СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭНТОМОПАТОГЕННОГО ПРЕПЛРАГ.ЛБОВЕРИНА Советский патент 1973 года по МПК C12N1/14 

Изобретеиие опюситси к способу получения эптомопатогенного препарата боверина, действующим началом которого являются конидии энтомопатогенного гриба Beauveria bassiana (Bals.) VnilL, и который используют в сельском хозяйстве для борьбы с вредиыми насекомыми, в частности колорадским жуком, яблоневой плодожоркой, кольчатым шелкопрядом.

Известен способ получения энтомопатогенного препарата боверипа па основе штамма грнба Beauveria bassiana (Bals.) Yuill. К-87. Штамм выделен из личппок колорадского жука, собранных в районе г. Ковеля УССР. При выращивании на сусло-агаре В. bassiana К-87 образует белые с кремоватым оттенком колонии. При выpaи Iвaиии иа жидкой кукурузпо-мелясспоГ среде В. bassiana образует белую комиактиую пленку, воздушные копндпп па илеике пачипают формироваться па 3-5-ый депь, копидии круглые, 3-5 мкм в диаметре. Г1родуктивность в поверхностной культуре па этой же среде не превышает 640 млрд/л (выход сухих конидий ие более 8 г1л при титре 70-80 млрд/г), что соответствует выходу 0,37-0,43 кг боверипа с титром 1,5 млрдг.

700 млрд/л (в отдельных случаях продуктивность колеблется от 500 до 2000 млрд/л), продуцирует значительиое количество гонидий (бластоспор), что отрицательно сказывается на качестве готового продукта. Глубиппые коппднп круглые, от 2,8 до 4,0 мкм в диаметре. Максимальпое количество глубиипых коиидий образуется через 70-90 час культивирования; вирулептность их соответствует 50%-пой смертности гусеииц яблоневой плодожорки и 60%-иой смертпостп лпчинок колорадского жука.

Основными недостаткамп способа получения эитомоиатогеипого препарата боверпна

на основе и тамма Beauveria bassiana (Bals). 4iill. являются продуктивность конидий, образование побочного продукта - гоннднй (бластосиор), срапинтелыю иевысокая ируле1ггность готового нродукта, длителыпз1Й период культивнровання, значительиыи расход CTepii.ibHoro воздуха в нернод разрастания мицелия.

Цель изобретеиия - повышешш выхода бо1 ерина и улуч1иепие его качества.

