Способ выделения липазы Советский патент 1977 года по МПК C07G7/26 

1

Изо етение относится к способам попу;чения медицинских препаратов.

Известен способ вьщолёНиЯ ферментов глицеро-липидного цикла методом афинной хроматографии, где в качестве адсорбента и субстрата используют полимер с гидроксильными группами, этерифицированными длинноцепочечными- жирными кислотами. Фермент элюируют растворами поверхностноактивных веществ, а затем очищают ацетоном fl.

Однако известный способ является трудоемким и многостадийным процессом, а также на обеспечивает высокой степени чистоты и интактности конечного продукта.

Целью изобретения является упрощение процесса, а также повышение степени чистоты и интактности конечного продукта.

Эта цель достигается тем, что в отличие от известного ранее способа выбран но- вый носитель - силикагель с оливковым маслом - высокоселективный к данному липоли- тическому ферменту, а также другой элюент - хлористый натрий. Применение этих двух новых компонентов позволяет избежать пооцэсса дополнительной очистки конечного продукта в ацетоне, который вызывал инактивацюо фермента.

Способ пригхэден для выделения и очистки липазы из поджелудочной железы, а также для дополнительной очистки коммерческих препаратов.

На чертеже представлены хроматограммы вьщеления липазы по предлагаемому способу

Способ поясняется следующими примв рамн.

Пример 1. Оливковое масло наносят на порошок силикагеля, гидрофобизованный лецитином. Предварительно хроматографический скликагель активируют при 120-160 С в течение 2 час, смещивают В г силикагеля, 0,5 мл лецитина и б мл оливкового масла в эфире.

Колонку диаметром 60 мм и (Длиной 25 мм наполняют суспензией носителя в буфере рН 8,0 (5-10м трис-HCt с добаькой 3, CaCJj). Уравновешивают колонку тем же буфером до рН 7,8-8,0, что достигается пропусканием буфера через колон