Способ получения производных дипептидов или их фармакологически приемлемых солей Советский патент 1993 года по МПК C07K5/06 A61K37/02 

- Изобретение относится к получению биологически активных органических соединений и касается способа получения производных дипептидов, оказывающих тормозящее действие на природный фермент ренин и виральные аспартилпротеазы.

Согласно изобретению получают производные дипептидов общей формулы i ОR2 ОН

R f С-А-В- N Н - СН- СИ-СН2СН2СН 2 где RI - гетеро-(С1-С2)-алкил, гетеро-(С1 C2J алкоксигруппу, гетеро-меркапто-(С1- С)-алкил, причем гетеро означает 5-7-звенное моноциклическое кольцо, которое может быть ароматическим, частично

или полностью гидрированным, которое в качестве гетероатомов содержит атом азота и дополнительно гетероатом из группы азот, кислород, сера;

R2 (С4-С7)-Циклоалкил-(С1-С4)-алкил;

А и В независимо друг от друга означают связанный с RI или А - с концевым атомом азота и с В или NH-CHR2 CHOH-(CH2)3 - с концевым атомом углерода остаток аминокислоты из следующего ряда: фенилаланин, гистидин, метионин, норвалин или норлейцин,

а также их физиологически приемлемые соли.

Согласно изобретению указанные соединения получают взаимодействием фрагоо со о

СлЭ 00

W

мента с концевыми карбоксильными группами или его реакционноспособного производного с соответствующим фрагментом со свободной аминогруппой, при желании отщепляют введенную временно для защиты других функциональных групп защитную группу (или группы) и полученное таким образом соединение при желании переводят в его физиологически приемлемую соль,

Фрагменты соединения формулы I с концевой карбоксильной группой имеют формулы Ilia, Ills и lite:

ff-соон VC-MHDH,

ОО

1ИаШьШс

Фрагменты соединения формулы I с концевой аминогруппой имеют формулы IVa, IVenlVc: К2 ОН R3j

нгы-А-в-ын-сн-сн-сн-( щ

2 ОН R H2N-BHMH-CH-CH-CH-R4 уь

нгы-сн-сн-сн-РЦWcj

2 ОН R3

Предпочтительно для получения амид- ной связи используются следующие способы: Способ активного эфира с использованием N-оксисукцинимида или 1-оксибензотриа- зола в качестве эфирного компонента, сочетание с карбодиимидом, например дициклогексилкарбодиимидом, или ангидридом пропанфосфоновой кислоты и смешанный ангидридный метод с использованием пивалоилхлорида.

Для получения использующихся в качестве исходных соединений оптически активных аминов формулы IVc

$2 9Н -: HjN-ChbCH-CHsi

где R2 имеет указанные значения, в каче- стбе исходного материала берут оптически активные а-аминокислоты с центром асимметрии. Для получения такой аминокислоты, которая сохраняла бы центр симметрии, получают известным способом ее N-защи- щенный альдегид, который затем с помощью аналогичного альдольному присоединению способа сочетают с соответствующим гете- роалкильным структурным элементом. В результате, после отщепления М-эащитной группы, образуются аминоспирты формулы IVc.

Получают смесь диастереоизомеров относительно центра, связанного с ОН-груп- пой, которую затем разделяют известным

способом, например путем фракционной кристаллизации или хроматографии, на отдельные изомеры. Контроль чистоты диастереоизомеров осуществляют с помощью

высокопроизводительной жидкостной хроматографии, Чистоту энантиомеров можно контролировать известным способом путем перевода в Mosher-производные.

Аналогичную альдольному реакцию

0 присоединения к N-защищенным альдегидам аминокислот (предпочтительно с N-трет-бутоксикарбонильными и бензилок- сикарбонильными защитными группами) проводят в среде инертного по отношению

5 к основаниям растворителя, например эфира, тетрагидрофурана, толуола, диметил- сульфоксида; диметилформамида или диметоксиэтана.

В качестве оснований для депротониро0 вания гетероалкильных компонентов можно использовать ал когояяты щелочных металлов, такие как 0-трет-бутилат калия, метилат натрия, гидриды щелочных металлов, такие как гидрид натрия или калия, металлоорга5 нические основания, такие как н-бутилли- тий, втор-бутиллитий, метиллитий или фениллитий, амид натрия, а также соли щелочных металлов органических азотистых оснований, например диизопропиламида

0 лития.

Необходимые для получения соединений формулы I предварительные и окончательные операции, такие как введение и отщепление защитных групп, являются из5 вестными, Соли соединений формулы 1 с солеобразующими группами получают изве- стными способами, например путем взаимодействия соединения формулы I с основной группой со стехиометрическим

0 количеством подходящей кислоты. Смеси стереоизомеров, в частности смеси диастереоизомеров, образующиеся при использовании в качестве исходного материала рацемических аминокислот А или В, могут

5 быь разделены на отдельные изомеры известным образом, путем фракционной кристаллизации или хроматографии.

Под физиологически приемлемыми солями соединений формулы I понимают соли

0 как органических, так и неорганических кислот.

