Способ очистки гамма- -глутамилтаурина Советский патент 1978 года по МПК A61K35/12 

железе. Любые фракции, получающиеся в Ряду оиераций очистки, также могут быть 1 спользовань для терапевтических целей.

Результаты элементарного анализа и определения молекзлярного веса хорошо согласуются с рассчитанными значениями для формулы C7H 4N2O6S и следующего состава, %:

С 33,07; Н 5,55; N 11,02; О 37,75; S 12,61; М 254,27.

Из ИК-спектра (КВг) следует, что 1 NH имеют цвиттерионную структуру; свободная карбоксильная группа недиссоциирована.

Характеристические полосы поглощения: и (ОН), (ЫНз)около 3600--2400 cмU(NH)около 3315 с.

и (СО) валентные колебания карбоксильной группы около 1758 и (СО) амидный карбонил 1

около 1662 с.

S(NH3)+около 1576 с.ки(5Оз)-около 1296-1031

Данные спектра ЯМР гамма-Ь-глутамилтаурина:

химическое смещение (5) : 4,15 (tJ, СН); 3.65 (от, 2, 2СН); 3,12 (т 2, СН); 2,7-2, (т 4, ,).

ПротоныХимическое Относисмеи-1,ение тельная интенсивность

СН-NHa4,15 (() 1

СНг-SOsH3,65 (т) 2

СН-NH3,12 (т) 2

0 С-СНг-СН2-ОН 2,7-2.1 (т) 4

Соединение, нерекристаллизованное из содержащей 80 об. % этанола смеси этанола и воды, имеет следующие кристаллографические данные: размер элементарной ячейки (определен фотографическим методом Вайссенберга): а 6,69 А, Ь 7,87 А,

с 11,38 А, р 101°. Кристаллы прина.з:лежат к моноклинной кристаллической системе и к классу P2i. Плотность измеренная 1,55 г1см, плотность рассчнтанная 1,552г/ /см.

Скорость электрофоретической миграции хорощо согласуется с рассчитанным значением. В случае применения цистеиновой кислоты в качестве стандартного вещества она составляет в рассчете на это вещество 0,74 (рН 6,5, напряжение 1500 V время 90 мин, нагрузка 0,03 ,iM/cM, бумага: ватман 3 мм).

Оптическое вращение + 14° (вода, с 1,021 %).

Т. разл. 223-226° С.

После гидролиза в гидролизате с помощью аминокислотного анализа тора можно обнаружить глутаминовую кислоту, а посредством хроматографического определения в тонком слое можно обнаружить та урин.

Стабильность чистого, выделенного из околощитовидной железы продукта удовлетворяет требованиям, пред-ьявляемым при применении продукта фармацевтических целей. У пробы, оставленной на 8 дней в термоетате при 70° С, после определения температуры плавления, измерения оптического вращения, а также исследования с помощью хроматографии в тонком слое и проведенного на бумаге электрофореза, не удалось обнаружить разложения.

Выделенное биологически активное вещество обладает щироким спектром терапевтического и профилактического действия на прямые или косвенные патологические изменения, связанные с повреждением «АГАС (аэробиосферически-генетическая

система адаптации).

Соединение оказывает на органы и ткани указанной системы благоприятное биологическое или терапевтическое действие.

Соединение оказывает защитное дсйствие от излучений от постоянно возрастающей опасности заражения и загрязиевн.я кожи и слизистых оболочек, действие, способствующее заживлению ран, активирующее зародышевую соединительную ткань,

активирование мерцательного эпителия а дыхательных путях и так далее, а также обладает повышенной защитой от инфекций, вызываемой грибками.

Соединение активно против постоянно

существующих и возрастающих в большой степени етрессовых воздействий (например , метеорологические воздействия, большие различия между дневной и ночной температурой, большая опасность повреждения) на

материке.

Соединение частично проявляет свое действие непосредственно, частично через регулирование, витамина А в обмене веществ.

Время лечения полученным препаратом может быть самым различным.

Симптомы некоторых заболеваний (например, Rhino-Iaryngopharyngitis Sicca) исчезают при оральном введении ежесуточно 3x5 мкг уже через две недели; для си.мптоматического улучщения других болезней (например, парадентозе, Sjogren-Syndrom) необходимо до двух месяцев; прч других болезнях (например, Spondylosis

Ankylopoltica) лечение необходимо проводить от трех месяцев до полугода.

Препарат может содержать одно биологически активное вещество или же комбинацию биологически активных веществ. Дозы чистого биологически активного вещества составляют 50-500 нг на день на килограмм веса тела и применяются разделенными на три разовые дозы.

