СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АМИНОКИСЛОТ Советский патент 1972 года по МПК C12P13/04 C12P13/22 

Изобретение относится к микробиологической промыгиленпости.

Известеи способ получения аминокислот, например L-триптофана, путем глубинного культивировапия продуцентов при аэрации па питательной среде, содержащей источники углерода, азота и бнологическп активные вещества, в две стадии с последующим отделением биомассы от культуральпой жидкости и выделением в конце второй стадии а.мниокислоты.

Цель изобретения - нолучение аминокислот при полном освобождеипи микробных клеток от культуральиой с)эеды.

Это достигается тем, что осуществляют отбор всей культуральпой среды мпогократио после иакоплепия требуемого количества биомассы и замену ее свежей средой, содержащей трансформируемое вещество.

Для улучшения пропицаемости оболочек клеток после отбора культуральиой среды биомассу обрабатывают растворителем, папрпмер ,етоиом.

В процессе вырапщванпя воздух подают вначале при повыщенпом давлеппи, преимуществеиио равном 6 атм, а затем при понижеппом, преимущественно равном 0,001 атм.

В первой стадии ироизводят максимальное иакоплепие биомассы, а во второй - биос1П1тез L-трпптофаиа. В лабораторном колсипюм ферментере культивирова1И1я продуцент /.-триитофапа-Candida ulilis 295-/.

Готовят пптательную среду следующего состава, :

85,0 (47,2% сахара)

Меласса Фосфат калия

0,1

д R у 3 а м е ще и н ы и Сульфат магния 0,05 Xлорнетыи

0,1

кальций

5,0 Мочевина Вода

до 1 л

Мелассу и мочевину стерилизуют отдельпо в течеиие 20 мин при 0,75 атм, а минеральную среду - 30 мин при 1 атм; рМ среды устанавливают 7,5-8,2.

Candida utilis 295-/ помещают в колбы круговой качалки для размиожсния культуры. Максимальное накопление биомассы нроводят в простерилизованных ферментерах с ги1тательной ередой для осуществления глубщпюго культивирования. Количество засевиого материала составляет ие меиее 8% абеолютио сухой биомассы от коицеитрации иерерабатываемого сахара.

Температура ферментации 28-30° С, рн 7,5-8,0. Интенсивность аэрации не менее 120 мг О2/Л мин (сульфитный метод).

Культивирование ведут ири двух нонеременно меняющихся режимах аэрации - ири иовышенном давлении воздуха, нреимуществеино равном 6 атм, и ири иониженном давлении до 0,001 атм. Период изменений режимов 15 сек.

После размножения необходимого колнчества биомассы (не менее 18 г/л абсолют 1о сухого вещества дрожжей) концентрацня ее иовышается иутем фильтрации до 120-150 г/л, носле чего вводят 5%-ный сниртовой раствор антраниловой кислоты (через каждые 3 час), 10%-ный раствор сахара (через каждые 24 час) и 5%-ный раствор мочеви 1ы (для ноддержання онтимальиого рП).

В теченне ироцесса траЕюформации ноддерживается /(„ 60-10 мг1лм1ш, температура 30° С, рП 7,5-8,2. Через 96-120 час осуществляют отбор культуральной жидкости, содержащей 5-6 г/л L-тринтофаиа, после чего в ферментер добавляют новую питательную среду, содержащую синтезируемое вен1,ество.

Биосинтез осуществляется но принципу противотока, коптактируя свежую питательную среду со старой биомассой и наоборот. Клетки Candida utilis 295- снособны трансформировать антраниловую кислоту в течение 3-4 циклов возобновления среды.

С целью улучшепия проницаемости оболочек клеток после отбора культуральиой среды биомассу обрабатывают одним из растворителей, например ацетоном, при непрерывной аэрации, а затем иодают новую нитатсльную среду, содержащую синтезируемое вещество.

Предлагаемый способ позволяет увеличить выход L-триптофаиа до 25% от его общего выхода.

Предмет изобретения

1.Способ полученпя аминокислот, нанример L-триптофаиа, нутем глубинного культивирования продуцирующих их микроорганизмов при аэрации на питательпой ереде, содержаП1,ей источиикн углерода, азота и биологически активные вещества, в две стадии, на первой из которых нроизводят максимальное накоплепие биомассы, а на второй - си1ггез аминокислот с последующим отделением биомассы от культуральной жидкости и выделением на второй стадии аминокислот, отличающийся тем, что, с целью возможности иолучения амииокиелот при полпом освобождеиии микробиых клеток от культуральиой среды, в период паконления требуемого количества биомассы иа первой стадии осуществляют многократно отбор всей культуральной среды и замену ее свежей средой, содержаи1,ей трансформируемое вещество.

2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что, с целью улучшения проницаемости оболочек клеток, после отбора культуральной среды биомассу обрабатывают растворителем, например ацетопом.

3.Споеоб по п. 1, отличающийся тем, что режим аэрации изменяют в нроцессе культивирования, иодавая воздух виачале под повыи енным давлением, преимущественно равным 6 атм, а затем - нри пониженном, нреимуП1сствеиио равном 0,001 атм.