Способ получения пептидов Советский патент 1978 года по МПК C07K14/655 A61K38/00 

где R2 и R 1имеют вышеуказанные значения, с последующим удалением всех оставшихся зашдттных групп соляной кислотой. Пример 1. Трифтор.ащетат метилового эфира аланил-гдищнна (Н-Ala-Gly- -ОМе. CFsCOOH). 10 г ВОС-Ala-G y-ОМе (45 ммолей} растворяют в 100 мл. холодной (ледяная баня) трифторгулсусной кислоты. Раствор перемешивают 1 час при 0° С и отгоняют раствО(ритель, остаток растворяют в метаноле, добавляют « диэтнловому эфиру и выпавший в осадок продукт отфильтровывают. П р и м е.р 2. Метиловый эфир трет, бутилоксикар банил - глицил-алаяил - глицина (ВОС-Gly-Ala-Gly-ОМе). К холодному (ледяная баня) раствору Н-Л1а(-Gly-ОМе-СНзСООН (45 молей) в д}1.,1етилфомамиде (50 ж.д) догбавляют .-эти,лМОрфолин (рН 8), затем охлажденный раствор 18 г ВОС-Gly-ОТср (45 лшолей в дим€т.и,лфор мамиде (50-иуг). Раствор выдерживают ,на ледяной бане 2 дня. Растворитель отгоняют, продукт чистят хроматографией на колонке с силикагелем, используя в Качестве элюента смесь этилацетат (метанол) пиридин (98: 1 : 1). Продукт кристаллизуют из смеси этила цетата « петролейного эфира и получают вышеуказанкое соединение, т. пл. 98-100° С, ЯМР (ДМСО-de); 1,25 б (ЗН), 1,4 б (9П), 3,68 б (ЗН). Пример 3. Трифторацетат метилового эфира гли|Цил-аланил-.гли1ЦИна (Н-Gly- -Ala-Gly-ОМе . СРзСООН). 6,4 г (20,1 ммолеи) ВОС-Gly-Ala- -iGly-ОМе, раствор1яют в .холодной (ледяная баня) трифторуксуоной кислоте (120 мл) и раствор перемешивают при 0° С 1 час. Растворитель отгоняют, остаток р,астворяют в метаноле, продукт о саждают добавлением диэтнлового эфира и отфильтровывают. П р ,н м е р 4. М-етилоБый эфир грет, бутилоксикарбонил - глицил - глицил-аланилгли1Ц.ина (ВОС-Gly-Gly-Ala - Gly - -ОМе). К холодному (ледяНа-я баня) раствору 6,4. г (20,03 мтля) Н-Gly-Ala-Gly- -ОМе GHsCOOH в диметилформамиде (30 мл} при перемешивании добавляют N-этилморфолин (2,8 мл}, затем раствор 8,5 г (24 ммоля) БОС-Gly-ОТор в диметил форм а МИДе (20 мл. Раствор выдерживают на ледяной 1бане ,2 дня. Растворитель отгоняют, остаток растворяют в метаноле и продукт оса;ждают дизтиловым эфиро.м, кристаллизуют из этилацетата, получают выше указанное соединение, т. пл. 103- 105° С и 141° С (диморфность); ЯМР 1,25 5 (ЗН), 1,38 б (9Н), 3,65 б (ЗН). ПриМер 5. Гидразид трег. бутилоксикарбонил-глИЦнлнглицил - алалял - глицина (ВОС-Gly Gly-Ala - Gly - NH - -NH2). К холодному (ледяная баня) раствору 2,5 г (6,7 ммолей) ВОС-Gly-Gly-Ala- Gly-ОМе в метаноле (50 мл} при перемешивании добавляют 2,5 мл гидрат шдразина. Раствор перемешивают при 0° три часа и при ко1мнатной температуре в течение ночи. Осадок отфильтровывают, лрОМывают метанолом, сушат, получают выше указанйое соединение; аминокислотный анализ: Gly 3; Ala 0,99. Пример 6. Метиловый эфир грег.бутилоксикарбонил - глицил - глицил - аланилглицил-З-тритил-цистеинил-Н -Г;оег.бутилоксикарбонил-лизил - аспарагиннл - фенилаланил-фенилаланина. (ВОС-Gly-Gly- -Ala - Gly - Cys (Trit)-Lys-(BOC) - -Asn-Phe-Phe-ОМе) . К раствору 1,57 г (4,2 ммоля) ВОС- -Gly-GLy-Ala-Gly NH-NHj в диметилсульфоксиде (25 мл} и ди метил фар мамиде (25 мл} добавляют 2,04 н. раствор хлористого водорода в этил ацетате (5,15лл) при -10° С. €месь охлаждают до -12° С и добавляют 0,61 мл (5,2 ммоля} грег.бутилнитрита. Выдерживают при С 15 мин, О1хлаждают до -15° С и к смеси добавляют вначале 1,8 мл (рН 8) N-этилдиизопропиламина, затем раствор 4,5 г (4,18 ммолей} Н-Cys (Trit)-Lys (ВОС)-Asn-Phe- -Phe-ОМе и вновь 0,72 мл N-этилдиизопрапиламина в диметилфор1мамиде (25 мл}. Смесь перемешивают один ч.ас при -10° С и в течение ночи при комнатной твмиературе. Упаривают, остаток растворяют в метаноле, продукт осаждают водой и кристаллизуют из метанола, получают вышеуказанное соединение; aiMiH но кислотный анализ: Lys 1,07; Asn 0,97; Gly 3,27; Ala 1,0; Phe 2,08; цистеиновая кислота 1,35. Пример 7. Гидразид грет.бутилокси.карбонил-глвцил-тлицил-аланил - глицил-Sтритил-цистеинил-N - трег.бутилоксикарбонил-лизил - аспарагинил - фенилаланвл - фенил аланина. (ВОС-Giy-Gly-Ala-Gly- - Cys (Trit)-Lys(BOC)-Asn -Phe-Phe- -NHNHa). К холодному (ледяная баня) раствору 0,9 г (0,66 моля} ВОС-Gly- -Gly-Ala-Gly-Cys (Trit)-Lys (BOC) - -Asn- Phe-Phe OMe в диметилформамиде (25 мл) добавляют 1,5 мл гидрата гидразина. Раствор перемешивают 18 час при комнатной температуре. Растворитель отганлют, остаток растирают с метанолом и сушат над пятиокисью фосфора, нолучаюг вышеуказанное соединение; аминокислотный анализ: Lys -1,10; Asn 1,00; Gly 3,33; Ala 1,0; Phe 2,14; цистеиновая кислота 1,35. Пример 8. Грег.бутилоксикарбонилгли:цил-глицил-1аланил-1Гли Цил-8 - тритил-щистеинил-N - грег.бутилоксикарбонил-лизиласпарагинил - фенилаланил - фенилаланилтриптофил-N - грег.бутилоксикарбонил-лизил-0-трег.бутил-треонил - фепилаланил-Огрег.бутил-треонил - фенилала)1нл - О-трет,бутил-треонил-0-грет.бутил - серил - S-тритил цистеин. ВОС-G y-GlV-Ala-Gly- Cys (Trit)-Lys (BOG)-Asn-Phe-Phe- -Trp - Lys (BOG)-Thr (Bu )-Phe- -Thr (Bu )-Ser (Bu )-Gys (Trit)OH.

К раствору 800 мг (0,59 ммоля) BOG- -Gly-Gly-Ala-Gly - Gys (Trit)-Lys- (BOG) -Asn - Phe-Phe - NHNHj в диметилформамиде (12 мл, охлажденному до -20° С, добавляют 1,85 и. раствор хлористого водорода в эгилацетате (0,795 мл, 1,475 ммоля). GMecb охлаждают до G и добавляют 0,081 мл (0,71 ммоля) третбутилкитрит, раствор перемешивают 15лшн. Раствор 81Q мл (0,59лшоля) Н-Тгр-Lys- (BOG)-Thr (Bu ) - Phe - Thr(Bu ) - Ser-(Bu)-Cys (Trit)-OH и 0,354 мл (2,06 ммоля) N-этилдиизопропиламина в диметклформамиде (6 мл) охлаждают до -15° С и добавляют к реакционной смеси, которую перемешивают при-15° G 1 час и при 25° G 18 час. Растворитель отгоняют, остаток растирают с ледяной лимонной кислотой, отфильтровывают, промывают водой и метанолом, сушат, получают вышеуказанное соединение; аминокислотный анализ: Zys

BOC-G-lij-G-lij-Aia-Gly-Yi)5-Lijg BOC Agr.- he-Ph.e-Trp-LijS(BOCl-Th.)-Phe-ThrCBu)-ger(Bu)-Cy5-c;i

К этому соединению добавляют холодную концентрированную соляную кислоту (23 мл) на бане с ледяной водой в атмосфере азота при сильном перемешивании в течение 10 мин., затем до:бавляют ледяную уксусную кислоту (300 мл) и раствор л.иофилизуют. Остаток растворяют в воде и снова лиофилизуют, остаток растворяют в 0,01 н. водном .растворе ацетата а ммония и вносят в колонку с карбОКсиметилцеллюлозой (Ватман GM-23, 2,5X30 см). Продукг элюируют 0,06 н. раствором аддетата аммония (буфер). Очищенное вещество лиофилизуют и получают вышеуказанное соединение в .виде белого осадка в виде его уксусной соли; Лтах МеОН 282 мк (к 5260), 289 мк (е 4730): аминокислотный анализ: Lys 2,28; Asn а,05; Thr 1,95, Ser 0,98. Gys 2,34, Gly 3,00, Ala 1,05, Phe 3,12. Новторная лиофилизация соединения дает соединение в виде свободного основания, аминокислотный анализ: Lys 2,10; Asn 1,04; The 1,80; Ser 0,95; Gvs 2,17; Gly 3,00; Ala 1,07; Phe 2,99.

Аналогично можно получить вышеуказанное соединение, лрименяя вместо йода родан :по методу Хиски .и G.MHTa.

