл в предварительно охлажденных сосудах Эппендорфа замораживаются на сухом

льду и хранятся при температуре около 25°С для определения ангиотензина 1

(среднее значение из трех отдельных проб).

Торможение очищенного почечного ренина человека.

Ангиотензин 1 применяется в следую- щей опытной смеси: 3,75 мкм ренин-субстрата, Asp-Arg-Val-Tyr-Je-Hls-Pro-Phe-Hls -Leu-Val-Je-Hls-Asn (Бахем АГ, Бубендорф, Швейцария), 0,24 мг альбумина бычьей сыворотки (сигма N; А-7638), 1,6 мм ЭДТА, 0,09 М фосфатного буфера, значение рН 7,5,1 мм фенилметйлсульфонилфторида, Генаполь (R) PF10 (в качестве детергента; Кальбиохем ГмбХ, Франкфурт, Германия) и почечный ренин человека, достаточный для получения около.3-5 нг ангиотензина 1 мл/ч.

Общий объем теста составляет 1,2 мл. Тест-соединения вводятся как растворы в димётилсульфоксиде (1 % конечная концентрация), Смешивание происходит при 0°С, детергент удаляется и 2 ч инкубируется при 37°С. После 40/80/120 мин берутся пробы 250 мкл и посредством нагрева выдержива- ются при 96°С в течение 2 мин.

Результаты испытания сведены в табли- це.

Проведенные испытания показали, что соединения, полученные описываемым спо- собом малотоксичны и обладают более высокой ренин-ингибирующеи активностью. Формула изобретения Способ получения производных дипеп- тидов общей формулы

. -.R2 ОН R,

|

RrW-A-B-NH-CH-CH-CH-Rt

где RI - (С4-Се)-циклоалкил, причем цикло- алкильный заместитель может быть амино- или (С1-С/))-алкоксикарбониламинозаме- щенным;

W--CO-;

R2 - (С4-С)-циклоалкил-(С1-С4)-алкил; Нз - водород или гидрокси;

R4-остаток общей формулы

-CH2-CH2-D

где D - 2-, 3- или 4-пиридиновый или 2-, 4-имидазольный остаток, которые могут быть замещены ()-алкилом.

А и В независимо друг от друга - связанный N-концом с R.1 или А. или С-концом с В, или с NH-CHR2-CHOH-CHR3-R4 радикал аминокислоты из ряда: фенилаланин, гисти- дин, тирозин, лейцин, изолейцин. валин, аланин, (м)-метилгистидин; о-метилтиро- зин,о-третбутилтирозин, норвалин, норлей- цин или фармацевтический приемлемых солей, отличающийся тем, что

подвергают взаимодействию кислоту RiWAOH или ее реакцонноспособное производное с H2N-B-NH-CH(R2)-CH((R3)R4, при необходимости, с последующим отщеплением временно введенных защитных групп и выделением целевого продукта в свободном виде или в виде фармацевтически приемлемых солей.

Назначение: в медицинской промышленности и медицине. Сущность изобретения: способ получения производных общей ф-лы R/-W-A-B-NH-CH(R2)CH(OH)-CH(R3)R4. где Р1-(С4-Сб)-циклоалкил, замещенный амино- или (С1-О)-алкоксикарбонилами- ногруппой, W -СО-, Р2()-ЦИклоалкил -(С1-С 0-алкил; , ОН; R4 ocTaTOK: CH2CH2-D, где , 3- или 4-пиридиновый или 2-, 4-имидазольный остаток, возможно замещенные (С1-С4)-алкилом; А и В независимо друг от друг означают связанный N- концом с R, или А, и С-концом с В или с NHCHR2CHOHCHR3R4 радикал аминокислоты из ряда: фенилаланин, гистидин, тирозин, триптофан, лейцин, изолейцин, валин. аланин. Ы(т)-метилгистидин, о-метилтиро- зин, о-трет-бутилтирозин, нйрвалин норлей- цин или их фармацевтически приемлемых солей. Реагент 1: кислота R WAOH или ее реакционноспособное производное. Реагент 2: N2NBNHCH(R2)CH(OH)CH(R3)R4, при необходимости, с последующим отщеплением временно защитных групп. 1 табл. СО

Реннин-ингибирующая активность описываемых соединений