Соли соединений формулы I получают взаимодействием эквимолярных количеств соединений формулы (I) и пригодной кисло5 ты (соляной, серной, уксусной, малеиновой, винной и т.д.) или пригодного основания (гидроокиси натрия, калия, аммония, триэ- тиламин, морфолин и т.д) в инертном растворителе (ацетон, CHaClz, ЕЕ и т.д). Если соль не кристаллизуется, ее получают в

аморфном виде путем вымораживания водного раствора.

Предлагаемые в соответствии с настоящим изобретением соединения формулы I обладают способностью тормозить действие ферментов. В частности, они тормозят действие природного фермента ренина. Ренин представляет собой протеолитический фермент класса аспартилпротеаз, который в результате воздействия различных раздражителей (истощение объема, дефицит натрия, / -рецепторная стимуляция) выделяется в кровь юкстагломерулярными клетками почек. Там он отщепляет от выделяющегося из печени ангиотензиногена де- капептид ангиотензин I. Последний под действием Angiotensin converting ensyme (АСЕ) переводится в ангиотензии II. Ангиотензин II играет важную роль при регулировании кровяного давления, так как непосредственно повышает его за счет ан- гиоспазма. Кроме того, он стимулирует выделение альдостерона из надпочечников и увеличивает благодаря этому через торможение выделения натрия внеклеточный объем жидкости, что, в свою очередь, способствует повышению кровяного давления. Ингибиторы ферментной активности ренина способствуют снижению количества образующегося ангиотензина I, что приводит и к уменьшению количества образующегося ангиотензина II. Уменьшение концентрации этого активного пептидного гормона является непосредственной причиной снижения кровяного давления, вызываемого действием ингибиторов ренина.

Активность ингибиторов ренина может быть определена в опытах in vitro. Для этого определяют уменьшение количества образующегося ангиотензина в различных системах (человеческая плазма, очищенный человеческий ренин)..

1.Принцип испытаний.

К примеру, человеческую плазму, содержащую как ренин, так и ангиотензино- ген, выдерживают при 37°С с испытуемым соединением. При этом под действием ренина из ангиотензиногена выделяется в свободном виде ангиотензин I, количество которого может быть затем определено с помощью обычного радиоиммунного анализа. Выделение ангиотензина тормозится ингибиторами ренина.

2.Получение плазмы.

Берут кровь у добровольных пробандов (около 0,5 л у человека; прибор для взятия крови фирмы ASID Вопз and Sohn, UmeirschHibheim) и охлаждают ее льдом в частично вакуумированных склянках. Для предотвращения свертывания к крови добавляют ЭДТА (конечная концентрация 10 ммоль). После центрифугирования (Rotor HS4 (Sorvall). 3500 об/мин, 0-4°С; 15 мин; повторение в случае необходимости) плазму 5 осторожно отбирают пипеткой и замораживают подходящими порциями при -30°С. В опытах используют тольку плазму с достаточно высокой активностью ренина. Плазму с низкой активностью ренина активируют 0 путем обработки при низких температурах (-4°С, 3 дня) (прорёнин при этом переходит в ренин).

3. Проведение испытаний. Ангиотензин I определяют с помощью 5 набора Penin-Mala. Инкубацию плазмы проводят по приведенной в наборе инструкции. Смесь, подвергаемая инкубации:

1000 мкл плазмы (после оттаивания при 0-4°С)

0100 мкл фосфатного буфера (рН 7,4) с

добавкой 10 М Ramlprilat 10 мкл раствора PMSF 10 мкл 0,1 % Genapol PFIC 12 мкл ДМСО или испытуемого препа- 5 рэтэ

Испытуемые препараты растворяют в 100%-ном диметилсульфоксиде (ДМСО) и разбавляют ДМСО таким образом, чтобы конечная концентрация их равнялась . 0 Смесь для инкубирования должна содер- . жать не более 1% ДМСО. Приготовленные для инкубирования смеси смешивают со льдом и помещают на 1 ч для инкубации в водяную баню (37°С). Из дополнительной 5 смеси, не содержащей ингибитора, не проводя инкубацию, отбирают 6 проб по 100 мкл для определения исходного содержания аногиотензина f в используемой плазме.

Концентрации испытуемых препаратов 0 выбирают таким образом, чтобы перекрыть область примерно 10-90%-ного торможения фермента (как минимум 5 концентраций). В конце инкубирования из каждой смеси отбирают по три пробы по 100 мкл, 5 замораживают их в предварительно охлажденных сосудах Эппендорфа на сухом льду и сохраняют до определения ангиотензина I при температуре около -25°С (берут среднее значение из трех определений) 0 Радиоимунный анализ (RIA) ангиотензина I.

Анализ проводят точно по инструкций, . содержащейся в наборе RIA.

Калибровочная кривая охватывает 5 интервал концентраций энгиотензина I 02- 25,0 нг/мл. Исходное содержание ангиотензина I в плазме вычитают из всех измеренных значений. Активность ренина в плазме (PRA) выражают в нг Anq 1/мл.ч. Значения PRA в присутствии испытуемых

соединений соотносят со смесью, не содержащей ингибитора (100%), и выражают в % остаточной активности. Из графика зависимости % остаточной активности от концентрации (М) испытуемого препарата (логарифмическая шкала) определяют значения ICso.