Пример 10. Метиловый эфир трег.бутилоксикарбо.нил-лей|цил - глицил-глицил1,04; Asn 0,96; Thr 1,6; Ser 0,49; Gly 2,82;

Ala 1,0:0; Phe 2,80.

lO p и M e p 9. Циклический дисульфид глицил-глицил-аланил -глицил - цистеиниллизил - аспарагинил-фенилаланил - фенилала ннл -Триитофил - лизил - треонил-фенилаланил-треонил-серил-цистеина. (Н-Gly-- -Gly-Ala-Gly-Gys-Lys-Asn - Phe- -Phe-Trp-Lys-Thr - Phe - Thr-Ser - -Gys-OH).

0,871 г (0,32 ммоля) BOG-Gly-Gly- -Ala-Gly-Gys (Trit)-Lys (BOG)-Asn- -Phe-Phe-Trp-Lys (BOG)-Thr (Bu)- -Phe-Thr(Bu )-Ser (Bu )-Gys(Trit) - -OH растворяют в ледяной ускусной кислоте (60 .«л) и по каплям добавляют к 0,5%HOMV раствору иода в метаноле 150 мл, (30 ммолей) при перемешивании 1 час при ком.натной температуре. GMecb .продолжают перемеоиивать еш,е 45 минут, затем охлаждают на льду и добавляют 1 н. раствор 6 мл гипосульфита натрия в воде для разрушения избытка йода (бесцветный раствор). Растворитель отгоняют, остаток растирают с водой, сушат и сухой продукг растирают с изонропиловым эфиром, получают циклический дисульфид гексадекапептида формулы

аланил-глкцииа (BOG -- Leu-Gly-Gly- -Ala-Giy-ОМе).

2 г (5,35 м.иолей) раствора BOG--Gly- -Gly-Ala-Gly-OAVe в трифто.руксусной кислоте (25 мл) перемешивают при 0° G в течение часа. Раствог интель отгоняют, остаток .растирают с э-ф1фом, ссадок сооирают и сушат, получают тетралс птид Н-Gly-Giy-Ala-Giy-ОМе, в виде трифторуксусной соли. 5,35 ммоля р.зствора пептида2,31 г {lu млоля) BOG-Leu-ОН 1,35 г м.-,10ля) Ьожибснзтриазола, 2.27. (11 .нмолвй) дицикл.огексилкарбодимида и 0.68 г N-эт.илморфолина з диметилфо.рмамиде (25 мл персмешиваЮТ при 0° G 24 час. Осадок отфильтровывают, ф)гльт.рат добавляют к диэтнловоМУ эфиру (200 мл). Выпавший осадок отделяют ji кристалл 1зуюг из смеси метанола и изонропилового эфира, получают указанное выше соединение; т. нл.

V1 п )о /г

(G 1, диме190,5-193° G,

-10, тилформамид).

Пример 11. Гидразид грет.бутилоксикарбонил-лейцил - глицил - глицил-аланил-глицина. (BOG-Leu-Giy-Gly-Ala- -Gly-NH NHa).

2 г (4 лиюл.я) раствора BOG-Leu- -Gly-Gly-Ala-Giy-ОМе н 4,12 мл (80 ммолей) гидрата гидразина в метаноле

(50 мл) перемешивают дри 0°С 4 час. Смесь концентрируют }1париванием до 4 мл и дoбaвv яют к диэтиловомуэфиру (200 мл). Осадок собирают, растворяют в мета-ноле (4 мл) и добавляют к диэтиловому эфиру (200 мл). Выпавший осадок отделяют, сушат и получают указанное выше соединение, т. ил. 174-176,5° С; а f -12,0° (с I, дим.етилф,ор.ма;ми1д).

Пример 12. Метиловый эф.ир трет.бутилоксикарбоиил-лейцил - глицил - глицил-aлaнил-rлицил-S-тpитнл-циcтeинил-N грег.бутилоксикарбонил-лизил - асиараги нил-фенилалан.ил-фен,илала,НИна (В ОС- -Leu-Ghi-Gly-Ala-Gly-Cys (Trit)- Lys (BOG)-Asn-Phe-Phe-OMe).

0,15 МЛ (1,27 ммоля) трет.бутклнтрнт доба1вляют к раствору 0,308 г (0,635 ммоля) ВОС-Leu-Gly-Gly-Ala-Gly-NsHs в ди.метнлформа1миде (5 мл) при -20° С и 2,4 и. -хлористый водород в этил ацетате (0,66 мл, 1,59 ммоля). Перемешивают 15 мин. три -90° G к смеси дОбавляют раствор 0,62 г (0,58 ммоля) Н-Cys (Trit) - -Lys (BOG)-Asn-Phe-Phe-OMe и 0,372 мл диизопрапилэтиламвна в диметилформа;миде (6 мл). О.месь перемешивают при -20° G в течение часа и при 0° G 24 ч, затем добавляют к 200 мл диэтиловому эфир1у. Выдавший осадо-к собирают, растворяют в метаноле (5 лы) и добавляют к диэтиловому (Эфиру (200 мл). Осадок отфильтровывают, сушат и получают вышеуказанное соединение с т. лл. 238-240,5° G.

Пример 13. Гидразид грег.бутилоксикарбонил-лейцил - глицил - глицил-аланил-глицил-5-тритил-цистеинил-М -трет.бутилоксикарбоиил-лизил-асиарагинил - фе нилаланил-фенилалаиина (BOG - Leu - -Gly-Gly-Ala - Gly-Gys (Trit)-Lys- (BOG) -Asn-Phe-Phe-,NHNH2).

Раствор 0,56 г (0,38 ммоля) BOG- -Leu - Gly - Gly - Ala - Gly-Gys- - (Trit)-Lys (BOG)-Asn - Phe-Phe - -OMe и 0,74 мл гидрата гидразииа в диметилформамиде (10 мл) перемешивают при 0° G 12 час и три .25° G 24 час. Раствор добавляют к 100 мл диэтилового эфира, вы(H-Leu-Gly-Gl j-AlaРаствор 0,23 г (0,081 м.иоля) BOG- -Leu-Gly-Gly-Ala-Gly-Gys (Trit) - -Lys (BOG)-Asn - Phe-Phe - Trp - - Lys (BOG)- Thr (Bu)-Phe - Thr (BuO-Ser (Bu)-Gys (Trit)-OH в уксусной кислоте (90 мл) по каплям в течение часа прибавляют к раствору 0,5%-него иода в метаноле (41,5 мл, 0,81 ммоля). Запавший осадок собирают, раствор яют в диметилформамиде (3 мл) и добавляют К 100 мл диэтилового эфира. Осадок собирают, сушат и получают вышеуказанное соединение, т. пл. 239-242° G; аминокислотный анализ: Lvs 1.05; цистеиновая кислота 0,66; Asn 0,99; Gly 3,00; 1,11; 0,5 Gys 0,21; Leu 0,96; Phe 1,86.

Пример 14. Грег.бутилоксикарбониллейцил - г ЛИ1Ц и л-г л ищи л-а.лая и л - глицил-Sтритил-циетеинил-№ -грег.бутилоксикарбонил-лизил-асиарагинил - фенилалаиил-фенилаланил-триитофил - N -тргт. бутилоксикарбонил-лизил-О-г/ ет.бутил - треоиил-фенилаланил-0-г/ ег.бутил - треонил-0 - трет. бутил-серил-З-третил-цистеин (BOG-Leu- -Gly-Gly--Ala - Gly-iCys (Trit)-Lys (BOG)-Asn - Phe - Phe -Trp - Lys- (BOG)-Thr (Bu)-Phe-Thr (Bu )-Ser- (BuO-Cys (Trit)-OH).

0,03 МЛ (0,28 ммоля) грег.бутилиитрита добавляют к раствору 0,20 г (0,14 ммоля} BOG-Leu-Gly-Gly - Ala - Gly-Gys (Trit)-Lys (BOG)-Asn-Phe-Phe-NsHs в дИМетилоульфоксиде (2 мл) и диметилформамиде (4 мл) и 2,21 н. хлористого водорода в этилащетате 0,16 мл (0,35 ммоля) охлаждеинОМу до -20° G. Перем-ешивают 15 мин 1при -20° G, добавляют раствор 0,20 г (0,14 ммоля) Н-Тгр-Lys (BOG) - -Thr (Bu )-Phe-Thr (Bu )-Ser (Bu ) Gys (Trit)-on-HGOOH и 0,08 мл (0,49 ммоля) диизопрапиламииа в диметилформаадиде (5 мл). Раствор перемешивают при -20° G 1 час и при 0° G 24 час. Затем концентрируют до 2 мл и добавляют к д«этиловому эфиру (100 мл), осадок собирают, промывают водой (2x5 мл), .метанолом (2x5 мл) и сушат, получают вышеуказанное соединение; аминокислотный аиализ: Zys 1,92; дистеиновая кислота 0,93; Asp 0,93; Thr 1,38; Ser 0,66; Gly 3,00; Ala 1,02; Gys 0,39; Leu 0,93; Phe 2,70.

Пример 15. Циклический дисульфид лейцил-глицил-тлицил - аланил - глицилЦИстеинил-лизил-аспарагинил - фенилала ршл-феиилалайил-триятофил - лизил - треояил-фенилаланил-треоиил-серил - дистеина

тем раствор перемешивают при комнатной те.мпературе 1 час и охлаждают до 0°G. Вводят 1,62 мл гипосульфита натрия до полного обесцвечивания раствора. Растворитель отгоняют, осадок отделяют, сушат,

растирают с эфиром, сушат и облзчают циклический дисульфид гептадекапептида формулы Glij-Cys-Lys-Asn-Phe-P.he-Trp LL 3-Thr-Phe-Thr-Ser-(:t)S-0}-))

BOC-Glu-G-ly-A a- Gly-Cys-Lys (BO(;)-ASn-Phe-Phe-Trp-LyS(BOCV

-Thr(Bu)-Phe Tlvr№u)-Ser(Bu)-Cy&-OH

Раствор 0,155 г (0,066 злнолей} диклического дисульфида гептадекапептида в конц. соляной кнслоте (6,87 мл) в атмосфере азота энергично перемешивают при 0° С мин, добавляют уксусную кислоту (69 мл и лиофилизуют. Остаток ;ра€творЯют s 1воде (50 мл и вновь лиофилизуют, продукт хроматографнруют в колонке ic химически модифнцировянлым сшитым декстраном Сефадекс G-25 М (3X60 еж), уравновешенным в яижлей фазе, затем в верхней фазе смеси бутанол: уксурная кислота: вода (4:1:5). Верхнюю фазу лр; л:еняют для десорбции пептида. Фра-кщии, соде1ржашие чистый пептид, собирают, упаривают и лиофилизуют из воды, получают вышеуказанное соедине.ние в вид-е его уксуснокислой соли.

