Способ определения специфических антител Советский патент 1978 года по МПК G01N33/16 C07G7/00 

1

изобретение относится к иммунопогии и может быть использовано для изучения иммунитета При бактериальных н вирусных инфекциях, а также при вакпинапии.

Известен способ определения спеиифнчео ких антител, относящихся к различным клао сам иммуноглобулинов, путем сорбпии из образца иммуноглобулинов исследуемого класса с помощью иммуносорбента, приготовленного на базе антисывороткй к это- Ш му классу с послеqjrtoiaUM эпюйромнием этих иммуньглоЬулинов и определением специфических антдател общепрйнятыми етодами 1 .

Однако такой способ трудоемкий и требует большого числа операций.15 . С целью упрощения способа из исследуемой жидкости удаляют сопутствующие иммуноглобулины с помощью иммуносорбента и определяют целевой щюдукт непосредствёвь но в жидкости. 20

Пример. Определяют антитела против антигенов из SH«Sonnei «охносйщихся к, йЛ) в сыворотках больных дизентерией Зонне. Дпя этого из сьюоротох адсОрбйрУлэт все имм/но глобулины классов 3 J и 3 q, М.А дсррбцию амму

ноглобулинов классов Здр иЗяЕ не проводят поскольку содержание этих иммуноглобулинов в сыворютке в 1О-10бО раз меньше, чем 3 А, а также потому, что антитела класса ЗдЕ не определяются в реакции гамагглютинации, применякщейся в этом исследовании для определения специфических антител. Таким образом, иммуноглобулины За О и Зд не могут сколько-нибудь значительно повлиять на.эультаты определения.

Для адсорбции За О и За М из сывороток предварительно готовят йммуносорбент. С этой целью смешивают количества неразведенных моноспецифических сывороток против ЗоМ (титр 1:1 о) и против За Q (титр l:15j. К смеси сывороток при постов нем помешивании по каплям Добавляют 5%-ный раствор глютарового альдегида (из расчета 3 объема этого раствора на 10 объемов сыворотки ) н оставляют на 3 час при комнатной температуре. Через 3 час образующийся гель тщательно гомогеннзирую7 в гомотенизаторв и трижды отмывают 0,15 М раствором хлористого натрия, забуференным 0,01 М фосфат 1ым буфером, рН 7,2. Затем в каждый из исследуемых сывороток добавляют тщательно суспендированный с помощью гомогенизатора иммуносорбент, предварительно осажденный цепт фугированием. На 1,5 мл сыворотки берут иммуносорбент, приготовленный из 1 мл смеси моноспецифических сывороток против Oq Q и ЗдМ, взятых в соотношении 1:1 Оставляют в термостате при 37 С на 1 час а затем на ночь в холодильнике, г-Наутро иммуносорбент сЯ;аждают центрифигурованием и проводят еще две подобных адсорбции. При второй I и третьей адсорбциях на 1,5 м сыворс тки каждый раз берут иммуносорбент в количестве,,со тв8тствующем 0,5 мл смеси моноспецифических сывороток. После трех адсорбции в исследуемых сьгооротках отсутствуют иммуноглобулины oQH 3 о М , о чем свидетельствует реакция иммунодиффузия в агаре по методу Mancinl . Затем, в подвергнутых адсорбции исследуемых сывЪрбтках опредепяют с помощью реакции нес снвной гемагглютинации антитела (класса За. А) против Sh. Sonnet . В качестве антигена используют липополисахарйд йз.ЗН.Вотт Предлагаемый способ определения содержания специфических антител, относ51щихся к различным классам иммуноглобулинов, обеспечивает исключение отмывки комплекса иммуносорбенп-иммуноглобулин от неспецифически сорбировавшихся белков, эпюации иммунотлобулина и его последующее освобождение от элюента, соответственно исключаются потери при всех операциях, и концентрация определяемого иммуноглобулина в образце, подвергнутом адсорбциям, практически равна его концентрации в исходном материале. Это обусловливает более высокую чувствительность метода по сравнению с существующим, все это приводит к умет1ьщению трудоемкости, способа и дает воз.можность проводить определение сразу в большом количестве проб. Формула изобретения ; Способ определения специфических антител, относящихся к различным кпаЪсам иммуноглоулинов, путем сорбции,.о тличаюший с я тем, что, с целью упрощения способа, из исследуемой жидкости удаляют сог утстзующие иммуноглобулины с помощью иммуносорбента и определяют целевой продукт непосредственно в жидкости. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе: 1. ЖМЭИ,. 1,1951, с. 125-126.