(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА, СОДЕРЖАЩЕГО /3-13 И/3-1,6 ГЛЮКАНАЗУ
Пример. Готовят 3 м среды следующего состава:
Свекловичный жом2,00
Пшеничные отруби2,00
NaNOs1,50
(NH4)jSO41 0
КН1Ю40,10
MgS04-7HiO0.05
Стерилизуют общепринятым способом. Засеваю 3л глубиннойкультзфы jQleott ichum candidumSc двухсуточного возраста, выращеннш на среде того же состава.
Гриб культивируют в ферментере при 28-32° С в течение 60 ч при аэрации Q2 11мтреды и njw перемешивании со скоростью мешалки 100 об/мин рН среды после стерилизации 5,4-5,6.
Полученную культуру сепарируют для отделения клеток микроорганизма, и ферменты осаждают из центрифугата культуральной жидкости при добавлении трех объемов спирта или двух объемов ацетона. Отделошый фильтрованием осадок ферментов высушивают на воздухе.
Активный ферментный препарат получают также путем высушивания фильтрата культуральиой жидкости на распылительной сушилке.
В таблице даны результаты определения активности 1,3 и 1,6 - глюканаз в препаратах, полученны двумя различными способами, при действии на ламиран (0- 1,3- глюкан), дрожжевой глюкан, на препарат клеточных стенок дрожжей и на пустулан ( 1,6 - глюкан); данные рассчитаны на 1 г препарата.
в препарате, по)гученном на распылительной сушилке (целлокандин Г-Зх), содержится Ьолее 7 тыс. ед/г р-1,3- г юканазьг, а - 1,6 - глюканазы - более 200 ед. Спиртоосажденный препарат (целлокандин Г-10х) содержит зтих ферментов на 35-40% больше. Определение активности. К 5 мг субстрата (ламин рану, дрожжевому глюкану, препарату клеточных стенок дрожжей S. се г е ч i s i а е или пустулану) в 0,5 мл ацетатного буфера рН 5,0, 0,1 М, добавляют 0,5 мл разбавленного раствора фермента. Смесь инкубируют в течение 1 ч при 40° С. Образовавшиеся сахара определяют по методу Сомоги-Нельсона. Из полученных результатов вычит |;от i количество вое станавпивающих Сахаров, содержашихся в качестве прв меси в ферментном препарате, а также в субстрате.. Акт ;вность глюканаз выражена в мг глюказы, которая образуется при действии 1 г ферментного препарата на субстрат в тетение 1 ч при 40° С в стационарных условиях. Культурально- морфологическая характеристика штамма Geotpichom can 3iclum 3 с на 10-е сутки ; На синтетической среде Чапека с сахарозой и . NaN03 - колонии диаметром 25-30 мм с ровным кр ем, радиально-складчатые. Воздушный мицелий йорошистый, скудньш, прижатый, белый. Обратная сторон колонии желтоватая, пигмента нет. На сусло-агаре (сусло 5° по Баллингу) колонии диаметром 35 мм с глубокими радиальными складками, с ровным краем, слегка вдавленным в агар. слабо зональные. Воздушный мицелий белый, тяжестый, шерстиотый. Обратная сторона колонии желтовато-бурая, пигмента нет. В центре колонии - крупные капли желтовато-коричневогоэксудата. Предложенный способ по сравнению с известным обеспечивает: }. Повышение выхода целевых ферментов за,счет использования гриба Gecbfcric/ivoTTj CQ.nSlidv.Tnn и ишользования среды с жомом и пшеничньвли отрубями, взятыми в качестве источника углерода. 2.Удешевление среды за счет использования жома и отрубей вместо пекарских дрожжей. 3.Получение высокостабильных ферментов, которые не теряют активности при хранении в течение трех и более лет. А. Получеание ферментов, которые расшепляют рожжевой глюкан полностью до глюкозы. Препарат может быть применен также для получения глюкозы из ламинарана, постулана и нз клеточных стенок дрожжей. Препарат можно применять в качестве добавки (премнкса) в корм скоту, птице и свиньям для лучшего усвоения дрожжей (БВК), так как неусванваемого дрожжевого глюкана в них содержится до 10%. Формула изобретения Способ получения ферментного препарата, содержашего /3- 1,3-иР- 1,6 - глюканазу,предусматривающий культивирование продуцента ферментов на питательной среде, содержащей источник углерода, азота, фосфора и магний, отличающийся 5 тем, что с целью повышения выхода целевых ферментов, в качестве продуцента используют грибы вида Qeotrichum coindidum,a в качестве источников углерода, азота, фосфора используют соответственносвекловичный жом и пшеничные отруби, азотнокис- лый натрий и сернокислый аммоний и фосфорнокислый калий однозамешеиный. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что на 1 л питательной среды используют 10-20 г свекловичного жома; 10-50 г пшеничных отрубей, 6 0,5 - 3 г NaNOj; 0,5-3,0 г (NH); SO4: 0.5 5.) i 0,1-1,5 г MgSOv . 3. Способ по п. I, отличающий с а тем, что из грибов вида Geotricbum candidum используют штамм 3 с. Источники информации, принятые во внимание П1ж экспертизе: 1. Патент Великобритании N 1370346, кл. С ЗН