УФ-.спехтр, Ятах(МеОН): 290 лш (е5000), 281 жк (Е 5540), 275 мк (Б 5205), 269 мк (е 4980), 265 мк (е 4625), 259 жк. (е 4085). Повториая лиофилизащия этого продукта из воды дает вышеуказанное соединение в виде его свободного основания; аминокислотный анализ: Lys 1,98; цистенновая кислота 1,41; Asp 1,26; Thr 1,92; Ser 96; Gly 3,00; Ala 1,01; Leu 0,96; Phe 2,76.

Аналогично -можяо получить вышеуказанное соединение, применяя вместо йода подан.

Пример 16. Метиловый эфир трег.бутилоксикарбонил - тлицил-глицил - глицилаланил-глищина (ВОС - Giy - Gly - Gly- Ala-Gly-ОМе).

Раствор 3,7 г (10,04 ли10.ля) ВОС-Gly- -ОТср, 3,12 г (8,03 ммоля} Н-Gly-Gly- -Ala-Gly-ОМе. СРз СООН и 1,1 мл этпЛМорфолина в ди:метилформамиде (15 мл} леремешивалл п.ри 0° С 20 час. Выпавший осадок отфильтровывают, фильтрат добавляют к диэтиловому эфиру. Осадок отделяют, объедийяют с предыдущим и кристаллизуют из метанола, получают вышеуказанное соединеиие; т. 1ПЛ. 198-20ГС. .YD (, диметилформамид).

Пример 17. Гидразид грег.бутилоксикарбонил-глидил-гли-цил-глицил - аланилглидина (ВОС-GLy-Gly-Gly-Ala-Glv- -NHNHj).

Раствор ЬО г (2,32 ммоля) ВОС-Gly- -Gly-Gly Ala-Gly-ОМе 1 мл (23,2 лшоля) и гидразингидрата в метаноле (30 мл) перемешивают при 0°С 4 час. Упаривают. Остаток растирают с диэтиловы.м эфиром, сушат и получают вышеуказанное соединеинее т. ;пл. 221-223°С.

Пример 18. Гидразид Ы,8-дитрит,илцистенил - Ы-трет.бутилоксикарбонил - лизил-аспарагинил - фенилаланил - фенилаланина (Trit-Cys (Tril)-Lys (ВОС)-Asn- -Phe-Phe-ХНХНг).

Раствор 1,25 г (1,0 ммоля) Trit-Cys - (Trit)-Lys (ВОС)- Asn-Phe-Phe-OMe и 0,97 мл (20 .пмо.гей) гидразингидрата в метаноле (30 мл перемешивают лри 0°С 2 ДНЯ. Растворитель отгоняют и остаток кристаллизуют из смеси этанол/изопропиловый эфир, получают вышеуказанное соединение; ЯМР (Д.М СО de): б 1,38 (S, 9Н), 7,19-7,30 (т40Н).

Пример 19. N.S-дитритил-дистеиБилN- -грег.бутилоксикарбонил-лизил - аспарагинил - фенилалани.л-фенялаланил-тр,И птофил-Х -грег.бутилоксикарбонил - лизил-Отрвг.бутил-треонил - фенилаланил-О - трет.бутил-треонпл-О-грег.бутил - серил-S - тритнл-цистеин (Trit-Cys (Trit)-Lys (ВОС) - -Asn-Phe-Phe-Тгр-Lys (BOC)-Thr (BuO-Phe-Thr (Bu)-Ser (Bu)-Cy (Trit) OH) 0.09 -ИЛ (0,74 ммоля) Третбутилнитрита добавляют к охлажденному до -20° С раствору, содержащему 0,2 г (0.493 ммоля} Trit-Cys (Trit) - Lys (ВОС)-Asn-Phe-Phe-NHNHs в диметилформамиде (10 мл) и 2,6 н. раствора хлористого водорода в этилацетатг (0,475 мл, 1,23 .м.юля). Перемешивают 15 M.t.H при -20° С, добавляют 0,7 .(0,493 м.моля) раствор Н - Тгр - Lys (ВОС)-The (Bir-)-Phe - Thr (BuJ- -Ser (Bu)-Cys (Trit)-OH.HCOOH н 0,3 мл (1,65 .1/.«ол.ч) дилзол.ропилэтиламнна в диметилформа миде (10 мл). Раствор перемешивают при -20° С 1 час и при 25° С 24 часа и упаривают. Остаток растирают с водой, диэтилоЕым эфиром, холодной 1 н. лимонной кислотой, сушат и получают вышеуказанное соединение. ЯМР (CDCb); б 1,08 и 1,13 (S, 27Н), 1,37 (S,18H), 7,28 (m, бОН); аминокислотный анализ; Lys 2,23; дистеиновая кислота 1,10; Asp 1,00; Thr 2,12; Ser 1,02; Cys 0,64, Phe 3,18.

lip 11 M e p 20. Формиат S-тритил-цистеинил-N-грег.бутилокси-карбонил - лизил-аспарагин д-фе1 илал.-:1л - фенилаланил-триптофил-Х -грег.бутилоксикарбонил - лизил0-трег.бутил-треонил - ениланил-О - трет.бутнл-треонил-0-трет.бутил - серил - S-тритил-цпстеина (Н-Cys (Trit)-Lys (ВОС)--Asn-Phe-Phe-trp-Lys (BOC) -Thr- (Bu)-Phe-Thr (Bu)-Ser (Bu)-Cys- (Trit)-OH. HCOOH).

Раствор 0,50 г (0.192 лшоля) Trit-Cys- (Trit)-Lys (BOC)-Asn-Phe-Phe-Trp- Lys (BOC)-Thr (Bu)-Phe-Thr (Bu) - -Ser (Bu ),-Cys (Trit)-OH 6 мл смаси уксусной кислоты/муравьиной кислоты/воды (7:1:2) перемешивают гари 25° С 6 час. Ра-створ-итель отгоняют и остаток растир.ают с диэтиловым эфиром, получают вышеуказа:н№оеСоединение; а1миноки1сл.отный анализ: Lys 2,23; цистеиновая ки.слота 1,38; Asp 1,00; Thr 2,14; Ser 0,86; Phe 3,24. Пример 21. Грег.бутилоксикарбонилгли;П:И,л-гл.ицил - глидил - аланил - гли.цил-Sтритил-цистеинил-N- - /рег.бутилоксикарбонил-лизил - аспарагинил-фенилаланил - фенилаланил - триптофнл-М-грег.бутилоксикарбонил-лизил-О-грег.бутил - треонил-фенилаланил-О-гр0г.бутил - треонил-О-трет.бутил-серил-S - тритил-цистеин (ВОС) - -Gly-Gly Gly-Ala-Gly - Cys (Trit) - -Lys (BOG)-Asn-Phe - Phe-Trp-Lys (BOG) -Thr (Bu )-Phe-Thr (Bu)-Ser (BuO-Cys (Trtt)i-MOH). 0,04 МЛ (0,34 ммоля) Грег.бутилнитритя добавляют к охла,ж,д©н:но.му до-20°G раствору 0,076 г (0,176 лшоля) ВОС-Gly- -Gly-iGIy-Ala-Gly-NHNHj в смеси диметилсульфоксида (1 лгл), диметилформамид (2 мл) и 2,5 н. раствора хлористого

i--(;iy-G-lij-Gly-Aia--Gttj-Cys-Lus--A5n-Plie-Phe-Trp-.Lys-Thr- he-Thr- 8r---Cy,5-O.H

1t водорода в этилащетате (0,176 мл. 0,44 ммоля. После перемешивания при -20° G в течеаие 15 мин к смеси добавляют раствор 0,385 г (0,16 ммолей) HCys (Trit) - Lys (BOG)-Asn-Phe-Phe - Trp - Lys (BOG)-Thr (Bu )-Phe-Thr (Bu )-Ser (Bu)-Gys (Trit)-OH . HGOOH и 0,12 мл диизопропилэтиламина в диметилформамиде (5 мл). Раствор перемешивают при -20° G 1 час, затем температуру поднимают до 0° G и перемешивают 1 час, затем перемешивают еще 20 час при 20° G. Растворитель упаривают и остаток добавляют к диэтиловому эфиру (100.«л). Осадок собирают, промывают водой, .метанолом -и сушат, получают вышеуказанное соединение; аминокислотный анализ: Lys 2,30; цистеиновая ки-слота 1,42; Asp 1,00; Thr 2,72; Ser 1,00; Giy 3,84; Ala 1,00; Phe 3,34. Прим e,p 22. Циклический дисульфид ГЛИДИЛ-ГЛИ.ЦИЛ-ГЛИЦИЛ - аланил-глицил - цистеинил - лизил-аспарагинил-фенилаланилфенилаланил - триптофил - лизил - треонилфенилаланил-треонил-сер,ил - цистеина

Раствор 0,285 г (0,103 лшоугя)) BOG- -Gly-Gly- Gly - Ala-Gly-Gys (Trit) - Lys-(BOG)-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys- (BOG)-Thr (Bu )-Phe - Thr (Bu) - -Ser (Bu)-Gys (Trit)-OH в уксусной кислоте (200 мл) добавляют к раствору 0,5-ного йода в метаиоле (Ь2 мл, 1,03 ммоля) в течение 60 мин, продолжают переме- uU|-AtU- Gvy-Cys-Lys(BOC)-A3n-Phe- hei, -Thr(Eu)(Bu)-SBr (bu )-Су5Раствор этого циклического дисульфида гептадекапептида (0,1 ммоля) в конц. соляной кислоте (10 мл) перемешивают при 0° G 10 мин. в атмосфере азота. Добавляют 100 мл уксусной кислоты и лиофилиз чот. После повторной лиофилизации из воды (100 мл) остаток хроматографируют на колонке с химически модифицированным сшитым декстраном (Geфaдeкc G-25, 3X50 см) суспендированным в нижней фазе смеси бутанол/уксусная кислота/вода (4:1:5). Для десорбции используют верхнюю фазу, получают почти чистый гептадекапептид. Чистые фракции объединяют, упаривают и лиофилизуют, получают вышеуказанное соединение в виде уксуснокислой соли.