Описанные в настоящем изобретении соединения общей формулы I оказывают тормозящее действие в опытах in vitro при концентрациях примерно - мол/л.

Ингибиторы ренина способствуют снижению кровяного давления у животных с пониженным содержанием солей. Поскольку человеческий ренин отличается от ренина других видов, то для опытов с ингибиторами ренина in vivo использовали приматов (игрунков, макак резус). Ренин приматов и человеческий ренин являются гомологами. Путем внутривенной инъекции фуросемида вызывают эндогенное выбрасывание ренина. Затем животных вводят испытуемые соединения и определяют их действие на кровяное давление и частоту сердечных сокращений. В результате опытов установлено, что соединения в соответствии с настоящим изобретением проявляют активность при внутривенном введении при дозе порядка 0,1-5 мг/кг, з при интрадуоденаль- ном введении через гастроскоп - при дозе около 1-50 мг/кг.

Описанные в настоящем изобретении соединения общей формулы могут использоваться в качестве средств, снижающих артериальное давление, а также для лечения сердечной недостаточности.

HlV-протеаза автокэталитически выделяется из GAG-POI -полипептида и расцепляет затем пептид-предшественник р55 на Согетантигены р17, р24 и р14. Она, таким образом, является важным ферментом, торможение которого прерывает жизненный цикл указанного вируса и препятствует его размножению.

В ходе биологических опытов установлено, что соединения в соответствии с настоящим изобретением оказывают тормозящее действие на ферменты, а также ингибируют вирусные ферменты, такие как HIV-протеа- зу. Особенно важное значение имеет их ингибирующее действие на HIV-протеазу, что позволяет использовать соединения в соответствии с настоящим изобретением для лечения и профилактики болезней, вызываемых инфекцией HIV. В опытах установлено, что предлагаемые в соответствии с настоящим изобретением соединения общей формупы I оказывают тормозящее действие при концентрациях порядка 10 - моль/л.

Соединение формулы I применяют для получения лекарственных препаратов для лечения высокого кровяного давления, застойной сердечной недостаточности, а также для лечения и профилактики вирусных заболеваний, в частности болезней, вызываемых HIV.

П р и м е р 1. М-(2-Аминотиазол-4-ил-аце- тил)-1 -Рпе Ц-1Чуа-(1-5-циклогексил-метил0 25-окси-5-{2-пиридил))-н-пентиламид.

100 мг М-(М-трифенилметил-2-аминоти- азол-4-ил-ацетил)-ЬРНе-1 -Муа-(1 -S-цикло- гексилметил-2-5-окси-5-(2-пиридил))-н-пен- тиламида перемешивали в течение 5 ч при

5 R.T. в смеси муравьиной кислоты и воды в соотношении 5:1. После этого отсасывали выпадающий осадок трифенилметанола, промывали его холодной водой и упаривали водный раствор в вакууме. Остаток раство0 ряли в уксусноэтиловом эфире и дважды промывали разбавленным раствором NaHCOs до нейтральной реакции, после чего промывали насыщенным раствором NaCI, высушивали на MgSO/i, отфильт5 ровывали от осушителя и упаривали. Выход 57 мг. Температура плавления: 87°С. MS(FAB): 664 (М++1).

П р и м е р 2. М-(Ы-трифенилметил-2-ами- но-тиазол-4-ил-ацетил)-1 -Рг1е-1 -Муа-(1-30 циклогексилметил-2-5-окси-5-(2-пиридил)) -н-пентиламид.

262 мг №-(М-трифенилметил-2-аминоти- азол-4-ил-ацетил)-1-фенилаланина растворяли с 81 MrHOBt, 109мг ОССи67мкл NEM

5 в 5 мл DMF и перемешивали раствор в течение часа при R.T. После этого добавляли к реакционной смеси 180 мг М-норвалин-(1-5- циклогексилметил-2-5-окси-5-(2-пиридил)) -н-пентиламида, растворенного в 2 мл DMF.

0 Смесь перемешивали в течение 48 ч при R.T. Затем ее разбавляли водой, отфильтровывали выпадающий осадок дициклогексилмоче- вины, а раствор упаривали в вакууме. Остаток растворяли в уксусноэтиловом эфи5 ре и трижды промывали насыщенным раствором МаНСОз, дважды насыщенным раствором NaCI, затем высушивали над MgS04 и упаривали. После хроматрграфи- ческой очистки на силикагеле (CHaCla/Me0 ОН 20:1) получали 210мг целевого продукта. Температура плавления: 75°С. MF(FAB): 906 (М++1). .

