Способ замораживания бактерий Советский патент 1975 года по МПК C12K3/00 

1

Изобретение относится к микробиологии.

Известен способ замораживания бактерий, предусматривающий смешивание суспензии бактерий с защитной средой, содержащей глицерин и сахарозу и замораживание полученной смеси в жидком азоте в виде гранул.

Бактериальный концентрат, полученный этим способом, сохраняет активность в течение дней.

Целью изобретения является повыщение стойкости замороженного бактериального концентрата.

Для этого бактерии перед смещиванием с защитной средой отделяют от суспензии, получая при этом биомассу, в защитную среду дополнительно вводят буфер в количестве 10%, а содержание глицерина и сахарозы в среде соответственно равно (в %) 10-50 и 5-20, при этом биомассу со средой смешивают в соотношении 1:1. Замораживание проводят не более одного часа.

Способ заключается в следующем.

Получают суспензию молочнокислых бактерий в жидкой питательной среде, состоящей из молочной сыворотки, гидролизованного молока, лимоннокислого или уксуснокислого натрия со стимулятором роста.

В период роста клеток проводят нейтрализацию кислоты в культуральной жидкости. Затем бактерии отделяют от суспензии .центрифугированием. Полученную биомассу смешивают в соотношении 1 : 1 с защитной средой и замораживают в виде гранул в жидком азоте, выдерживая их в этой среде около одного часа, после чего расфасовывают во флаконы и хранят при температуре не выше -18°С. Для получения защитной среды берут стерильные компоненты в следующем соотношении (в %): 10-50 глицерина, 5-20 сахарозы и 10 лимоннокислого натрия (буфера). Компоненты среды стерилизуют при давлении 1 атм в течение 10-15 мин.

Пример. Для получения 1000 мл защитной среды берут 600 мл 20%-ного водного

раствора сахарозы, 200 мл 50%-ного водного раствора лимоннокислого натрия и 200 мл глицерина. Отделенную от суспензии бактерий биомассу смешивают с защитной средой в соотношении 1:1, тщательно перемещивают и замораживают в виде гранул в жидком азоте около 1 часа, затем расфасовывают во флаконы по 10 мл. Замороженный концентрат содержит 200-800 млрд клеток в 1 мл, при внесении в молоко в количестве от

1 : 10000 до 1 : 100000 мл свертывает молоко за 6-8 час. При хранении заморолсенного концентрата в течение 6 месяцев при температуре не выше -18°С не наблюдалось снижение активности, количество клеток было в

пределах 150-750 млрд в 1 мл.

Предмет изобретения

1. Способ замораживания бактерий, предусматривающий смешивание суспензии бактерий с защитной средой, содержащей глицерин и сахарозу, замораживание полученной смеси в жидком азоте в виде гранул, отличающийся тем, что, с целью получения стойкого при хранении бактериального концентрата молочнокислых бактерий, бактерии

перед смещиванием с защитной средой отделяют от суспензии, получая при этом биомассу, в защитную среду дополнительно вводят буфер в количестве 10%, а содержание глицерина и сахарозы в среде соответственно равно, %: 10-50 и 5-20, при этом биомассу со средой смешивают в соотношении 1:1.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что замораживание проводят не более одного часа.