ШТАММ ГРИБА BEAUVERIA BASSIANA (BALS) VUILL BKM F-3732D, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЭНТОМОПАТОГЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ Российский патент 2001 года по МПК A01N63/04 C12N1/14 C12N1/14 C12R1/645 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано в производстве энтомопатогенных препаратов против вредителей сельскохозяйственных растений и леса.

Одним из способов борьбы против сельскохозяйственных вредителей, таких как колорадский жук, яблонная плодожорка, боярышница, саранча и др., является применение энтомопатогенного препарата, например боверин, основу которого составляют живые споры гриба Beauveria bassiana.

Известный штамм гриба вида Beauveria bassiana (А.С. N 1688820) предназначен для поверхностного культивирования, которое менее технологично, чем глубинное культивирование.

Целью изобретения является получение штамма энтомопатогенного гриба, обладающего повышенной продуктивностью жизнеспособных конидий и способного проводить глубинный режим ферментации.

Штамм получен в результате направленной изменчивости продуктивности наиболее активной культуры, выделенной из природных источников в местах массовой гибели насекомых в условиях сибирского региона.

Штамм Beauveria bassiana депонирован в коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов РАН в г. Москве под номером ВКМ F-3732 D.

Штамм Beauveria bassiana BKM F-3732 D характеризуется следующими культурально-морфологическими признаками.

При выращивании на твердой агаровой среде сусло (1:3) при температуре 27+1^oC в течение 10 суток образует колонии округлой формы, непрозрачные, конидиальный слой меловой консистенции белого цвета, пигмент не образует.

Морфологические признаки штамма:
При культивировании на жидкой питательной среде гифы разветвлены, сегментированы, высыпание конидий на 3 суток при температуре 27+ 99%, конидии шаровидны.

Гриб растет при температуре 12-34^oC (отптимум 27+1^oC).

РН-5,0-7,0 (оптимальный 5,0-5,6)
Физиологические признаки:
В качестве источника азота используют пептон, казеин, рыбо-костную муку, мясной бульон, дрожжи и их гидролизаты, нитриты, кукурузный экстракт.

Отношение к источникам углерода:
Усваивает сахарозу, глюкозу, лактозу, мальтозу, фруктозу, рамнозу, арабинозу, крахмал. Не усваивает целлюлозу. Крахмал гидролизует.

По отношению к кислороду - гриб аэроб.

Фаги не выявлены.

Продуктивность штамма на твердых субстратах (пшено) до 5,1 млрд сп/г субстрата, на жидких питательных средах до 2,0 млрд сп в мл.

Штамм хорошо хранится на сусло-агаре при температуре 4-6^oC или в колбах на пшене при комнатной температуре в течение 1,5-2 лет.

Пример 1.

В жидкую питательную среду следующего состава, %:
Меласса - 7,0
Кукурузный экстракт - 1,2
Сернокислый магний - 0,1
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,2
Масло растительное - 0,5
pH - 5,6-6,2
вносят не менее 0,5% оживленного с пшена посевного материала и ведут ферментацию при перемешивании, постоянной подачи воздуха 0,4-0,8 л/л среды в мин при температуре 26-28^oC, в течение 72-96 часов до образования конидий и спор (начало лизиса). Титр спор 2.2 млрд/мл среды.

Пример 2.

На питательной среде следующего состава в %:
Меласса - 5,0
Кукурузный экстракт - 1,0
Магний сернокислый - 0,005
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,1
рH - 6,4-6,5
посевом с пшена выращивают посевной материал в течение 24 часов и в количестве 10-15% (инокулят) подают в питательную среду, аналогичную примеру 1, и проводят культивирование при постоянном перемешивании, температуре 26-28^oС, расходе воздуха 0,8 л/л среды в мин в течение 28-35 часов до получения сетки с конидиями.

Полученную культуральную жидкость (к.ж) анализируют по продуктивности, биологической активности и термоустойчивости.

Результаты оценки, представленные в таблице, значительно превосходят по своим свойствам известный штамм К-87 и позволит получить более концентрированные формы энтомопатогенного препарата.

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается нового штамма, используемого для получения энтомопатогенных препаратов. Штамм Beauveria bassiana (Bals) Vuill получен в результате направленной изменчивости природных микроорганизмов и депонирован в коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов РАН под ВКМ F-3732D. Обладает повышенной продуктивностью по сравнению с известным штаммом в условиях глубинного режима ферментации - 1,2-2,0•10⁹ сп/мл. При выращивании на твердой питательной среде его продуктивность составляет 2,2-5,1•10⁹ сп/г. Биологическая активность культуральной жидкости штамма при внесении с кормом, определяемая по гибели личинок саранчи, составляет 72-92%, а при внесении в почву - гибель кубышек саранчи составляет 69-92%. 1 табл.

Штамм Beauveria bassiana (Bals) Vuill ВКМ F-3732D, используемый для получения энтомопатогенных препаратов.