ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ Советский патент 1973 года по МПК C12N1/00 

1

Изобретение относится к области сельскохозяйственной микробиологии.

Известны для производства глубинным методом многих препаратов, продуцентами которых являются микробы и грибы (энтобактсрин, дендробациллин, инсектин, боверин, многие антибиотики, ферментные нреиараты, культуры патогепных и непатогеииых микробов и грибов и др.) питательиые среды для выращивания микроорганизмов, содержащие (кроме минеральных солей и различных стимуляторов роста) в качестве источника углерода различные углеводы и в качестве источника азота кукурузный экстракт. Кукурузный экстракт является нестандартным, иестабильиым ири хранении и дефицитным продуктом.

Предложенная питательная среда отличается от известных тем, что для получения более высоких съемов биомассы при биологическом синтезе в иее дополнительно введены дрожжи.

В процессе проведенной паучно-исследовательской работы по изучению условий культивирования Bacillus thuringiensis и Beauveria bassiana, являющихся основой производства энтомопатогеииых, инсектицидных иреиаратов, установлено, что включение в регламентные среды сухих кормовых дрожжей (парафиновых, гидролизных или сульфитных) создаются

оолес благоприятные условия для развития микроорганизмов, чем в кукурузной или другой среде.

Кор.мовые дрожжи но своил питателып м свойствам облада от ценными качествами. Сухие дрожжи содержат 47-60% белка, 20- 4-0% углеводов, витамины груииы В, биотин, минеральные н другие соединення, необходимые для выращнваиия микроорганизмов. Кормовые дрожжи являются доступным, недефицитным нродукто.м, приготавливают их из неиищевого и некормового сырья, прнче.м они могут быть изготовлены в количествах, удовлетворяющих потребности микробиологической промышленности.

Для глубинного выращивания Bacillus thuringiensis var. galleriae, var. insectus и других разновндностей, a также Beauveria различных видов, предлагаетея жидкая питательная среда, содержащая: сухие кормовые дрожжи не менее 1%, крах.мал не менее 0,1%, либо продукты или субпродукты, содержащие полисахариды и другие углеводы не менее 1% (различного рода мука и отруби, солод, картофель, отходы мукомольного производства и другие отходы прп обработке сельскохозяйственных продук:тов), а также минеральные соли: хлористый натрий 0,2%, хлористый кальций 0,05%, хлористый или сернокислый марганец либо магний - 0,01%. рН среды 6,0-7,0. В зависимости от вида микроорганизмов и режима выращивания количество дрожжей и полисахаридов углеводов увеличивают, при этом минеральные соли не прибавляют, так как они содержатся в дрожжах. Кроме того, кормовые дрожжи рекомендуется использовать для выращивания микроорганизмов на поверхности твердой агаровой среды. Для этой же цели в среду прибавляют 2-3% агара, не менее 2% дрожжей и остальные компонент)., которые вносят в жидкую среду для глубинного выращивания.

Дрожжевая среда, разработанная на примере указанных микроорганизмов, являегся пригодной для выращивания других микрои.эв и грибов в средах, в состав которых взамен кукурузного экстракта введены дрожжи.

Для приготовления питательной среды применяют сухие кормовые дрожжи в виде суспензии (болтущки), содержащей цельные клетки и их оболочки. Вместо сухих дрожжей может быть -применена жидкая культура дрожжей (бражка), состоящая из дрожжевых клеток. Этот принцип использования кормовых дрожжей в нативном виде с целью выращивания микроорганизмов для пром.ыщленных целей является простым, дещевым и доступным. Однако, кормовые дрожжи в питательных средах могут быть использованы также в виде гидролизатов. В процессе выращивания дрожжевые клетки и их оболочки лизируются, что указывает на способность промыщленных микроорганизмов выделять гидролазные ферменты.

Дрожже-полисахаридная среда, испытанная в лабораторных условиях, в сравнении с кукурузно-глюкозной средой при производстве энтобактерина из Bacillus thuringiensis var. galleriae Isacova и инсектина из Bacillus thuringiensis var. inseitus Gucossian дает noвыщение урожайности и увеличение кристаллического эндотоксина больще, чем на 20%, а также увеличение термоустойчивого экзотоксина почти в 7 раз. По своей активности жидкая культура и полученный из нее препарат значительно превыщает требования, установленные в технических условиях на энтомопатогенные препараты. Производство энтомопатогенных препаратов с использованием дрожже-полисахаридной среды только на сырье дает экономию не менее 30%. В процессе изучения культуры Beauveria bassiana (Bals.) VuilL, полученной глубинным методом, установлено, что в отличие от других известных питательных сред в жидкой дрожже-полисахаридной среде, в течение

72 час при температуре 24-28° получают биомассу, состоящую в основном из конидиоспор (90-95%), которые по своим морфологическим свойствам и механизму образования не отличаются от конидиоспор, получаемых поверхностным, «воздущным способом. Количество живых спор в такой культуре накапливается не менее 1250 млн/мл. Вирулентность этой культуры для мух, выраженной в LCso, составляет 0,00016%, тогда как вирулентность

культуры из известной жидкой среды Сабуро по LCso равна 0,0089. Однако, основным отличием дрожже-полисахаридной среды является возможность получения спор наиболее устойчивых, чем гонидии и мицелий, что указывает

на перспективность использования дрожжевой среды для промышленного производства энтомопатогенного препарата боверина глубинным методом, который в отличие от поверхностного способа позволяет организовать механизированное, легко управляемое и контролируемое производство. При выращивании глубинным методом Beauveria bassiana в других известных средах образуется в основном гонидии, мицелий и небольщое количество спор

с титром живых морфологических элементов в два раза ниже, чем в дрожжевой среде, что является основным препятствие.м для организации промыпшенного производства боверина.

Пред мет изобретения

Питательная среда для выращивания микроорганизмов, включающая полисахариды в чистом виде или в виде продуктов илисубпродуктов, содержащих их, а также минеральные соли, отличающаяся тем, что,.с целью получения, более высоких съемов биомассы при биологическом синтезе, в нее дополнительно введены дрожжи.