Известен способ обнарул ;ения олигосахаридов с применением раствора антрона, а также способ его выделения, заключающийся в том, что к солянокислым растворам олигосахаридов после их хроматографического разделения добавляют избыток карбоната свинца, доводя рН до 4-5. Смеси фильтруют, фильтраты обрабатывают сероводородом, снова фильтруют и удаляют избыток сероводорода, пропуская через каждый раствор ток азота. Полученные растворы унаривают в вакууме. Однако известный способ громоздок и требует большой затраты труда и времени. Поскольку злюирование с колонки производится соляной кислотой, концентрация производится соляной кислотой, концентрация которой к концу процесса становится довольно высокой (2,5 м и выше), то соляная кислота оказывает гидролитическое действие на олигосахариды, что приводит к загрязнению индивидуальных олигосахаридов.
Цель изобретения - упростить процесс и повысить чистоту целевых продуктов.
Этот же способ может быть применен для обнаружения олигосахаридов. В основу положен принцип-осаждение олигосахаридов из раствора. При добавлении ацетона к фракциям в случае присутствия олигосахаридов наблюдается помутнение раствора.
Уже .чисто визуального наблюдения достаточно, чтобы определить в каких фракпиях вещество содержится и в каких его нет. Кроме того нефелометрическое измерение на
фотоколориметре позволяет оценить количественное распределение веществ во фракциях. Предлагаемый способ позволяет быстро обиаружить все углеводы до пентасахарида. Обнарул :енне моносахарида предлагаемым
способом требует несколько больше времени, так как он не образует мутной суспензии, а медленно выпадает в кристаллическом виде. По поскольку соляная кислота (концентрация 0,5 н.) не вызывает изменений Д-глюкозамина,
то эта задержка не является существенной. Выделение олигосахаридов из растворов основано на осаждении их ацетоном. Выделение дисахарида из раствора ацетоновым осал :дением осуществить не удается, так как вещество образует очень устойчивую коллоидную суснензию, которая не коагулирует при добавлении избытка безводного ацетона. Выделение дисахарида достигается осторол ным упариванием раствора на роторном испарителе. Как
показывают хроматографический и электрофоретический анализы, дисахарид удается получить достаточно чистым. Препарат дисахарида содерл :ал лишь Следы Д-глюкозамина, образующегося, видимо, в результате гидролиные фракции полностью однородны. Из всех пяти фракций, только дисахарид гигроскопичен, остальные не изменяются при хранении на воздухе.
Пример. 1,2 г сухого гидролизата хитозана растворяют в 100 воды, полученный раствор пропускают через колонку со смолой Дауэкс 50X4 (Н+, 1,6X40 см.}, колонку промывают 0,03 н. соляной кислотой (250 мл}, и вещества элюируют градиентом соляной кислоты. Для достижения градиентного элюирования в смеситель помещают 200 мл 0,3 н. соляной кислоты, а в предсмеситель - 200 мл 3,5 н. соляной кислоты. Объем фракций составляет 2,5 мл, скорость 2 мл1мин, общее время для разделения первых 5 олигосахаридов составляет 3 час. Для обнаружения веществ во фракциях из каждой фракции отбирают 0,2 мл раствора в пробирки и туда же добавляют по 5 мл безводного ацетона. Наличие вещества во фракции обнаруживают по выпадению осадка (обычно мгновенное помутнение раствора, в случае моносахарида - медленное выделение кристаллического осадка). Фракции, в которых есть вещество, собирают вместе соответственно для каждого олигосахарида и для выделения веществ из растворов к растворам (кроме раствора дисахарид а) добавляют ацетон до общего объема 0,5 л. Для быстрой коагуляции трисахарида целесообразно пользоваться безводным ацетоном, для коагуляции тетра- и пентасахаридов использование безводного ацетона не обязательно. Скоагулировавщие осадки оседают на дно, жидкость декантируют, а вещество промывают несколько раз безводным ацетоном с
последующей декантацией и высушивают. Дисахарид выделяют осторожным упариванием раствора в вакууме. Полученный желтый,, гигроскопичный порощок очищают осаждением из спиртового раствора ацетоном. Характе ристика и выход выделенных веществ приво дится в таблице.
Хроматография проводилась на бумаге 227 «М в системе бутанол-пиридин-вода (6:4:3).
Предмет изобретения
Способ выделения олигосахаридов - фрагментов хитозана из водных растворов, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса и повыщения чистоты целевых продуктов, раствор олигосахаридов обрабатывают ацетоном.