П. р и м е р 3. М-(М-Трифенилметил-2- аминотиазол-4-ил-ацетил)-1-фенила ланин

5 а). 3,2 г М-трифенилметил-2-аминотиазол-4- ил-уксусной кислоты. 1,34 г HOBt, 1,81 г DCC, 1,48 г L-Phe-Оме и 1 мл М-этилморфо- лина растворяли в указанной последовательности в 30 мл абсолютного DMF и перемешивали раствор в течение ночи. Ч ере: .ч 2Л ч реакционную смесь разбавляли небольшим количеством воды, отфильтровывали выпадающий осадок дициклогек- с и л мочевины и полученный раствор упаривали в вакууме. Остаток растворяли в уксусноэтиловом эфире и трижды промывали разбавленным раствором NaHCOa, дважды 10%-ным раствором лимонной кислоты и дважды насыщенным раствором NaCI. Органическую фазу высушивали над MgS04, после чего упаривали. После очистки с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с использованием в качестве подвижной фазы смеси циклогексана и ЕЕ получали 3.6 г метилового эфира в виде мае- лянистой жидкости.

в) 3,4 г полученного по пункту (а) метилового эфира в 30 мл смеси диоксана и воды в соотношении 1:1 перемешивали в течение 3 ч при R.T. с эквимолярным количеством 1-нормального раствора едкого натра. После этого из реакционного раствора удаляли в вакууме диоксан, подвергали его экстракции диэтиловым эфиром, водную фазу подкисляли до рН 3 и трижды подвергали экстракции уксусноэтиловым эфиром. Органическую фазу высушивали над MgS04, осу- шитель отфильтровывали, а раствор упаривали в вакууме. Выход бесцветного твердого вещества 2.7 г. Температура плав- ления 205-208°С.

Примера. N-трет-Бутоксикарбо.нил- норвалил-(1-5-циклогексилметил-2-5-окси- -5-(2-пиридил))-н-пентиламид:

2,1 г М-трет-бутоксикарбонил-норвали- на, 1,6гНОВг, 2,1 гОССи 1,4 мл N-этилмор- фолина растворяли в 50 мл абсолютного DMF. К приготовленному раствору добавляли при 0°С 2,6 г 2-3-амино-1-циклогексил-3- 5-окси-6-(2-пири дил)-гексана, растворенного в 5 мл DMF. Раствор перемешивали в течение 48 ч при R.T. После этого к реакционной смеси добавляли 5 мл воды, отфильтровывали ее от выпадающего осадка дициклогексилмочевины и разбавляли 150 мл уксусноэтилового эфира. Эту фазу трижды экстрагировали насыщенным раствором МаНСОз, дважды насыщенным раствором NaCI и дважды водой. Органическую фазу высушивали над MgSO/q и упаривали в вакууме, после чего подвергали хроматографии на силикагеле, используя в качестве подвижной фазы смесь CHaCte и МеОН. В результате получали 3,56 г продукта в виде вязкой маслянистой жидкости. Угол оптиче- ского вращения: -47.4° (с 1.135. метанол), MS (FAB): 476 (М+ +1).

П р и м е р 5.L-Nva-O-S-Циклогексилме- тил-2-5-окси-5-(2-пиридил)-н-пентиламид.

200 мг описанного в примере 1 соединения растворяли при 0°С в 3 мл трифгорукСуСНОЙ КИСЛОТЫ И ПРОВОДИЛИ paCTROpCHHf О

течение 30 мин. После нагревания до R.T. избыток трифторуксусной кислоты отгоняли в вакууме, остаток растворяли в уксусноэтиловом эфире и трижды подвергали полученный раствор экстракции разбавленным раствором МаНСО,э, Органическую фазу промывали насыщенным раствором NaCI и водой, высушивали над , отфильтровывали осушитель и упаривали. В результз те получали маслянистую жидкость. Полученное таким образом производное аминокислоты с защищенным концевым атомом азота очень быстро использовали для последующего синтеза. MS (FAB) : 376 (М++1).

П р и м е р 6. М-(5-4-Пиридил)-меркапто- ацетил)-1 -фенилаланин.

Целевое соединение получали из (4-пи- ридил)-меркаптоуксусной кислоты и метилового эфира L-фенилаланина описанным в примере 3 способом. Температура плавления 199-201°С. 1Н-ЯМР (60 МГц, dfi-DMSO): (,05 (2Н. СН2); 3.8 (2Н. СН2СО)4,5(м. 1Н. С-Н), 7,30 (с, 5Н, фенил); 8,0-8,7 (м. 4Н, пиридил) MS (DCI): 317 (М + 1).

П р и м е р 7. М-(3-(4-Пиридил)-меркэп- тоацетил)-1 -Рг е- --Муа-(1-5-циклогексилме- тил-2-5-окси-5-(2-пиридил))-н-пентиламид.

Целевое соединение получали из описанного в примере 6 производного фенила- ланина и описанного в примере 5 производного норвалина по примеру 2. MS (FAB): 674 (М+ +1).

Пример8. М-(2-Пиридил)-этоксикар- бонил-L-Phe-L-N va-0 H.

Целевое соединение получали из N-(2- пиридил)-этоксикарбонил-1 -фенилаланина и L-Mva-OMe по примеру За с последующим омылением сложного эфира в соответствии с примером Зв. MS (FAB) : 414 (М4 +1).