УФ-спектр, А„,ах (МеОН) 283 мк (г 6702), 289 мк (е 6350). Повторная лиофилизация

шивание 60 мин при комнатной температуре. Раствор охлаждают до 0° G и добавляют 1 н. 2,06 ммоля раствора гипосульфита натрия, для обеспвечивания. Растворитель отгоняют, маслянистый остаток добавляют к воде (100 мл). Выпавший осадок отфильтровывают, сушат и получают циклический дисульфид гептадекапептида формулы

продукта из воды дает вышеуказанное соединение в виде свободного основания; аминокислотный анализ: Lys 2,0; цистеиновая кислота 1,42; Asp 1,09; Thr 1,89; Ser 0,91; Gly 3,64, Ala 0,98; Phe 2,95.

Аналогично можно получить вышеуказанное соединение применяя вместо иода родан по методу Хиски и GMHTa.

Пример 23. N,S-днтpитил-циcтeинил№ -трег.бутилоксикарбонил-лизил-аспарагипил - фенилаланил-фенилаланил - триптофил-№ -трет.бутилоксикарбонил - лизил-Отрет.бут:ил - треонил - фенилаланил - Огрег. бутил - треонил-О-грег. бутил - серил2-третилтиоэтиламид, (Trit)-Gys (Trit) - -Lvs (BOG)-Asn-Phe-Phe - Trp-Lys (BOG)-Thr (Bu)-Phe-Thr (Bu)-Ser (BuO-NHGHoGH S-Tritj. Trp-Lys СБОС)Ой

13

Раствор 0,80 г (0,637 ммолей) гад разида пентапептида Trit-Cys (Trit)-Lys (ВОС).--Asn-Phe-Phe-NHNHj в дшмеТ(Илфор:ма1м,ид.е (9 мл) и охлаждают до -20° С. Добавляют к «ему 2,4 н. раствор х.:сристого водорода в этилацетате (0,691 ммоля), затем 0,0872 мл (0,764 ммоля) грег.б тилнитрита. Смесь перемешивают 15 мин дари -15°С. Раствор 0,852 г (0,637 ммоля) Н-Тгр-Lys (ВОС)-Thr (BuO- - Phe - Thr (Bu) - Ser (Bu) - - NHCHaCHjS-Trit в диметилформамиде (8 мл), садбржащий 0,272 мл (1,59 ммоля) К-этил-диизопролиламина, охлаждают до -15° С 1И по каплям добавляют к реак-цйонной омеси. ПеремешИВаяие прод|олжают при -15° С 1 час и при ,ком.нат1ной температуре в теченгие яочи. Реакциониую .смесь упаривают в Вакуу ме, остаток растирают с водой, фильтруют, лро.мывают водой, сушат иад (Пятиакисью фосфо ра. Остаток хроматографлруютв с силикагелем (163 г), продукт элюируют хлороформом, содержаш;им 3% (Метанола и 0,3% лиридина. Чистый продукт кристаллизуют из омбси метанола с иэолролиловым эфиром |И получают вышеуказаняое соед|Инен1ие с т. пл. 163- 180° С (-р-азл.).

Найдено, %: С 69,24; Н 7,09; N 8,9.

Ci HieoNi OlgSs.

Вычислено, %: С -69,85; Н 7,04; N 8,76.

П р и .м е ip 24. Форлниат 5-тритил ц;истеннил - Ы-грег.бутилоксикарбонил - лизиласпарагинил - фенилаланил - фенилаланилтриптофил-№ -грет.бутнлоксикарбонил - лиэил-О-грег.бутил-треонил - ф.енилалаиил-Отрег.бутил-треонил-О-грег.бутил - серил - 2тр(итилт1иоэ11ИЛаМИД:а (Н - Cys (Trit) - -Lys (БОС)-Asn - Phe-Phe - Trp- -Lys(BOC)-Thr(Bu)-Pbe-Thr(Bu )- -Ser(Bu)-NHOH CH2S-Trit HCOOH).

, Раствор 0,909 г (0,i355 ммоля) ундекапептида Trit - Cys (Trit) - Cys (ВОС; - -Asn - Phe-Phe - Trp - Lys (BOC) - -Thr(Bu)-Phe - Thr(Bu)-Ser(Bu)- -NHCH2CH2S-Trit IB ОМеои 20 мл уксусной кислоты (муравьи;ной К1ИСЛ(Оты) воды .(7:1:2) пврв1 1еш,ивают в течение ночи при ко1М-1натвой темлературе. Растворитель отгоняют, остаток растирают с (водой, полученный осадоК ютфильтровывают, лромывают

(H leu-Gty-Gly-A;a-SVij--C. s-LH3--A5n-- he-rhe Trp-Lus-Thr-Pns-Thr-рег-ЖСН.ХК.., S)

Раствор 0,230 г (0,083 ммоля)

BOC-Leu-Gly-GV4-Ala-C4y-CysiTrit)-L-Lis(BGC-Asn-Phe-Ph.e-Trp-lys(30C -Thr lBu)-Phe-Thr(Bu-)-SerCBu)-l IiCH2CH2S-Trit

И

водой 1И сушат «ад пятзювисью фОСфора, получают вышеуказанное соединение; аминокислотный анализ: Lys 2,03; Asp 1,00; Ser 0,87; Phe 2,97: цистеи/новал кислота 0,90; Thr 1,85.

П р и .м е р 25, Грет.бутилоксикарбониллейцил-глицил-глидил-алганил - гллцил - Sтритил - UiiCTeiiH.ri-N- трег.бутилоксикарбоНйл-лизил-аспаралианл - феяилаланил - фенилаланил - триптофил-:№ - грег.бутилоксикарбонил - лизил - О-трет.6уткл - треонилфенилаланнл-О-трет.бутил-треонил-О- грег. бутил - 2 - тритилтиоэтиламид Г (ВОС)-Leu - Gly-Gly - Ala - Gly - -Cys (Trit)- Lys (BOC)- Asn - Phe- -Phe - Trp - Lys (BOC)- Thr (Bu) -

-Phe - Thr (Bu) - Ser (Bu) - -NHCHsCHsS-Trit.

К раствору 0,066 г (0,136 ммоля) лвдразила пентапептида ВОС-Leu--Gly-Gly- -Ala-Gly-NHNHj IB cyixoiM диметилфор:у1амиде (3 ../,), охлажденном до -20° С, добавляют 2 н. 0,175 мл соляной кислоты в этилацетате, затем 0,0186 мл (0,13 ммоля) трег-бутилнитрита. Смесь перемсшидааюг ripiH -15° С 15 мин. К реакционной Омес-и по :капл1ям добавляют раствор 0,315 г (0,33 ммоля) H-Cys (Trit)-Lys (ВОС) -

-Asn, - Phe-Phe - Trp-Lys (BOG) - -Thr(Bu) - Phe-Thr(Bu)-Ser(Bu} - -NHCH2CH2S-Trit в ДИМетилформам«де (4 мл), содержаш,ий 0,082 мл (0,476 ммолей) 1 1-этилдн.изопроП;ила1МИ«а, охлажденного до -15° С, перемешивание продолжают лри -15° С 1 час И лрИ ,ком атной температур ев течение ночи. Реакциойную смесь выпа ривают в вакууме, остаток растирают с охлажденной .на льду 1 ю. лимо.ННой кислотой, фильтруют В промывают ВО.ДОЙ.

Твердый остаток растирают с меташол-ом и сушат лад л,ятиокисью фосфора, лолучй:юг вышеуказанное соедиление; аминокислотный анализ: Ly 1,88; цистеиновая кислота 0,84; Asp 1,00:Thr 1,94; Ser 0,97: Gly 2.78; Ala 0,89; Leu 0,89: Phe ЗД1.

Пример 26. Циклический дисульфид лейцил-глицил - глицил - ала.нил - глицилцистекнил-лизил - аспарагилил - фенилаланил-фенилаланил-триптофил-лизил-треонилфенилаланил - треонил-серил - 2-тиоэтиламида

15

в уксусной, кислоте {100 мл} медленно добазляют при сильном перемешивании к растйору 0,211 г (0,.-зя) йода в 42 мл метанола при комнатной температуре, смесь перемешивают при комнатной температуре iGO M.UH. Медленно охлаждают до 0° С и добавляют 1 н. раствор гипосульфита натрия

BOC-Leu-ily-Gly-Ala-Giy-Cij3-Ly5(BOC)-ASn-Phe-Ihe-Trp-Lys{BOC)

-Thr ISu 1- rhs-Thr (Bu)-БегСБи Ь-МИСНзСН.Й

При сильном перемешивании к циклическому гексадекапептиду в концентрированной соляной кислоте (7 мл) при 0° С, в атмосфере азота, в течение 10 мин. добавляют 90 мл уксусной кислоты, и раствор лиофилизуют. Остаток смывают 2%-ной уксусной кислотой в воде и лиофилизуют. Затем чистят хроматографией на колонке с Х1И1Лически модифициорованным сшитым декстраном Сефадекс G-25 М (3x50 см} уравновешенным вначале в фазе смеси бутанол/уксусная кислота/вода (4:1; :5), затем уравновешенным в верхней фазе. Для десорбции почти чистого гексадекапептида применяют верхнюю фазу. Чистые фракции объединяют, выпаривают, лиофилизуют и получают вышеуказанное соединение в виде уксусной соли.

УФ-спектр: i,,,,v (МеОН) 290 мк (е 4290); 282 мк (& 4910), 273 ик (s 4630). Повторная лиофилизация продукта дает вышеуказанное соединение в виде свободного основания; аминокислотный анализ: Lys 2,01; Asp 1,35; Ser 0,93, Ala 0,99; Phe 2,52; цистеиновая кислота Q,6G; Thr 1,98; Gly 3,00; Leu 0,96.

