СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭНТОМОПАТОГЕННОГО МАТЕРИАЛА ГРИБА BEAUVERIA BASSiANA Советский патент 1971 года по МПК C12N1/14 

Изобретение относится к производству микробиологических препаратов сельскохозяйственного назначеНИЯ и может быть использовано для изготовления энтомопатогенного препарата боверина.

Известны три способа выращивания гриба Beauveria bassiana для приготовления препарата боверина: поверхностный (получение конидиоспор), глубинно-поверхностный (получение мицелиальной массы глубинным методом с последующим разливом ее в кюветы для образования поверхностной пленки гриба с конидиоспорами) и глубинный метод (получение бластоспор и гонидий).

Первые два известных способа не могут иметь промышленного применения из-за потребности больщих производственных площадей для поверхностного выращивания и труд«ости сбора полученного биоматериала, а также засоренности воздуха, вызывающей аллергические заболевания. Третий способ выращивания гриба Beauveria bassiana позволяет получать энтомопатогенный материал в виде гонидий (куски мицелия) и бластоспор или эндоконидий (овальные, эллипсовидные образования). Он включает культивирование гриба Beauveria bassiana глубинным методом на аэрируемой жидкой питательной среде, которая содержит источники углерода, азота и минеральных солей. Культивированир

ведут при определенной температуре и определенном значении рН среды. Однако полученные по этому способу гонидий и бластоспоры или эндоконидий быстро теряют жизнеспособность при высушивании существующими методами.

Цель изобретения - получение методом только глубинного культивирования более устойчивого к высушиванию и к другим внешним воздействиям энтомопатогенного материала, содержащего конидиоспоры гриба Beauveria bassiana. Это достигается тем, что в питательную среду как обязательный компонент вводят соль хлористого кальция предпочтительно в количестве 0,75-5,0%.

Полученный методом глубинного культивирования энтомопатогенный споровый материал по морфологическим признакам и вирулентности не отличается от энтомопатогенного спорового материала, полученного при поверхностном и глубинно-поверхностном выращивании.

В результате применения предлагаемого способа выход сухой биомассы составляет около 4 г с 1 л культуральной жидкости, содержащей кояидиоспоры.

Пример. Посевной -материал для инокуляции готовят в виде суспензии конидиоопор в питательной среде с добавкой для осаждежидкости ТВИНа 80. Кояидирепоры предварительно получают выращиванием культуры гриба Beauveria bassiana на пшене или ячмене известным способом. Суспензию конидиоспор вносят Стерильно в ферментёр с предварительно простерилизованной питательной средой в составе, г1л:

Сахароза10,0-20,0

NaNOa3,0- 6,0

MgSOi-yHzO0,2- 0,5

КН2РО40,5- 1,5

СаСЬ-бНгО7,5-50,0

Выращивание культуры

25-

ведут при 28°С, начальном значении

4,2рН, равном

г О,

6,0 и аэрации, равной 0,52,0 -, , с варьл час

ированиам последней по мере роста и развития гриба.

Посевной материал и нробы .культуральвой жидкости в процессе ферментации проверяют на чистоту культуры и жизнеспособность получаемой споровой маосы.

Продолжительность ферментации в зависимости от состава среды, режима, роста культуры может варьировать от 80 до 104 час.

Биомассу отделяют от культуральной жидкаста фильтрованием на нутч-фильтре или фильтр-прессе. Технология последующей обра ботки пасты определяется формой применения препарата.

Использование глубинного метода получения энтомопатогенного материала гриба Beauveria bassiana, содержащего конидиоспоры, открывает возможность для широкого промыщленного производства препарата боверина.

Предмет изобретения

1. Способ получения энтомопатогенного материала гриба Beauveria bassian путем культивирования последнего глубинньщ методом на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и м.цнеральных солей, при 25-28°С, начальном значении рН 4,2-6,0 и аэрации среды, отличающий&я тем, что, с целью получения энтомопатогенного материала, содержащего конидиоспоры, в питательную среду как обязательный компонент вводят хлористый кальций.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что хлористый кальций вводят в количестве 0,75-5,0% (от веса среды).