Таблетки содержат 2-20 мкг, 10 мкг

биологичееки активного вещества и, кроме

того, инертный в биологическом отношении носитель (наиример, молочный сахар, крахмал), а также обычные при приготовлении таблеток вспомогательные вещества (гранулирующие вещества и вещества, придающие скользкость, например, поливинилпирролидон, желатина, тальк, стеарат магния, аэросил и так далее). При очень малых дозах целесообразно перед гранулированием прибавлять биологически ак ивное веп ество в форме раствора к массе для таблетирования и производить гомогенизацию в смесителе. Малое содержание биологически активного вещества дает возможность производить приготовление препарата в больщой лаборатории. Биологически активное вещество стабильно, поэтому таблетки могут быть выпущены в продажу без указания срока применения. Содержание биологически активного вещества таблеток замедленного действия, или спансулярных капсул может составлять 10-20 мкг. В случае препаратов для инъекций наиболее целесообразная доза на ампулу составляет 5-10 мкг. Парентеральное применение может быть произведено впутримыщечно, подкожно или внутривенно. В указанных концентрациях биологически активное вещество не повреледает ткани и стенки сосудов, в связи с чём оно может быть применено в виде препарата для вливанпя.

Пример 1. Получение гамма-Ь-глутамплтаурина из природных веществ.

10 г лиофилизованного и перемолотого порошка, полученного из околощитовидной железы, обезжиривают известным способом Ауербаха следующим образом: полученный из желез порощок при комнатной температуре осповательно перемешивают г 25 мл ацетона и затем суспензию фильтруют через стеклянный фильтр. Хорошо отжатый порошок желез тщательно растирают с хлороформом и полученную суспензию вновь фильтруют через стеклянны; фильтр. Эту стадию повторяют еще раз. Непосредственно после этого отфильтрованное вещество еще раз суспендируют в 25 мл ацетона и основательно отсасываю с помощью стеклянного фильтра. Очищенный порошок суп1Ут в вакууме при комнатной температуре. Получают примерно 7-9 г сухого обезжиренного порощка желез. Вес продукта зависит от содержании в исходном материале.

10 г сухого обезжиренного порощка желез эстрагируют три раза при 30° С по 300.1гл дистиллированной воды. Каждая операция экстрагирования длится 1 ч. После каждой экстракции водный раствор отделяют от порощка желез с помощью цечтрифуги с большим числом оборотов. До последующего применения водный экстракт хранят в атмосфере азота в холодильнике при (-3) - (-5)° С. Водный экстракт

дает положительные реакции с нингидрином, бпуретом и трихлоруксусной кислотой.

Незадолго до операции водные экстракты объединяют. К объединенному экстракту при постоянном встряхивании прибавляЮТ ио каплям столько 50%-ного по объему раствора трихлоруксусной кнслоты. чтобы конечная концентрация

трихлоруксусной кислоты составляла 15%. Содержащий осадок водный раствор выдерживают в течение 2 ( в холодильнике при 3-5° С и затем посредством центрифугирования отделяют осадок, образовавшпйся в результате воздействия трпхлоруксусной кислоты. Прозрачный раствор при добавлении трихлоруксусной кислоты не дает осадка.

Нзбыточное количество трихлоруксусной кислоты удаляют многократной экстракцией при комнатной температуре. Для экстракции применяют диэтиловый эфир. Для того, чтобы удалить весь избыток трихлоруксусной кислоты, необходимо провести 17-18-кратное, в некоторых случаях, даже 20-25-кратное экстрагирование. После последней экстракции водная фаза имеет рН -К5-5.

Для удалещтя эфира через водную фазу пропускают при С с помощью водоструйного пасоса ток азота. Примерно через 6 ч удаляют весь эфир, полноту удаления проверяют по запаху.

После этого водный раствор подвергают

ЛИОф ЛЬНОГ| сушке П ВеП1,есТБО, ПОС ОЛЬКУ

оно гигроскопично, хранят в хорошо закрытом сосуде. Выход вещества в расчете на еще необезжиренный порощок составляе 10-15%, что завнспт от содержания жиров в исходном, полученном из жиров порошке. Полученное лиофилизованное вещество подвергают гель-фильтрации на сефадексе G-15 нисходящим методом.

Диаграмму элюпрования определяют измерением экстинкции при 280 нм. При этом суммарно получают 7 максимумов (ппков) (А-G).

Характеристические параметры фильтрации приведены ниже. Исходная смесь лпофилизованиого вещества, растворенного в 10 .. дистиллирован5,1 ной воды, г

4,85 Диаметр колонки, см Высота колонки, см 149

0.78 10

Скорость истечения, мл1мин Время, мин

Величина фракций, ,1/./пробирку 7.8 Л1;1кспм м (пик), число

пробирок77-103

А77-103

В104-128

С129-134

D135-162

Е163-189