Пример 27. Грег.бутилоксикарбонил-глицил-глицил - глицил-аланил-глицилS-тритил - цистеинил-:№ -грет.бутилоксикарбонил-лизил-аспарагинил - фенилаланил-фенилаланил - триптофил-N-трег.бутилоксикарбонил-лизил-О-трег.бутил - треонил-фенилаланил-О-грег.бутил - треонил-0-трет.бутил-серил-2-тритилтиоэтиламид. (ВОС- -GIy--.Gly-G y-Aia - Gly-Cys (Trit)--Lys (BOG) -Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-

( H-Glu-C 4y-Oly-Ala-Cly-Cijs-Lys-ASrt- Ke-Ph.e-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NHCHgCH S 5

Раствор 0,224 г (0,083 ммоля) BOG- Gly-Gly-Gly - Ala - Gly-Gys (Trit) - Lys (BOG)-Asn-Phe-Trp-Lys (BOG) - Thr (Bu )-Phe-Thr (Bu )-Ser (Bu ) - MHG:H2GH2S-Trit в 160 мл уксусной кислоты медленно добавляют к сильно перемешиваемому раствору 0,211 г (0,83 ммоля) иода в метаноле (42 мл) при комнатной

16

в воде для разрушения избытка иода (обесцвечивание раствора).

Растворитель отгоняют почти досуха, остаток растирают с холодной водой, фильтруют, промывают водой, сушат над пятиокисью фосфора, промывают эфиром и сушат, получают циклический дисульфид формулы

-(BOG)-Thr(Bu )-Phe - Thr(BuO - -Ser(Bu )-:NHGH2GH2S-Trit).

К раствору 0,0608 г (0,141 ммоля} гидразидпентапептида BOG-G1}- Gly-Gly- -Ala-Gly-HNHNH2 в сухом диметилформамиде (& мл} и 2 мл диметилсульфоксида, охлажденному до -20° G добавляют 2 н. соляную кислоту в этилацетате (0,176 мл, 0,352 лгжолл), затем 0,019 лгл (0,196 лшо./гя) трег.бутилнитрита. Омесь перемешиваютпри

-15°G 15 мин. Раствор 0,327 г (0,133 ммоля} Н-Gys (Trit)-Lys(BOG)-Asn-Phe- -Phe-Trp-Lys (BOG) -Thr (Bu) -The-

-Thr(Bu) - Ser(Bu)-NHGH2GH2S - -Trit в диметилформамиде (4 мл}, содержащий 0,085 мл (0,494 ммоля} N-этилдиизопропиламина, охлаждают до -15° G и по каплям добавляют к реакционной смеси. Продолжают перемешивание при -15° G 1 ч и при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь упаривают з вакууме, остаток растирают с охлажденной на льду 1 н. лимонной кислотой, фильтруют и промывают водой. Твердый остаток растирают с метанолом и сушат над пятиокисью фосфора, получают вышеуказанное соединение; аминокислотный анализ: Lys 2,31; цистеиновая кислота 0,84; Asp 1,00; Thr 2,26; Ser 1,19; Gly 4,00; Ala 0,84; Phe 3,2.

Пример 28. Циклический дисульфид глицил-глицил-глицил-аланил-глипил - цистеинил-фенилаланил-фенилаланил - триптофил-лизил-треонил - фенилаланил - треонил - серил-2 - тиоэтиламида

I, ,

температуре. После до бавления иода перемешивание раствора продолжают при комнатной температуре 60 мин. Раствор охлаждают до 0° G и медленно добавляют к нему 1 н. раствор гипосульфита натрия в

воде для разрушения избытка иода (до обесцвечивания). Растворитель отгоняют почти досуха, остаток растирают с холод17

ной водой, фильтруют, промывают водой, сушат, получают циклический дисульфит

БОС -GITJ- Gly -Clg-Ala- Gly-C ys-Li sCBOO-ASH-Phe pj e-Trp-LijStBOC -Thr(Bu l-Fhe-Thr(Bu)-SeriBu)-«HCH2CH2S Этот циклический гексадекапептид сильно иеремешивают с 7 мл концентрированной соляной кислоты цри 0° С в атмосфере азота в течение 10 мин. К смеси добавляют 90 мл уксусной кислоты и раствор лиофилизуют. Остаток смывают 2%-ной уксусной кислотой в воде и вновь лиофилизуют. Остаток хроматографируют на колонке с химически модифицированным сшитым декстраном (Сефадекс G - 25 М), уравновешенным вначале в нижней фазе системы бутанол/уксусная кислота/вода (4: 1:5), затем в верхней фазе этой системы. Для десорбции почти чистого гексадекапептида используют верхнюю фазу. Чистые фракции объединяют, упаривают и лиофилизуют, получают вышеуказанное соединение в виде уксуснокислой соли. УФ-спектр: Ятах (МеОН) 288 ж/с (е4870), 280 мк (е5575), 274 мк (еБЗвО), 268 мк (е5185), 265 мк (s4955). Повторная лпофилизация последнего продукта из воды дает вышеуказанное сое1П,инение в виде свободного основания; аминокислотный анализ: Lys 1,72; Asp 1,00; Ser 0,73; Ala 0,69; Phe 2,78: цистеиновая кислота 0,57; Thr 1,69; Gly 3,59. Пример 29. Грег.бутилоксикарбонилглицил-глицил-аланил-глицил - S - тритилцистеинил-№ -грет.бутилоксикарбонил - лизил-аспарагинил-фенилаланил - фенилаланил - триптофил - N- трет.бутилоксикарбонил-лизил-О-грет.бутил - треонил - фенилаланил - О - т/оег.бутил-треонил-О-грет.бутил-серил-2 - тритилтиоэтиламид. (БОС-

(.H-C-ly-C-ly-Ala-GXy-Cys-LiiS-A5rx-Phe-Phe-rrp-Lys-Thr-Ehe-Thr-3er-MCH,CH,S)

0,860 г (0,3 ммоля BOG-Gly-Gly- Ala-Gly-Gys- (Trit) -Lys (BOG) -Asn- Phe-Phe-Trp-Lys (BOG)-Thr (Bu ) - Phe-Thr (Bu )-Ser (Bu )-NHGH2GH2S растворяют в 150 Л1Л ледяной уксусной кислоты и по каплям при перемешивании, в течение часа добавляют к раствору 0,5%-ного иода в метаноле (150 утгл, 30 льиолей) процесс ведут при комнатной температуре. GMecb

BOt--Gly-Gly-Ata-&l.y-Ci,3-LyalBOC1-Asu- l,e-Ph,e-:r j;-LijS (BQCi-Thr (Bu)-Phe -Thr (BuM- Sei- Su)-NliCHjCH 3

18

формулы

продолжают перемешивать еще 45 мин, охлаждают на льду и добавляют 1 и. водный раствор гипосульфита натрия (6 мл для разрушения избытка иода (до обесцвечивания раствора). Растворитель отгоняют, остаток растирают с водой, сушат и сухой продукт растирают с изопропиловьтм эфиром, получают циклический дисульфид пентадекапептида формулы Gly-Gly-Ala-Gly - Cys (Trit) - Lys - (BOG)-Asn - Phe - Phe - Trp-Lys- (BOG) - Thr (Bu- ) - Phe-Thr (Bu) - Ser (Bu ) - NHGH2GH2S-Trit). К раствору 800 мг (0,58 ммоля) BOG- Gly-Gly-Ala-Gly - Gys (Trit) - Lys- (BOG) - Asn - Phe - Phe - NHNHa в 12 мл диметилформамида при -20° G до бавляют при перемешивании 1,85 н. раствор хлористого водорода в этилацетате (0,795 мл, 1,475 ммоля). Температуру смеси охлаждают до -15° G, добавляют 0,081 мл (0,71 ммоля} грет.бутилнитрита и раствор перемешивают 15 мин. Раствор 0,52 г (0,637 ммоля Н - Тгр - Lys - (BOG) - Thr (Bu ) - Phe-Thr (Bu) - Ser-(Bu) NHCHaGHaS-Trit и 0,354 мл (2,06 ммоля N-этилдиизопропиламина в 6,0 мл днметилформамида охлаждают до -15° G и добавляют к вышеуказанной реакционной смеси. GMecb перемешивают при - 15°G в течение часа и при 25° G 18 час. Растворитель отгоняют, остаток растирают с охлажденной на льду лимонной кислотой, фильтруют, промывают водой, метанолом, сушат и получают вышеуказанное соединение. Аминокислотный анализ: Lys 2,01; Asp 0,97; Thr 1.60; Ser 0,65; цистеиновая кислота 0.87; Gly 2,92; Ala 1,00; Phe 2,97. Пример 30. Циклический дисульфид глицил-глицил-аланил - глицил-цистеиниллнзил - аспарагинил - фенилаланил-фенилаланил - тринтофил-лизил - треонил-фенилаланил - треонил - серил - 2-тиоэтиламида.

19

К этому соединбншю добавляют 23 мл холодной .концентрИрюваииой соляной кислоты, смесь охлаждают ледяной бале и в атмосфере азота пр,и .сильиом Пе:ре)меш«ваиии, в течение 10 мин, добавляют 300 мл ледяной уксусной кислоты и раствор лиоф:илизуют. Остаток ;ра)ствО(ряют в воде и снова ляофил.изуют. ОСтаток растворяют в 0,01 iH. водном растворе ацетата аммония, помещают в колонку с карбоксиметилделлюлозной (Ватман GM-23, 2,5x30 см). Чистое соединение злю«руют 0,06 н. ацетатаиМмонийным буфвро.м. Очищенное вещество лиофилизуют :из ВОДЫ И получают уксуснокислую соль, вышеуказанного соединения в виде |белого Т1Вердого вещества; УФспектр: Я,пах(МеОН) 282жк (е 5120), 289 ж/с (е 4610). Повторная лиофилизация продукта ;из воды дает вышеуказаилое соединение в виде свободного 1оанаван«Я. Ам инокислотный анализ: Lys 2,06; Asp 1,02; Thr 1,75; Ser 0,91; цястенновая кислота 0,73; Gly 3,00; Ala 1,10; Phe 3,11.

При1ме1нля BiMrecTo иода роданид по методу Хисми и Смита также можно получать вышеуказаганое соединение.

