СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МИКРОСКЛЕРОЦИЕВ Советский патент 1974 года по МПК C12N1/14 

1

Изобретение относится к технической микробиологии, в частности к способам культивирования микроорганизмов, и может быть использовано для получения микросклероциев фитопатогенных грибов.

Известен способ получения микросклероциев путем выращивания фитопатогенных грибов Vertidllium dahliae на стерилизованном овсе.

Цель изобретения - интенсификация процесса получения микросклероциев и повышение выхода целевого продукта.

Это достигается путем выращивания гриба V. dahliae глубинно на жидкой питательной среде, в состав которой в качестве основного компонента вводят картофельную мезгу в количестве 0,5-5,0%, а в качестве дополнительного источника азота - 0,1-0,5% рыбной муки.

Пример. Исходный штамм V. dahliae, выращенный в пробирке на агаризованной среде Чапека, переносят в колбу емкостью 750 мл, содержащую 150 мл стерильной жидкой питательной среды - кукурузная мука 1% рыбная мука (казеин, альбумин) 0,2%, КН2РО4 0,1%, КС1 иМе8О4-7Н2О по 0,05%,рН 7,5 (до стерилизации), и выращивают на качалке (180-220 об/мин) в течение 24 час при 24-26°С.

При необходимости получения инокулюма в больших количествах полученной культурой засевают бутыль емкостью 5 л, содержащую 1 л аналогичной питательной среды, и продолжают выращивать при тех же условиях. Полученным таким образом посевным материалом инокулируют малый ферментер емкостью 50-100 л. Норма засева 5-10%. Культивируют на среде - мезга картофельная

1,5% (крахмал 1%), рыбная мука 0,1%, КН2РО4 0,1%, КС1 и MgSO4-7H2O по 0,05% - при 24-26°С с аэрацией воздуха 0,1 - 0,5 об/мин и непрерывном перемешивании при давлении в аппарате 0,5-0,7 ати в течение

24 час.

Производственное выращивание культуры осуществляют в ферментаторах емкостью от 0,5 до 3 мз, снабженных борбатером и мешалкой (250-300 об/мин). Коэффициент заполнения аппарата 0,7, норма засева 10%. Состав питательной среды:мезга картофельная сухая 2% (крахмал 1,5-2%), рыбная мука (нитрат натрия) 0,3%, КН2Р04 0,1%, КС1 и MgS04X Х7Н2О по 0,5%, рН до стерилизации устанавливали 40% NaOH, равным 7,6-8,0.

В качестве пеногасителя используют кашалотовый жир, подсолнечное масло или другой сходный пеногаситель в количестве 0,02% к объему питательной среды. Стерилизация

90 мин при 2 ати. Выращивание культуры

производят в течение 96-120 час. Образование микросклероциев начинается на час роста культуры. Выращивание ведут при непрерывном перемешивании и избыточном давлении в аппарате 0,5-0,8 ати. Аэрация 0,5- 0,8 об/мин. Биомассу отделяют от нативной жидкости одним из известных способов и промывают водой в пятикратном объеме от количества взятой культуральной жидкости. Выход чистых микросклероциев от общей биомассы гриба составляет около 50% (по сухому весу). Сушка полученных таким образом микросклероциев осуществляется при температуре в пределах от 20 до 80°С.

Весь технологический процесс, не считая стадии подготовки инокулюма, занимает шесть-семь суток, вместо лолутора-двух месяцев по известному способу.

Предлагаемый способ при значительной экономической эффективности обеспечивает получение стандартного инфекционного начала возбудителя вертициллезного вилта для создания контролируемых инфекционных фонов в селекционных учреждениях, что позволяет ускорить выведение новых вилтоустойчивых сортов хлопчатника.

Предмет изобретения

1.Способ получения микросклероциев фитопатогенного гриба, возбудителя вертициллезного вилта хлопчатника Verticillium dahliae, включающий выращивание его на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, отличающийся тем, что, с целью интенсификации

процесса и повышения выхода целевого продукта, гриб выращивают глубинно на жидкой питательной среде, в состав которой в качестве основного компонента вводят картофельную мезгу, а в качестве дополнительного источника азота - рыбную муку.

2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что картофельную мезгу вводят в количестве 0,, а рыбную муку - 0,1-0,5%.