Способ получения коллагеназы Советский патент 1928 года по МПК C12N9/50 

Коллаген, входящий в состав клейдающих материалов (костей, сухожилий, соединит, тканей), в отличие от большинства протеинов, является индиферентным по отношению к трипсину в щелочной среде. Этим свойством пользуются для очистки клейдаюшего материала от находящихся в нем белковых примесей. Исследования автора показали, что встречаются продажные лре-. параты трипсина, которые способны разрушать коллаген в щелочной среде подобно тому, как это происходит с протеинами.

В зависимости от способа приготовления трипсина из панкреатической железы получаются препараты фермента, либо индиферентные к коллагену, либо его атакующие. Посредством применения адсорбентов (угля, каолина, гидрогелей, фосфатов и т. п.) из препаратов трипсина или панкреатина, растворяющих не только фибрин, но и коллаген, удается выделить новый фермент, растворяюп(ий коллаген и пе действующий па фибрин (коллагеназа). Посредством применения вышеуказанных адсорбентов удается освободить панкреатический трипсин от примесей к нему фермента, растворяющего

коллаген, коллагеназы. Разделение трипсина от коллаген азы достигается также при непосредственной обработке панкреатической железы растворами соды и глицерином.

Панкреатическая железа подвергается последовательной фракционированной экстракции раствором соды в 0,2-0,3% при различной продолжительности дигерирования при температуре в 18° и в 30-35. Получаются вытяжки, содержащие преимущественно трипсин и лишь примесь коллагеназы. При обработке панкреатической железы посредством дигерирования с глицерином при 35° получаются вытяжки, содержащие значительное количество коллагепазы. Освобождение коллагеназы происходит при автолизе клеток, в течение их дигерирования с глицерином. Глицериновые вытяжки по осаждении спиртом дают фермент, не трогающий вовсе фибрина и энергично растворяющий коллаген и кожу в щелочной среде.

Этот фермент (коллагеназа) является менее чувствительным к алкоголю сравнительно с трипсином и отличается свойством . в слабо кислотной среде (0,2 - 0.3%) глутинировать коллаген

при биологической температуре (3,0-г. 37f), превращая клейдающие вещества в клей. Даже при продолжительном воздействии коллагеназы на глутин в кислой среде, глутин не испытывает углубления гидратации и не превращается в пеклеющий и в незастудневающиЁ продукт. .Еоллагеназа встречается и в других органах помимо панкреатической железы (печень, селезенка и т. д.). Содовые и глицериновые вытяжки селезенки содержат кол лагепазу, лишенную примесей трипсина (фибриназы). Коллагеназа также обнаружена в препаратах, применяемых для мягчения кожи, например, оропон, эродин, эско и т. п. Из подобных препаратов коллагеназа получается по методу фракционированных экстракций растворами соды и глицерином. Этот фермент находится и в убитых культурах многих бактерий, как-то: протеуса, сарциньт, ииоцианеус ,и т. д., а также в токсинах дифтерийных, дизентерийных и т. д.

Из разводок чистых культур бактерий также может быть получена коллагеназа, при чем эти культуры убиваются антисептическими средствами или нагреванием до 60° и фермент фиксируется адсорбентом (уголь, каолин). Применяется коллагеназа в этом случае либо совместно с адсорбентом, либо после элуирования его соответствующим растворителем. носле чего фермент осаждается алкоголем и высушивается в вакууме.

Источником получения коллагеназы могут быть бактерии, находя1циеся в фекалиях птиц, собак и других плотоядных животных. Фекалии подвергаются извлечению и дигерированию с раствором соды или с глицерином. Полученные вытяжки обрабатываются адсорбентами и адсорбаты затем элуируются и осаждаются алкоголем.

Предмет патента.

1.Способ получения коллагеназы, фермента, растворяющего клеевое вещество в щелочной среде и свертывающего (глутинирующего) его в кислой, отличающийся тем, что панкреатическую железу, селезенку, „ печень или другие железы, или же бактериальные .культуры, убитые антисентиками или нагреванием, экстрагируют слабыми растворами соды с целью очистки, а затем глицерином с целью извлечения коллагеназы, осаждаемой затем из глицеринового раствора спиртом.

2.Прием выполнена означенного в п. 1 способа, отличающийся тем, что глицериновые вытяжки обрабатывают углем, каолином, гидрогелями, фосфатами или т.п. адсорбентами, вымывают из адсорбента коллагеназу подходящими растворителями и оса/кдают из полученных растворов сниртом.

3.Применение означенного в п. п. 1 и 2 способа для очистки препаратов трипсина от коллагеназы.