Пример 31. Метиловый эфлр а-цетил(S-тритил)- цистеинил-М - грег.бутоксикарбанил-лизил - аопарали-нил - фенилаланилфенилаланина (Ас - Cys (Trit)- Lys - (БОС) -Asn-Phe-Phe-ОМе).

Раствор 0,191 2 (0,5 ммоля) п-нитрофенилацетата в 4 мл диметилфЬрмамида добавляют при 0° С к раствору 0,750 г (0,698 ммолей) Н - Cys (Trit)- Lys (ВОС) - -Asn-Phe-Phe-ОМе HOAc и 0,1 мл Nэтилморфолина. После перемешиваняя при 0°С в течение 24 час ра.створитель 1отгоняют iB вахууме. Остаток растворяют в 3 мл метанола, и медленно добавляют к 200 мл диэтилового эфира. Осадо/к собирают и кристаллизуют 1ИЗ метанола, получают выщеуказанюое соединение с т. пл. 219,5-22ГС; -21,6° (, диметилформамид).

Таким же аб раэом, прямен-яя п-нитрофенйловые эфиры мур авьиной, пропиояовой, масляной, изомасляной, триметилуксусной, калронов10Й или бензойной .киотот, вместо л-.н;нт1рофенилацетата, получают соответствующие соединения вышеуказанной формулы, где вместо Ас-ф 0рмил, пропи1ан1ил, бутанойл, язо бутаноил, таивалаил, гексаноил или бензаил.

Пример 32. Гидразид ацетил-(S-тритил)-цистеинил-№ - бутоксикарбонил - лиЗи,л - аапаратияил - фенилаЛан1Ил-фенил.аланина (Ас - Cys (Trit) - Lys (БОС) - -Asn-Phe-Phe-iNHNHz).

(le-C j$-Iijs Asn-Phe -Рие-Тгр-1 5-Thr -T -e-Tlt.r Sег-ТШОНг 1

20

Раствор 0,40 г (0,379 ммоля) Ac-Cys- (Trit)- Lys (БОС)-Asn - Phe - Phe - -ОиИе и 0,37 мл (7,58 ммолей) гидразингидрата в метаноле (15 мл) перемешивают 5 при 0° С 48 час. Осадок собирают, сушат и получают вышеуказанное соединение, с т. пл. 236-237° С; -28,6° (, диметилформ амид).

Таким же образом, применяя соответствующие исходные вещества, получают соединения, где вместо Ас-фармил, пропионил, бутаноил, йзобутаноил, пивалоил, гексаноил или 1бенз,онл.

П р и м е р 33. Ацетил-5-тритил-цистеинил-Н -грег.бутоксикарбонил - лизил - аспа.. рагинил-фенилаланил - фенилаланил-триптофил-N - гуоег.бутоксикарбонил - лизил-Отрет.-бутил - треонил-фенилаланил - О-трет.п бутил-Тр|еон|Ил-серил-2 - 11ритилтиозтила1МИД (Ас - Cys (Trit)- Lys (БОС)- Asn - -Phe-Phe-Trp-Lys (БОС)-Thr ( -Phe-Thr (Bu )--Ser (Bu)- NHCHj- -CHsSTrit).

К pacTiBopy 0,240 г (0,227 ммоля) Ac-

Cys (Trit)- Lys (БОС)-Asn-Phe-Phe- -iNHNHg в CyxOM димети л форм амиде (2 мл) и диметилсульфоксиде (1 мл), охлажденному до -20° С добавляют 2н. соляиую кислоту в этилащетате (0,273 ммоля), затем 0,0312 мл (0,273 ммоля) трет.-бутилнитрита. Смесь перемешивают 15 мин при - 15° С. Раствор 304 г (0,227 ммоля) Н- -Тгр-Lys (БОС)-Thr (Bu)-Phe-Thr- (Bu )-Ser (Bu4-NHCHaCHsS - Trit в ДИМетилфор)мамиде (3 мл), содержашем 0,097 мл (0,568 ммоля) N-этlИЛд низoпpoпиламина, охл-ажденного до -15° С по к арлям добавляют к вышеуказанной реакционной смеси. Смесь перемешивают при -15° С

1 час и при 25° С 20 час. Растворитель отгоняют в ва,кууме, остаток растирают с охлЗЖДбнной на льду 1 я. ли1монной .кислотой, фильтруют, .промывают водой |И сушат над пятиошисью фосфора. Твердый остаток растирают с -метанолом, фильтруют и сушлт над пятиокисью фосфора, получают вышеуказанное соединение; ами:нокислотный анализ: Lys 1,82; Asp 1,00; Ser 0,76; цистеиН101вая кислота 0,93; Thr 1,87; Phe 3,10.

0 Тадшм же образом, применяя соответствующие исходные вещества, получают соединения формулы П, где иместо Ас-формил, пропионил, (бутанаил, изобутаноил, пивалоил, гексащоил или бензоил.

Пример 34. Циклический дисульфид ацетил-цистеинил - лизил-аспарагинил - фенилаланил - фенилал-анил - триптофил-лизил - треонил-фенилаланил - треонил-серил2-тиоэтиламида;

21

Раствор 0,250 г (0,110 ммоля) Ас-Cys- (Trit)-Lys (BOG)-Asn - Phe-Phe - -Trp - Lys (BOG) -Thr (Bu )- Phe- Thr (Bu )-Ser (Bu )- NHGHjGHaS-Trit в уксусиой .кислоте (61 мл) ,м.едлен; о добавляют при перемешивании (0,278 г) 1,1 ммоля иода в Метаноле (56 мл) при 25° G. iOo акоячастии добавлеиня раствор продолжают перемешивать отри 25° G в теAt-Cy5-Lyf;(BOC)-A3n- he Phe-Trp-Ly3tbOC -Thrl.Ba)-rhe-Thr Bu)- $ер (Bu),CHoS

К циклическому пептиду вводят 9,1 мл ,р ир|ОваННОй соляной Кислоты п-ри 0°G в атмосфере азота в течение 10 мин, При сильном перемеш|иваии И добавляют 119 мл уксуаной .киолоты « раствор тут же л1И1офилИзуют. Остаток растворяют в воде и вновь л.иоф,ш11изуют. Затем остаток раствор1яют IB верхней фазе смеси растворителей бута,нол/уксуслая кислота/иод а (4:1:5) и помещают в «Олон.ку с химически модифиЦ1ир Ова1Н ным сшитым декстраиом (Geфaдeкc G-25 М), приротовлен.ньш в виде суспензии щ нижней фазе юмеои растворителей. Верхнюю фазу смеои растворителей применяют для десорбции ундекапептида. Фракции, содержащие чистый иродукт, объединяют и упаривают в вакууме. Остаток растирают с диэтиловым эфиром, раство ряют в 5% уксусной «ислоте, лиофилизуют и получают вышеуказа ниое соединение в виде уксуснОкислой соли;

УФ-спектр: тах (МеОН) 290 мк (е4990), 282 мк (е 5455), 274 мк (е 5095).

GoeдИiиeниe в виде уксуснО.кислой соли повторно лиофилизуют из воды и получают вышеуказ-айное соединение в ииде свободиого ооНОвания; аминокислотпый анализ: Lys 1,93; Asp 1,00; Ser 0,84; цистеиновая кислота 0,80; Thr 1,84; Phe 2,97.

Таким же образом, применяя другие исходные вещества .получают соответствующие соединения формул III и L где R - это Н, а R-это NHR2, где формил, .пропионил, бутаноил, изобутаноил, плвалоил, гексаноил или бензоил.

При.мер 35. Пентахлорфен.иловый эфир З-тритилтиОИропионовой .кислоты (Trit-SHsGHaGOORhGIs).

.К раствору 1,0 г (2,87 ) 3-трит.илтиопропионовой кислоты в сухом тетрагидрофураее (25 мл) .добавляют 0,765 г (2,87 ммоля) пентахлорфелола. G.Mecb охлаждают до 0° G, вносят в нее 0,596 г (2,87 лжоля) диц.и.клогексилкарбодиимида н перемешивают 1 час при 0° G, затем 1 час при 25° G. Затем смесь охлаждают до 0°G, ф;ильтруют, фильтрат упаривают в вакууме. Остаток кристаллизуют из этилацетата и получают вышеуказаниое соединен.ие с т. ил. 154-156° G.

22

чевие часа. Раствор охлаждают до 0° G н медленно доба1вляют Ьн. раствор гипосульфита натрия в воде для разрушения избытка .иода (обесцвечива1ние .раствора). Раствор|итель отгоняют в вакууме, остаток (растирают iC водой, отфильтровывают, промывают водой, сушат над пятиокисью фосфора, получают (Циклический заш.1ишен1нь1й ундекапептид формулы

Пр.имер 36. Метиловый эфир 3-тритплтиопроппонил-N- - грег.бутоксикарбониллизил-аспарапинил - фенилалааил - .фенилаланина. (Trit-SGH2GH2GO-Lys (BOG)-Asn-Phe-Phe-ОМе).

Раствор 0,579 г (1 ммоль) пента.хлорфенилового эф|И|ра 3-тритилтиопро.пионо1вой кислоты, 1 ммоль Н-Lys (BOG)-Asn-Phe- -Phe-О.Ме -НО Ac и 0,14 (1 ммоль) триэтилам.ина перемеиливают при 25° G 3

ДНЯ. Растворитель отгон;яют в ва.кууме, остаток растирают с охлажденным .на льду Гн. воднььм раствором лимониой кислоты, фильтруют, прамы.вают БО.ДОЙ и сушат -над едким калием. Твердое вещество кристалл;зуют из метанола и получают выщеуказанное соеди1НбНие с т. пл. 215-220° G.

Пример 37. Г.идр.азид 3-тритилтиопропионпл - N -грег.бутокспкарбоиил - лизил-аспарагаиил - фенила.ланил - фенилаланина (Trit - SGHsGHaGO - Lys (BOG) - -Asn-Phe-Phe-XHNHa).

Раствор 0,900 г (0,9 ммоля) Trit - -SGHsCHsGO-Lys (BOG) -Asn - Phe- -Phe-OMe и 1 мл гидразинтидр.ата в ди1мет.илфорМа;м«де (20 мл) перемешивают пр.и 25° С 20 час. Растворитель отгоняют в вакууме. Остаток растирают с холодной водой, фильтруют, .промывают водой .и сушат, .получают .вышеуказанное соединение с т.