П р и м е р 9, №-(2-Пиридил)-этоксикар- бонил-Ь-Рг1е-1 -Муа-(1-5-циклогексилметил- 2-5-окси-5-(2-пиридил))-н-пентиламид.

Целевое соединение получали из описанного в примере 8 дипептида и 2-S- амино-1-5-циклогексил-3-5-окси-6-(2-пири дил)-гексэна по примеру 4. MS (FAB): 672 (М + 1).

П р и м е р 10. М-(3-Пиридил)-этоксикар- бокил-Ь-РЬе-Ь-Ыуа-(1-5-циклогексилметил- 2 -5-окси-5-(2-пиридил))-н-пентиламид.

Целевое соединение получали из N-(3- пиридил)-это)ссикарбонил-и-РКе и описанного в примере 5 соединения по примеру 2. Температура плавления 46--50nC. MS (i:AB): 672 (М+ + 1).

ПримерИ. 1 Н4-Пиридил)-этоксикар- бонил-1-Рг1е-1.-Муа-(1-5-циклогексилметил- 2-5-окси-5-{2-пиридил)))н-пентиламид.

Целевое соединение получали из N-(4- пиридил)-этоксикарбонил-1 -Рг1е и описан- ного в примере 5 соединения по примеру 2. MS (FAB): 672(М+ +1).

П р и м е р 12. Fmoc-His (Тгт)-(1-5-цикло- гексилметил-2-8-окси-5-(2-пиридил))-н-пен- тиламид.

1,2 г Fmoc-Hls (Trt)-OH, 340 мг HOBt, 445 г DCC и 0,3 мл NEM растворяли в 11 мл DMF и перемешивали полученный раствор в течение часа при R.T. Смесь затем смешивали с 580 мг 2-5-амино-1-5-циклогексил-3- 5-окси-6-(2-пиридил)-гексанэ, растворенного в 4 мл DMF, и перемешивали в течение ночи. После добавления 5 мл воды отфильтровывали выпадающий осадок мочевины, а фильтрат растворяли в 100 мл уксусноэтилового эфира. Органическую фазу трижды промывали насыщенным раствором МаНСОз и два раза расыщенным раствором NaCI, после чего высушивали над и после фильтрации упаривали в ва- кууме. Остаток подвергали хроматографии на силикагеле (CH2Cl2/MeOH). Выход целевого соединения 1,06 г. Температура плавления 85°С.

П р и м е р 13. H-His (Тгт)-(1-5-циклогек- силметил-2-5-окси-5-(2-пиридил))-н-пентил- амид.

500 мг описанного в примере 12 соединения растворяли в 5 мл абсолютного DMF вместе с 0,6 мл диэтиламина и перемешива- лм раствор в течение 20 мин при R.T. После этого растворитель отгоняли в глубоком вакууме, а остаток подвергали хроматографии на силикагеле, используя в качестве подвижной фазы смесь CHzCte и МеОН. В результате получали 320 мг целевого соединения.

MF(FAB); 656(M++1). П р и м е р 14. М-(2-Пиридил)-этоксикар- бонил-1-РЬе-1-Н 8(Тп)-(1-5-циклогексияме- тил-2-5-окси-5-(2-пиридил))-н-пентиламид.

157 мг 2-Pyoc-L-Phe 85 мг HOBt, 113 мг DCC и 70 мкл NEM растворяли в 5 мл DMF и полученный раствор смешивали с раствором 310 мг соединения, полученного в при- мере 13. в 3 мл DMF. Смесь перемешивали в течение 58 ч и далее процесс проводили так же, как в примере 12. В результате получали 265 мг целевого соединения. MS (FAB) :953(М4 + 1).

П р и м е р 15. М-(2-Пиридил)-этоксикар- бонил-1 -Рг1е-1-Н15-{1-5-циклогексилметил- 2-5-окси-5-(2-пиридил))-н-пентиламид.

115 мг соединения, полученного в соответствии с примером 14. перемешивали в

течение 1.5 ч с 2.5 мл трифторуксусной кислоты. После этого избыток кислоты удаляли в вакууме, а остаток растворяли в уксусноэ- тиловом эфире и нейтрализовывали разбавленным раствором ЫаНСОз. Эфирный раствор высушивали над MgSO, фильтровали и упаривали в вакууме. После хроматографии остатка на силикагеле с использованием в качестве подвижной фазы смеси CH2CI2 и МеОН получали 57 мг целевого продукта. Температура плавления 68°С. MS(FAB):710(M++1).

П р и м е р 16. 2-Руос-1-метионин.