Согласио изобретению в качестве гриба берут штамм Beauveria bassiana (Bals.) uill. № 71661 (Украинский научно-исследовательский институт защиты растений), а культивирование ведут в течение 48-60 час рой устанавливают paBiioii )аствор1 -мости 0,4-0,1 г кислорода в 1 л среды в 1 час. Beauveria i)assiana (Bals.) Viiill. К° 71661 гялделеи из iriMaro вредной черепашкл, cofiраниГ)1х в Дол 111ском районе 1 11ровог)адскоп обл. Конп,а,ии В. bassiana ,N2 71661 одноклеточные, круглые, 1,8-3,1 . в диаметре, белые, в массе желтоватые; конндпеносцв собраны в мутовки, буты.тевидпые; коиидии образуются иа коротких стеригмах, расиоложепных на тонком конце конидиепосца; мицелнй бесцветный, сент11рованный, воздунпые в .массе бе.чые; пигмента нггамм не образует. Штамм В. bassiana 71601 на cyo.ioагаре образует CHepisa слегка пуншстые белые бугорчатые колоннн с ровным краем диаметром 2-5 Л1« (через 120 час роста), в нериод массового образования воздушных конндий колонии становятся мучнистыми, нрнобретая желтоватый оттенок. На жндкой среде Чаиека растет хороню, образу иа нове 5хности сред| нушнстую нлеику, на которой через 2-3 дня появляются коиидни. В глубинной кхльтуре в оргаио-синтетнческой среде В. bassiana JNo 71661 растет хороню: конидин слегка набухают, увеличиваясь J диаметре до 3-5 мкм, затем вынускают диаметрально два небольитих отростка, которые, разрастаясь, образуют мицел1И1; мнцелнй 3 Г) лгкм/ и ноиереч(и-1ке, длина 1Ч1ф обычно не иревьинает 120 мк к 30 час роста. Образование конидий нач И1ается через 20---25 час роста, снерва на утонченном конце коннднеиосца, затем иа боковых стеригмах i-; количестве 3 -7. К 48 час роста в r.-iy6nHiioi i ivy.ibтуре вегетативные клетки почти отсутствую г, имеются остатки конидие1юсцев и коннднн, размер KOTOpiiix от 1,8 до 3,1 .мкм в днаметре. 1-1иогда коиидии отдел иотся от конндненосцев вместе со стернгмами, в этом случае они имеют небольн:о11 «хвостик, которьн иосле высушивании 1 счезает. Редко наблюдается образование эндокоиидий: содержимое мицелия нереходит в иесколько видоизмененный конидненосец (тонюи конец конидиеносца более короткнй с закруг.тенным краем), внутрн которого образуется трн коннднн. В. bassiana 71661 хороню усваивает сахарозу, глюкозу, мальтозу, крахмал; арабтиозу, фружтозу, лактозу не ассим 1лнр -ет; г 1дролизует крахма.т, сахара не сбражнвает. Азот нитратов, органически азот амниокнс.тот и нентон усванваот хорошо, другие (|)ормы азота - хуже; белки г;|дролнзует c,:ia6o. В глубинной культуре растет нрн темнерат ре 16-34°С, онтимальная темнература роста и кониднеобразоваиия 28-29°С; оптимальиая интеисивность аэрации соответствует растворимости 0,4-0,1 г кислорода в 1 л среды в 1 час, повышенна иитенсивностн аэраинн не ириводит к увеличению скорости роста и продуктив1юсти кониднеобразовапия. Продолжительность глубинного культивирования при оит -;мальиых условиях - 48-60 час, ири этом выход сухой конндиа.чьиой массы составляет 8,5-13,8 г1л нри титре 120 -350 млрд/г, что соответствует выходу 0,7-2,5 /U стандартного иренарата боверина с 1 л. среды. В. bassiana Л9 71661 обладает высокой вир -лентностью но отношению к яб.(оиево плодожорке, колорадскому жуку -л кольчатому н елконряду, как поверхностные, так и глубиннЕле коиидии вызывают 70- 100%-ную гибель иасеком1з х. Способ иолучепия Э1Помоиатоге пю о иренарата бовер1И1а ири иснользоваиии в качестве |-риба И1тамма. Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. До 71661 в сравнегшн с известным иовысит выход боверина в 2-3 раза, еннзить выход побочного продукта - 1онидий, в 2-5 раз, иовысить В1 рулеитност1з конидн н актнвность боверина, сократить иродо.1 кнтельность гюлучеиия коиидии в 1,2-1,8 раз, снизить расход воздуха на аэрацию в 1,5-2,0 раза. Сравнительиые техиико-эко юмнческне иоказатели известного и иредлагаелгого сиособов приведены в таблице. 1 |рОД KTIIBHOill)КОНИДПРобразован , мл)д/.г Выход боверипа с титром 1,5 млрд/г, кг/.г Производительное Г) КОНИдиеобразовапиямлрд// час Выход 1юбоч11О|-о 11|)од 1чTa-ioiiiLuiii, ii к |;ыход коппдин Продолжительное ) культивирования, (ОС Расход воздуха па аэрацию 1 л еред,1 в 1 часСмертность, %, гуееи11 1 яблоневон плодожорки V возраста иа 20-ый день рн дозе снор на особь: 100 тыс 10 млн. Смер 1;ОСТЬ КО. 0раде -;о о жука IV возраста ири дозе 10 . в 1 мл, % С.ерТ 10СТЬ KO. jчатого шслко ряда ip обработке 0,05%-поп сччИ(Из1 еГ Hi)) бовс|):iii;; на 20-ii дс1Н,. Сиособ ио, учеиия эитсмоиатогенного иреиарата ,ерина ла (jcHoiic 1Ц|-а.мма В. bassiana ЛЬ 71661 анробнрован в лабораторных условиях. Пиже ир1 ведены резул15таты этих исиытанн. П |) и м е р 1. Глубинное культ внрованне В. bassiana 71661 вели в среде, содержащей, %: сахара 2, азотнокислого натрия 0,5. фосфорнокислого калия 0,5, сернокислого

при аэрации, соответствующей растворимости 0,1 г кислорода в 1 л среды в 1 час. Конидии отделяли от культуральной жидкости сеиарированием и высушивали при температуре 32°С. Выход конидий с 1 л среды составил 13,8 г при титре 213,3 млрд/г, что соответствует выходу 1,96 кг/л препарата боверииа; содержание побочного продукта-гонидий 14,3%.

Пример 2. Глубинное культивирование В. bassiana № 71661 вели в среде аналогичного состава в течение 60 час при интенсивности аэрации 0,4 г Ог/л час. Выход конидий составил 3852 млрд/л (вес 10,7 г при титре 367 млрд/г), количество гонидий было 7% от

выход боверина

количества конидии; 2,52 кг/л.

Предмет изобретения

Способ получения энтомопатогенного препарата боверина, включающий культивирование гриба Beauveria bassiana (Bals.)

Vuill., отличающийся тем, что, с целью повышения выхода боверина и улучшения его качества, в качестве гриба берут щтамм Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. N° 71661 (Украинский научно-исследовательский институт защиты растений).