лл. 225-235° G.

Пример 38. 3 - тритилтиопропиоНИЛN -грег.бутоксикарбонпл - лизил-аспарагинил-фенилаланил - фенилаланил - триптофил-N -бутокспкарбон41л - лизил - О-третбутил-треонпл-фенилалапил - О-грет.бутилтреонил-О-грег.бутпл - серпл-2 - тритилтиоэтпламнд (Trit-SGHaGHoGO-Lys (BOG)--Asn-Phe - Phe-Trp - Lys (BOG) - -Thr (Bu) - Phe -Thr (Bu) - Ser

(Bu )-NHGHaGHaS-Trit).

К раствору 0,5 г {0,Ьммоля) Trit- SGHaGH.GO -4ys (BOG)- Asn - Phe - -Phe-NHNHj, в 20 мл диметилформамида и 5 мл дпметплсульфоксида, о.лал ;денному

до -20° G, добавляют раствор 1,4 н. 0,895 мл соляной кислоты Б этилацетате, затем 0,069 мл (0,6 ммоля) грвг.бутилнитрита. GiMecb перемешивают при -15° G 15 мин и добавляют охлажденный до -15° G раст23

вор 0,67 г (0,5 шюля) Н-Тгр-Lys (БОС) - -Thr (Bu)-Phe-Thr (BuO-Ser (BuO - -NHCH2CH2S - Trit « 0,214 мл (1,25 ммоля) N-эт.илд:и,изoпlpoпlИлa;MiEHa В 10 мл диметилформ.амида. Реажцианную смесь neipeMieшивают при -15° С 1 час при 25° С 20 час, затем упаривают в ва.. Остаток растирают с охЛажденяым на льду водным раствором 1 л. л.ИМ01ннюй йислоты, флльтруют, промывают водой « сушат «ад пятиомисью %ЧЩСН 00-Ър- ASn-The-Fne- trp- L -jg-Thr-TheI.

Раствор 0,5 г (0,216 мтоля) Trit-

-ЗСНгСНгСО-Lys (БОС)-Asn - Phe-

Phe-Trp-Lys (BOG)-Thr (Bu)-Phe--Thr (Bu)-Ser (Bu)-NHCHzCHjS-Trit

в 100 мл уксусной кислоты медленно добав- 15

ляют к перемешиваемому раствору 0,547 г

(2,16 ммоля) йода в ПО мл метанола при

25° С. По окончании добавления раствор

продолжают перемешивать при 25° С 1 час. &CH2CH,,CO-Lys(BOC)-Asn-Phe - Thr (Би)- Sei- (Bu) Декапёптид перемешивают в мл концентрированной соляной кислоты при 0° С в атмосфере азота в течение 10 мин,, добавляют 200 мл уксусной кислоты и раствор сразу лиофилизируют. Остаток растворяют в воде и лиофилизируют, затем остаток растворяют в верхней фазе смеси растворителей бутанолуксусная кислота/ вода (4:1:5) и помещают в колонку с химически модифицированным сшитым декстраном (Сефадекс С-25 М), приготовленным в нижней фазе смеси растворителей. Верхнюю фазу этой смеси применяют для десорбции декапептида. Фракции, содержащие чистый продукт, объединяют и упаривают в вакууме. Остаток растворяют в 5%-ной уксусной кислоте и лиофилизуют, получают вышеуказанное соединение в виде уксуснокислой соли. УФ-спектр: Хтах (МеОН) 290 мк (s4920), 282 мк, (е 5390). Это соединение в виде уксуснокислой соли повторно лиофилизуют из воды и получают вышеуказанное соединение в виде свободного основания; аминокислотный анализ: Lys 1,97; Asp 1,00, Thr 1,64; Ser 0,65; Phe 2,94. Пример 40. Метиловый эфир а,а-диметил - 3,5 - диметоксибензилоксикарбонилтриптофил-N-грет.бутилоксикарбонил - лизил-О-трег.бутил - треонил - фенилаланилО-трет.бутил-треонил-О-грет.бутил - серилS-тритил-цистеина. (DDCbo - - (ВОС)-Thr (BuO-Phe - Thr (Би) - -Ser-(Bu)-Cys (Trit)-OMe).

24

фосфора. Твердый остаток растирают с холодны м ьметалолом ,и Сушат, лолучают вышеуказалное ооединение; амилокислотный анализ: Lys 1,99; Asp I,il5; Thr 1,73- Ser

0,67; Phe 3,00.

П p И M e p 39. Циклический дисульфид З-хиопролноиил-лизил-аспараганил - фенилаланил - фенилаланил - триптофил - лизилтрбонил - фенилала-нил - треонил - сер1ИЛ-2тиоэтиламида;i

Раствор охлаждают до 0° С и медленно добавляют 1 н. водный раствор гипосульфита натрия для разрушения избытка иода (до обесцвечивания раствора). Растворитель отгоняют в вакууме и остаток растирают с водой. Осадок отфильтровывают, промывают несколько раз водой и сушат над пятиокисью фосфора, получают циклический защищенный декапептид формулы Thr-Ser-NHCH ОШЗ) I -Trp-Lys БОС)-ГЬг ГКеCH Сн Раствор диазометана в эфире добавляют к раствору 12,6 г (0,795 ммоля DDCbo - Тгр-Lys (ВОС)-Thr (Bu) - -Phe-Thr (Bu)-Ser (Bu)-Cys (Trit) - -on в 10 мл метанола при 0° С. Смесь перемешивают I час и упаривают. Остаток хроматографируют на силикагеле, применяя для элюирования 3% метанола и 0,5% пиридина в хлороформе. Упаривая элюат, получают вышеуказанное соединение, ЯМР (CDCIs) : 61,13 (S,18H), 1,27 (S,9H), 1,48 (S,9n), 1,77 (S,6H), 3,68 (S,3H), 3,79 (S,6H), 7,1-7,6 (m, 23H). Таким же образом, применяя вместо диазометана диазоэтан, 1-диазопропан, 2диазопропан, 1-диазобутан, 1-диазоизобутан, 1-диазопентан, 4-диазо-2-метил бутан, 1-диазогексан, 1-диазогептан или 1-диазо1-диазогексан, 1-диазогептан или 1-диазооктан, получают соответствующие этил-. октан, получают соответствующие этил-, пропил-, изопропил,- бутил-, изобутил,Пропил-, изопропил, амил-, 2-метилбутил-, гексил-, гептил- и RiTWIT-V TliTOTTJT П ГТТТ ТТ Т ат лТ1ТТ n/-i-m-iTT ттТ октиловый эфиры указанного соединения. Пример 41. Дециловый эфир S-тритилцистеина (Н - Сзз (Trit) - ОСН2 - (СН2)8СНз). Раствор 0,894 г (3 ммоля) хлоргидрата децилового эфира цистеина 0,78 г (3 ммоля} трифенилкарбинола и 0,42 мл этарата трифторида бора в (5,2 мл ) уксусной кислоте перемешивают при комнатной температура 1 час. Растворитель отго25

няют в вакууме и остаток хроматог рафируют на силикагеле, применяя для элюирования 40%-ный раствор этилацетата в гексане, содержащем 0,1% триэтиламина. После упаривания элюата получают в виде масла вышеуказанное соединение а 1,5 +25,84 (, CHCis) ЯМР (CDCis) 60,89 (t,I 5HZ, ЗН), 1,3 (S,16H), 1,55 (m,2H), 2,55 (m,2H), 3,25 (2d,I 5HZ, IH), 4,1 {t,, 2H).

Таким же образом, но заменив исходное вещество эквивалентным количеством хлоргидрата тетрадецилового эфира цнстеина получают тетрадециловый эфир

тритилцистеина, « + 13,8° (, СНС1г).ЯМР (CDCls) 60,89 (t,I 5HZ, ЗН), 1,3 (S,24H), 1,56 (m,2H), 2,55 (m,2H), 3,23 (2d,I 5HZ, IH), 4,1 (t.I 6HZ, 2H).

Таким же образом получают соответствующие нонил, ундецил, додецил и тридециловые эфиры S-тритилцистеина.

Сочетание вышеуказанных эфиров S-тритилцистеина с гидразидом гексацептида формулы DDCbo-Тгр-Lys (ВОС) - Thr (Bu)-Phe-Thr (Bu)-Ser (Bu) - NHNH2 no азидному методу дает нонил-, децил-, ундецил-, додецил-, тридецил- и тетрадециловый эфиры соответствующих соединений.

Пример 42. Формиат метилового эфира триптофил-№ -грег.-бутилоксикарбониллизил-0-грет. бутил - треонил-фенилаланил0-трет.бутил треонил-О-грег. бутил-серилS-тритил-цистеина; (Н-Тгр-Lys (ВОС) - Thr (Bu )-Phe-Thr (Bu )-Ser (Bu ) - Cys(Trit)-OMe - HCOOH).

Раствор 1,11 г (0,685 лшоля) DDCbo-

-Тгр - Lys (БОС) - Thr (Bu« ) - Phe-

-Thr(Bu )-Ser(Bu )-Cys(Trit)-OMe в 10 лл смеси муравьиная кислота/уксусная кислота/вода (1:7:2) перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Смесь упаривают и остаток растирают с водой. Твердое вещество отфильтровывают и сушат в вакууме, получают выщеуказанное соединение.

УФ-спектр;).шах (МеОН) :290ж«: (ебЗЗБ), 280 л4/с (е 8470), 273 мк (в 3720), 216 мк (е 78400).

Таким же образом, применяя другие гептапептиды из примеров 40 и 41 в качестве исходных веществ, получают этил-, пропил-, изопропил-, бутил-, изобутил-, амил-, 2-метилбутил-, гексил-, гептил-, окТИЛ-, нонил-, децил-, ундецил-, додецил-, тридецил- и тетрадециловый эфиры указанных соединений.