6 г 2-(2-пиридил)-этил-п-нитрофенил- карбоната и 2,5 г L-Met-OMe растворяли в 60 мл ацетонитрила, смешивали полученный раствор с 1-нормальным раствором NaOH до достижения рН 8,5 - 9,0 и перемешивали смесь до окончания реакции (контроль с помощью тонкослойной хроматографии). Затем ацетонитрил отгоняли в вакууме и водный раствор реакционной смеси экстрагировали диэтиловым эфиром при рН 9, затем при рН 6 и после дальнейшего подкисления 1 н.НС при рН 3. В результате последней экстракции получали целевой продукт, который подвергали очистке с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюен- та смесь CH2CI2 и ЕЕ. Выход 2,43 г. 2,2 г полученной таким образом маслянистой жидкости растворяли в 30 мл смеси этанола и воды с соотношением 2:1 и смешивали с 585 мг твердого NaOH. Через 2 ч этанол отгоняли в вакууме, рН водного раствора устанавливали равным 3 и упаривали его в вакууме. Остаток смешивали с ацетоном и органический раствор отделяли от нерастворимых компонентов. После высушивания и упаривания раствора получали 1,89 г целевого соединения. Угол вращения щу -9,4° (, этанол).

Пример17. М-(2-Пиридил)-этоксикар- бонил-1 -Ме1-1 -Муз-(1-5-циклогексилметил- 2-3-окси-5-(2-пиридил))-н-пентиламид.

Проводили реакцию между 167 мг 2-Ру- oc-Met-OH и 190 мг соединения, полученного в соответствии с примером 5, по примеру 2. После описанной в этом примере переработки и хроматографии получали 64 мг целевого соединения. Температура плавления 104 - 105°С. MS (FAB) : 657 (М4 4-1).

П р и м е р 18. 4-Пиридилметил-4-нитро- фенилкарбонат.

20,3 г п-нитрофекилового эфира хлор- муравьиной кислоты растворяли в 150 мл абсолютного ChteCte и охлаждали раствор в атмосфере N2 до 0°С. К приготовленному раствору добавляли 520 мг 4-диметилэми- нопиридиня (D MAP) и зятем по каплям раствор tO г 4-оксиметилпиридина в 50 мл абсолютного CHaCla. Смесь перемешивали в течение ночи при R.T. и отфильтровывали выпадающие кристаллы, которые перекри- сталлизовывали из свежего CH2CI2 при вы- сокой температуре и после охлаждения снова отфильтровывали. Выход 17,5 г. Температура плавления 150-154°С.

П р и м е р 19. N-4-Пиридилметоксикар- бонил-Ьфенилаланин.

8 г 4-пиридилметил-4-нитрофенилкар- боната и 4,82 г L-фенилаланина растворяли в 350 мл смеси ацетонитрила и воды, взятых в соотношении 1:1, и смешивали раствор примерно с 45 мл 2 H.NaOH до достижения рН 10. Смесь перемешивали в течение ночи, после чего отгоняли ацетонитрил в вакууме. рН водного раствора устанавливали равным 6, трижды промывали раствор диэтиловым эфиром, после чего его рН устанавливали равным 1 и упаривали до получения твердого остатка. Этот остаток растворяли в воде, экстрагировали уксусноэтиловым эфиром, устанавливали рН равным 2 и отсасывали выпадающий осадок. Масса осадка после высушивания 7,3 г. Температура плавления 195-197°С.

Таким же образом, как в случае соединения, описанного в примере 19, получали следующие соединения.

Пример 20. М-(2-(К1-Фталимидил)-эток- сикарбонил)-1 -фенилаланин.

Температура плавления 65-72°С,

П р и м е р 21. Гидрохлорид М-(3-пири- дилэтоксикарбонил)-1 -фенилаланина.

Температура плавления 105°С,

П р и м е р 22. Гидрохлорид Ы-(2-пири- дил.этоксикарбонил)-1 -метионин-сульфона.

Температура плавления 48°С.

П р и м е р 23, М-(4-Пиридилэтоксикар- бонил)-1 -фенилаланин.

Температура плавления 196 - 204°С (с разложением).

П р и м е р 24. Ы-(М-трет-Бутоксикарбо- нил-4-пиперидил)-этоксикарбонил-1 -фенил- аланин,

MS(DCI):421 (М++1).

П р и м е р 25. М-(Н-трет-Бутоксикарбо- нил-2-пиперидил)-этоксикарбонил-1 -фенил- аланин.

Температура плавления 52°С.

П р и м е р 26. М-)2-4-Морфолино)-это- ксикарбонил)-1 -фенилаланин.

MS (DCI) : 323 (М+ + 1), температура плавления 66°С (сублимация).

П р и м е р 27. М-(2-(М-Метилпирроли- дин-2-ил)-эт.оксикар6онил)1--фенилаланин.

MS(DCI):321 (М 1).

П р и м е р 28. М-(2-{4-трет-Бутоксикар- бонилпиперазин-1-ил)-этоксикарбонил) фенилаланин.

MS (DCI): 421 (М + 1). температура плавления 85°С.

Таким же образом, как и в случае соединения, описанного в примере 17, получали следующие соединения:

П р и м е р 29.1Ч-(2-(М-Фталимидил}-эток- си карбон nn)-L-Phe-L- Nva-(i-S-циклоге ксил- метил-2-5-окси-5-(2-пиридил))-н-пентила- мид,

Целевое соединение получали из соединений в соответствии с примерами 20 и 5 по примеру 2.

Температура плавления 57-62°С; MS (FAB):740( 1).

