ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ ПРОДУЦЕНТА ВИТАМИНА BIS PROPIONIBACTERIUM SHERMANII Советский патент 1973 года по МПК C12N1/20 C12P19/42 

1

Изобретение относится к области микробиологической нромышленности, а точнее - к питательным средам для вырапдивания продуцента витамина Bi2 Propionibacterium shermanii.

Известна питательная среда для выращивания продуцента витамина Bi2 Propionibacterium shermanii, содержащая глюкозу, сернокислый аммоний, кукурузный экстракт, хлористый кобальт.

Предлагаемая питательная среда содействует увеличению выхода продукта и стабилизации pJH среды. Это достигается тем, что питательная среда дополнительно содержит фосфат-лимонный буфер в концентрации 0,1-0,8 М.

Пример. К 16,47 мл 0,8 М Na2HPO2-2H2O (142,4 г/л) приливают 3,53 мл 0,4 М (84 г/л) лимонной кислоты (СбН8О7Н2О), рН при этом 7.

Любую питательную среду, например, следующего состава (в %): глюкоза 4, кукурузный экстракт 4 (по сырому весу), (NH4)2SO4 0,3, NaHPO4-2H2O 11,75, лимонная кислота (СбН8О7Н2О) 1,48, СоСЬ 10 (мг/л), готовят, взяв все компоненты среды в двойной концентрации; затем их растворяют в воде, нейтрализуют и сливают с приготовленным буфером в соотношении 1:1. При этом получают среду, содержащую 0,4 М фосфат-лимонный буфер. Применяемая концентрация лимонной кислоты обеспечивает элективность среды.

Культивирование бактерий проводят на

среде, принятой в производстве витамина Bi2. ио приготовленной на фосфат-лимонном буфере (0,4 М) как описано выще. Состав среды следующий (в %): глюкоза 4, (NH4)2S04 3, кукурузный экстракт 4, CoCl2

10 (мг/л).

Образование витамина Bi2 и биомассы сравнивают при развитии культуры на этой же среде (но приготовленной на водопроводной воде) с нейтрализацией кислот бикарбонатом натрия и без нейтрализации кислот.

Полученные результаты представлены в табл. 1.

Из данных, представленных в табл. 1, следует, что использование буфера приводит к

накоплению биомассы и витамина Bi2 в том же и даже большем количестве, чем на производственной среде с нейтрализацией кислот. Так, при нейтрализации кислот образуется 10,9 мкг/мл витамина , а при

использовании фосфат-лимонного буфера 13 мкг/мл.

В случае необходимости емкость буфера может быть изменена путем изменения концентраций входящих в него компонентов (см.

табл. 2).

3

Накопление иитамина В,., и биомассы в зависимосш культивирования бактерий

Условия культивирован я

366739

При добавлении 0,4 Л фосфат-лимонного буфера

При нейтрализации бикарбонатом натрия

Без добавления буфера и бикарбоната натрия

Данные табл. 2 показывают, что при увеличении концентрации буфера до 0,6 М рН не падает ниже 6,5 в течение трех суток. При использовании 0,4 М буфера рН не падает ниже 6, следовательно, нет необходимости в добавлении щелочи, как по известному способу.

Количество биомассы и виталпша Bi2, обраИзменение рН, накоцление витамина В и биомассы в зависимости от концентрации буфера При добавлении буфера ни разу не наблюдалось заражения культуры посторонней микрофлорой. Более того, при инокулировании различных сред смешанной культурой пропионовых бактерий и споровой микрофлорой на- 10

Изменение рН, накопление витамина 8,2 и биомассы в зависимости от условий

культивирования бактерий

зованное к пятым суткам развития культ ры во всех вариантах опыта и в контроле примерно одинаковое (количество биомассы в контроле 7,41 г/л и витамина Bi2 9,0 мкг/мл). Буфер 0,6 М несколько удлиняет лаг-фазу, поэтому лучше использовать буфер 0,4 М концентрации.

Таблица 2

Таблица 3 блюдалось развитие только иропионовых бактерпи. Рост споровых форм был подавлен, На производственной среде состава, оиисаниого выше, приготовленной на фосфат-лимонном буфере 0,4 М, получены результаты, приведенные в табл. 3.

Как видно 113 табл. 3, фосфат-лп.моннып буфер создает благоприятные условия для развития культуры и образования витамина Bi2. В течение первых трех суток рН не падает ниже 6,0, в то время как в варианте без добавления буфера и щелочи рН падает до 4,8, что приостанавливает развитие культуры. Выход витамина Bi2 и биомассы на среде с добавлением буфера выше, чем в случае нейтрализации кислот бикарбонатом.

П р с д м е т и 3 о б р е т е н и я

Питательная среда для выращивания продуцента витамина Bi2 Propionibacterium shermanii, содержащая, вес. %: глюкозу 4, сернокислый аммоний 0,3. кукурузный экстракт 4, хлористый кобальт 10 (мг1л}, остальное вода, отличающаяся тем, что, с целью увеличения выхода продукта и стабилизации рН среды, она дополнительно содержит фосфат-лимонный буфер в концентрации 0,1-0,8 М.