Пример 43. Метиловый эфир трег.бутилоксикарбонил-аланил-глицил-S - тритил-цистеинил- -° -трет, бутилоксикарбониллизил - аспарагинил-фенилаланил - фенилаланил-триптофил-N -трет, бутилоксикарбонил-лизил-0-трет.-бутил - треонил-О-трег.бутил-серил-S - тритилцистеина (БОС -

26

- Cvs(Trit)-Lys(BOC)-Asn- -Phe-Phe-Тгр-Lys (ВОС) -Thr (Bu ) - Ser(Bu )-Cys(Trit)-OMe).

К раствору 0,775 г (0,624 м.чоля) гндразида гептаиеитида ВОС - Ala - Cys(Trit)-Lys(BOC)-Asn-Phe - Phe- NHNH2 в 9 мл дпметилформамида, охлажденному до -20° С, добавляют 2,1 н. безводный хлористый водород в этилацетате

(1,56 ммоля), затем 0,0863 мл (0,749 ммоля), трег.бутилнитрита, смесь церемещивают при -15° С 15 мин. Раствор 0,900 г (0,624 ммоля) метилового эфира гептапептила Н-Thr - Lys(BOC)-Thr(Bu- ) -

Phe - Thr(Bu)(Bu )-Cys(Trit) - -OMe. HCOOH и 0,373 мл (2,184 ммоля) N-этилдиизопропиламина в 5 мл диметилформамида охлаждают до -15° С и добавляют к указанному выше раствору при

-15° С.

Полученную смесь перемешивают при - 15° С 1 ч и при комнатной температу зе 3 дня. Растворитель отгоняют в вакууме, остаток растирают с 1 н. лимонной кислотой, фильтруют, осадок промывают водой, и сущат над пятиокисью фосфора в вакууме. Высушенный остаток растирают с небольшим количеством метанола, отфильтровывают и сушат, получают вышеуказанное соединение, аминокислотный анализ;

Lys 2,06, цистеиновая кислота 1,75, Asp 0,94, Thr 1,93, Ser 0,97, Gly 1,00, Ala 0,88, Phe 3,10.

Таким же образом, применяя другие алкильные эфиры гептапептида, получают также этил-, пропил-, изопропил-, бутил-, изобутил-, амил-, 2-метилбутил-, гексил-, гептил-, ОКТИЛ-, нонил-, децил-, ундецил-, додецил-, тридецил- и тетрадеццловый эфиры указанных соединений.

Пример 44. Метиловый эфир циклического дисульфида трет, бутилоксикарбонил-аланил-глицил - цистеинил-№ -трет, бутилоксикарбонил-лизил-аспарагинил-фенилаланил-фенилаланил-триптофил-N -трет.бутилоксикарбонил-лизил-О-грег. бутил-треонил-фенилаланил-О-трет. бутил-треонил-Огрет.бутил-серил - цистеина (БОС-Ala- -Gly-Cys-Lys (ВОС)-Asn-Phe-Phe-

- Trp - Lys (BOC)-Thr (Bu )-Phe-Thr (Bu)-Ser (Bu)-Cys-OMe).

0,898 г (0,345 ммоля) метилового эфира тетрадекапептида ВОС-Ala-Gly-Cys (Trit) -Lys (BOC) -Asn-Phe-Phe-Trp-

-Lys(BOC)-Thr(Bu)-Phe-Thr(Bu ) - -Ser(Bu )-C3s(Trit)-OMe растворяют в 200 мл теплой уксусной кислоты. Раствор охлаждают до комнатной температуры и по каплям добавляют к раствору 5%-ного иода в метаноле (175 м.г, 3,45 ммоля) в течение 1 /. Смесь перемешивают еще 1 ч, охлаждают до 0° С и добавляют 1 н. 15 мл водного раствора гипосульфита натрия для разрушения избытка

иода. Растворитель отгоняют, остаток рас27

тирают с водой и сушат над пятиокисью фосфора в вакууме, получают вышеуказанное соединение.

Таким образом, применяя другие линейные заш,ип1енные эфиры тетрадекапептида, получают этил-, пропил-, изопропил-, бутил-, изобутил-, амил-, 2-метилбутил-, три(H--AlQ--Giu-CLiS-LyS.-Asn-The--i-lie-Trp-Lyg-Thr--The-Ti4r-S r-Счй-ОЛе 1

К раствору 0,345 ммоля циклическоголисул;:.ф BCG-Alc-Glg-Cg. tEOij)-Asn he- Iie-TrpЗег Эи)- Cif$ - ОМй (0,345 ммоля) в 29 мл концентрированной соляной кнслоты перемешивании в атмосфере азота в течение 10 мин при 0° С добавляют ледяную уксусную кислоту (290 мл) и раствор лиофилизуют. Остаток растворяют в 5%-ной уксусной кислоте и снова лиофилизуют. Остаток снова растворяют в 0,2 М растворе ацетата аммоиия, вносят в колонку с карбоксиметилцеллюлозой (Ватман СМ-23) и элюируют 0,2 М аммоний - ацетатным буфером. Элюат лиофилизуют, остаток подвергают разделительной хроматографии а колонке с химически модифицированным сшнтым декстраном (Сефадекс G-25M), уравновешенным вначале нижней фазой смеси бутанол/уксусиая кислота/вода (4 : 1 : 5), затем для десорбции метилового эфира соматостатина применяют верхнюю фазу. Чистые фракции объединяют, унаривают и лиофнлизуют, получают вышеуказанное соединение в виде уксуснокислой соли; УФ-спектр: Хшах (МеОН): 290 мк (s 4345), 287 мк (& 4385), 268 мк (е 4090). 265 мк (е 3900), 215 мк (е 38305). ЯМР (ДМСО-dG) б 3,63 (S, ЗН, ОСНз). Повторная лиофилизация этой соли из воды дает вышеуказанное соединение в виде свободного основания. Аминокислотный анализ: Lys 2,00; цнстеинопая кислота 1,28, Asp 0,95, Thrl,91, Ser 0,97, Gly 1,00, Ala 0,94, половина Cys 0,30, Phe 3,01. Таким же образом, применяя другие циклические дисульфиды формулы III, получают также этил-, пропил-, изопропил-. бутил-, изобутил-, амил-, 2-метилбутил-, гексил-, гептил-, октил-, нонил-, децил-, унSCH-CH(h)CO-Lys--A3u-Phe-Ph,e-Trp lyS-Thr Pb.e-rht-Ser-MCH(B.}CH,S

li 1

28

децил- и тетрадециловый эфиры, соответствуйших вышеуказанному соединению.

Пример 45. Метиловый эфир соматостатина; метиловый эфир циклического дисульфида аланил-глицил - цистеинил-лизил-аспарагинил - феиилаланил - фенилалаиил-трнптофйл-лизил - треонил - фенилаланил-треонил - серил-цистеина;

1 Lys SOO}-TIiri-Sa)- he-Tlii-, децил-, додецил-, тридецил- и тетрадециловый эфиры, соответствуюш,ие вышеуказанHo.viy соединению. Пример 46. Метиловый эфир соматостатина; метиловый эфир восстановленной формы аланил-глицил - цистеннил-лизиласнараганил - фенилаланил - фенилаланилтринтофил-лизил - треонил - фенилаланилтреоиил-серил - цнстеина (Н-Ala-Gly- -Cvs-Lys-Asn-Phe - Phe-Trp-Lys- -Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OMe). По методике примера 45, но заменив циклический дисульфид эквимолярным ко.KiKCCTiiOM соеднкения ВОС-Ala-Gly- -Cys (Trit)-Lys (ВОС)-Asn - Phe- -Phe - Trp-Lys (BOC)-Thr (Bu) - -pjje - Thr (Bu)-Ser (BuO-Cys - получают вышеуказанное coeОбработкой метилового эфира соматостатииа из примера 45 дитиотреитолом или бисульфитом натрия с гидролизом дитиосульфатного производного, полученного при этом, по.;;учают выше казанное соединение. Таким же образом, но применяя другие алкнльиые эфиры соматостатина формулы I, где R это IT-Ala-Gly-NH, В это COOAik, полученные по примеру 45, или другие линейные заш ищенные тетрадекапептидные эфиры, получают также этил-, пропил-, изопропил-, бутил-, изобутил-, амил-. 2-метилбучил-, гексил-, гептил-, октил-, нонил-, децил-, ундецил-, додецил-, тридецили тетрадециловый эфиры, соответствуюш,ие вышеуказанному соединению. Формула изобретения Способ получения пептидов формулы

29

где Ri - Н-Gly-Gly-Ala-Gly-NH,

li-Gly-Gly-Gly-Ala-Gly-NH или H-Leu-Gly-Gly-Ala-Gly-NH; W - H или COOH;

или R - H или NHR3, где R - ацил или бензоил; R - водород;

или R1 - Н-Ala-Gly-NH; R2 - COOAik, где Alk - ирямоцепочиый или разветвленный алкил Ci-Си, отличающийся тем, что лииейиый пептид формулы Trt - SCH2CH(R4)CO - Lys (ВОС)-Asn-Phe-Phe-Trp - Lys (BOG)-Thr-

ЗСНСН(Й )СО -Lys (BOG)-A3r.-Phe-Phe-Trp-L 4S(BOC)-Thr (Ba)-Phe -Thr (Би)(Зи } ЯСтЕ Ус11 (Ш)

где R2 и R имеют вышеуказанные значения, с последующим удалением всех оставшихся защитных групп соляной кислотой.

30

(Bu ) - Phe - Thr (Bu) - Ser (Bu) - NHCH{R2)-CHaS-Trt (II), где R2 - H или GOOH; R - BOG-Gly- Gly-Ala - Gly-NH; BOG-Gly -Gly- --Gly-Ala - Gly-NH или BOG-Leu- -Gly-Gly-Ala-Glv-NH;

или R2- H; R - H или NHR, где Rs имеет вышеуказанное значение;

или R2 - GOOAlk; R - BOG-Ala- -Gh-NH;

окисляют иодом или роданидом с получением соответствующего циклического дисульфидного ироизводиого формулы

-NH или H-Leu-Gly-Gly-Ala-Gly- -NH;

где R3 - ацил или бензоил, R2 - водород;

или R1 - Н-Ala - Gly-NH; R -

GOOAlk, где Alk - алкильная групиа с

прямой или разветвленной цепью Ci-GH.