П р и м е р 30. М-(3-Пиридилэтоксикар- бонил)-1 -РЬе-1 -Н 5-(1-5-циклогексилметил- -2-5-окси-5-(2-пиридил))-н-пентиламид.MS (FAB): 709 (М + 1).

П ри мер31. К1-(2-Морфолин-4-ил)-эток- сикарбонил-и-РЬе-Ь-Муэ-(1-5-циклогексил метил-2-5-окси-5-(2-пиридил))-н-пентила- мид.

MS(FAB):(M++1).

Пример 32. М-(2-(М-Метилпирроли- дин-2-ил))-этоксикарбонил)-1 -РЬе-1-Ы а-(1 -5-циклогексилметил-2-5-окси-5-(2-пири- дил))-н-пентиламид.

Температура плавления 115- 125°С; MS (FAB): 678 (М++ 1); Pg 0,52 (СН2С 2/СНзОН/ /Н20/СНзСООН 100/50/10/5).

П р и м е р 33. М-(2-(4-трет-Бутоксикар- бонилпиперазин-1-ил)-этоксикарбонил)-Ь- РЬе-1 -Муэ-(1-3-циклогексилмешл-2-3-окси -5-(2-пиридил))-н-пентиламид.

MS (FAB): 779 (М+ + 1).

Пример 34. М-(2-(2-Пиридил)-этокси- карбонил)-Ь-метионинсульфон-1-норвалин- (1-5-циклогексилметил-2-5-окси-5-(2-пири- дил))-н-пентиламид.

Температура плавления 79 - 81 °С: MS (FAB): 689 (М4 + 1).

П. р и м е р 35. М-(2-(М-трет-Бутоксикар- бонил-2-пиперидин)-этоксикарбонил) -1 -Муа-(1-5-циклогексилметил-2-5-окси-5- (2-пиридил)-пентиламид.

Целевое соединение получали из соединений в соответствии с примерами 5 и 24 по примеру 2.

MS (FAB) : -778 ( +1); температуре плaвлeни я 59 - 61°С.

П р и м е р 36. М-(2-(2-Пиперидил)-эток- сикарбонил)-ЬРЬе-1-Ыуа-(1-5-циклогексил- метил-2-5-окси-5-(2-пиридил)-пентиламид.

Целевое соединение получали из описанного в примере 34 соединения по примеру 5 с последующей хроматограФической очисткой на силикагеле.

MS (FAB) : 678 (M+ + 1); Rg 0,30 (CH2Ci2/MeOH, 9:1).

ft p и м е р 37. М-(2-(М-трет-Бутоксикар- бонил-4-пиперидил)-этоксикарбонил) е- -Муа-( -5-циклогексилметил-2-5-окси-5- (2-пиридил)-пентиламид,

Целевое соединение получали из соединений в соответствии с примерами 23 и 5 по примеру 2.

MS (FAB) : 778 (М+ + 1); температура плавления 65-72°С.

П р и м е р 38, М-(2-(4-Пиперидил)-эток- сикарбонил)-1 -Рпе-1 - Муа-(1-5-циклогексил- метил-2-5-окси-5-(2-пиридил)-пентиламйд.

Целевое соединение получали из описанного в примере 36 соединения по примеру 5 с последующей хроматографической очисткой на силикагеле.

MS (FAB) : 678 (М+ +1); Rg 0,22 (СН2С 2/метанол, 9 :1).

П р и м е р 39. М-(2-(М-трет-Бутоксикар- бонил-2-пиперидил)-этоксикарбонил) L- РНе-ЬН18-(1-3-циклогексилметил -2-S- -окси-5-(2-пиридил)-пентиламид.

Температура плавления 98°С (с разложением); MS (FAB) : 817 (М + 1); Rg 0,33 (СН2С12/СНзОН,9:1).

П р и м е р 40. М-(2-(2-Пиперидил)-эток- сикарбонил-Ь-Рпе-1 -Н1з-(1-5-циклогексйл метил-2-8-окси-5-(2-пиридил))-пентиламид.

MS(FAB):717(M++1).

Пример41. М-(2-Морфолин-4-ил)-эток- сикарбонил-1 -Рпе-1.-Н18-(1-5-цйклогексил- метил-2-5-окси-5-(2-пиридил))-пентиламид.

Температура плавления 70-81°С; MS (FAB): 718 ( 1); Rg 0,72 (СН2С12/СНзОН, 9:1).

П р и м е р 42. М-(2,2,5,5-Тетраметил-1,3- тиазолидин-4-ил-карбонил)-1 -фенилаланин- 1 -норвалил-(1-5-циклогексилметил-2-5-ок- си-5-{2-пиридил))-пентиламид.

Целевое соединение получали из соединения, описанного в примере 5, и N-(2,2,5,5,- тетраметил-1,3-тиазолидин-4-ил-карбонил) -L-фенилаланина по примеру 2.

MS FAB (: 695 (М4 + 1); Rg 0,51 (СНааа/СНзОН).

П р и м е р 43. М-(2-(4-трет-Бутоксикар- бонилпиперазин-1-ил)-этоксикарбонил -L- РЬе-и-Н1з-(1-5-циклогексилметил-2-5-окси- 5-(2-пиридил))-н-пентиламид.

Целевое соединение получали из соединений в соответствии с примерами 13 и 28 по примеру 2.

MS (FAB) : 817 (М+ + 1): температура плавления 82-89°С.

П р и м ё р 44. М-(2-Пиперазин-1-ил)- этоксикарбонил)-ЬРНе-ЬН18{1-5-циклогек- силметил-2-5-окси-5-(2-пиридил))-н-пентил- амид.

Целевое соединение получали из соединений в соответствии с примером 43 по примеру 5.

MS(FAB):717(M++1).

П р и м е р 45. М-Никотиноил-L-Phe-LН1з-(1-5-циклогексилметил-2-5-окси-5-(2- пиридил))-пентиламид.

Целевое соединение получали из М-ми- котиноил-и-фенилаланина и описанного в примере 5 соединения по примеру 14. Полученный таким образом продукт обрабатывали СРзСООН по способу в соответствии с примером 15. После хроматографической очистки получали 412 мг целевого соедине- ния.

MS(FAB): 666(М + 1); температура плавления 103-110°С; Rg 0,18 (CHaCla/CHaOH, 9:1).

Ниже представлены значения ICso для соединений согласно изобретению.

Пример 12,6

2160

71,4

90,7

100,22

11.0,24

152,0

1716

290,21

321,5

34520

350,16 (диастереомеры)

360,42 37 0,24

381,5

390,14

413,1

4222 43 1,9

441,6 . :451,7

По известному уровню техники описаны только соединения, структура которых зна- чительно отличается от структуры соединений по изобретению.

Известны пептиды, например, следующего типа:

Эти соединения содержат ВОС-защит- ные группы на С-конце молекулы и нециклическую группу на С-конце молекулы.

Вышеуказанное соединение имеет величину индекса 1Сбо)1.0 . Вследствие наличия ВОС-защишенной Фенилаланингруппы это соединение не ресорбируется орально.

Соединения из примере 35 данной заявки (ICso 0,16) в различных дозировках испытывали на Phesusaffen,

При дозе 24 кг/кг кровяное давление понижалось на 25% за 90 мин, что подтверждает активность соединений In vivo,

Соединения согласно изобретению содержат на N-концах молекулы менее липо- фильных -групп (гетероциклы), чем соединения по известному уровню техники.

Несмотря на наличие этих полярных остатков производные аминокислот, раскрытые в данной заявке, ресорбуруются орально.

Соединения по изобретению оцениваются как нетоксичные.

20

Формул а изобретен и я

Способ получения производных дипеп- тидов общей формулы I

ОR, ОН

.-

RfC-A-BiNH-CH-CH-CH2CHzCM2-f325

0

5

0

5

где RI -гетероЧС1-Са)-алкйл, гетеро-{С1-С2)- алкоксигруппа, гетеро-меркапто-{С1-С2)-ал- кил, причем гетеро означает 5-6-звенное моноциклическое кольцо, которое может быть ароматическим, частично или полностью гидрированным, содержащим в качестве гетероатома азот и дополнительно содержащим азот, кислород или серу;

R2 - циклоалкил-(С4-Ст}-алкил-(С1-С7);

А и В - независимо друг от друга обозначают остаток аминокислоты, связанной с RI или А с концевым атомом азота и с В или -NH(R2)CH-CH(OHXCH2)3 с- концевым атомом углерода, выбранный из группы: фени- лалаййн, гистидин, метионин, норвалин, или их фармакологически приемлемых солей, отличающийся теМ| что осуществляют взаимодействие соответствующих фрагментов, один из которых содержит концевую карбоксильную группу или его реакционно-способное производное, а другой фрагмент имеет свободную аминогруппу и, в случае необходимости, защитные группы удаляют и целевой продукт выделяют в свободном виде или в виде фармакологически приемлемой соли,

Использование: в медицинской химии при получении соединений, обладающих способностью ингибировать ренин. Сущность изобретения: способ получения производных дипептидов общей формулы R 1-C(0)-A-B-NH-CH(R2)CH(OH)CH2CH2 СН2рн-сн-рн С- где RI гетеро-(С1-С2)-алкил, гетеро-(С1-С2)алкоксигруппа, гетеро-меркап- то-(С.1-С2)-алкил, причем гетеро означает 5-6-звенное моноциклическое кольцо, которое может быть ароматическим, частично или полностью гидрированным, содержащим в качестве гетероатома азот и дополнительно содержащим азот, кислород или серу: R2 циклоалкил-()алкил-(Сг-С4); А и В независимо друг от друга обозначают остаток аминокислоты, связанный R или А с концевым атомом азота и с. В или- NH(R2)CH-CH(OH) (СН2)з с концевым атомом углерода, выбранный из группы: фенилаланин, гистидин. метионин, норва- лин, или их фармакологически приемлемых солей. Реагент 1: фрагмент, содержащий концевую арбоксильную группу или его реакционно-способное производное. Реагент 2: фрагмент, содержащий свободную аминогруппу. Полученный продукт, в случае необходимости, деблокируют. с/