Способ определения содержания липидов в гистологических срезах надпочечников Советский патент 1979 года по МПК G01N23/00 G01N33/48 A61B10/00 

Изобретение относится к медици|не, а точнее к радиационной медици не, изучающей состояния надпочечни ков при воздейств1 и на организм ра личных факторов внешней среды и ра рабатывающей соответствуквдие меры защиты. Известен способ определения содержания липидов в гистологических срезах надпочечников путем окрашивания их красителем 1. Содержание липидов в окрашенных средах оценивается на глаз, путем сравнения микрофотографий. Такой способ не дает точного определения количества липидов. Целью изобретения является повышение точности определения. - Для этого параллельно ставят кон трольные опыты, устанавливают время освещения негативов в опыте в контроле и по разнице времени освещения определяют процентное содержание липидов. Способ осуществляют следуннцим образом. Надпочечники подопытных и контро ных животных (например по пяти живо ных из каждой группы) фиксируют в 15%-ном растворе формалина. Через сутки после фиксации на замораживающем микротоме изготавливают срезы надпочечников толвдиной 7 Мк. Полученные препараты промывают дистиллированной водой и переносят для окраски в 0,1%-г-ный спиртовый раствор черного судапа. Через 30 мин препараты вынимают из красителя, промывают даютиллированной водой, переносят на предметное стекло и заключают под покровное стекло 16%-ным раствором поливинилового спирта. В зависимости от содержания липидов препараты рк)Ш1Шваются в различные оттенки черного цвета. Далее с одинаковых анатомических участков препаратов делают негативйые изображения юткрофотографий с ув ичением 1 х 300. С негативов на одйотипную фотографическую бумагу с использованием одинаковы фотореактивов печатают позитивные изображения одинаковой средней плотности. Для этого выбирают и устанавливают оптимальное время освещенйя негати- ВОВ. При этом время экспозиции изме«ряется секундомером.. Процентное содержание липидов вычисляется только при сопоставлении велич1 ны экспозиций позитивных нзобр - - - 3 женйй одинаковое средней плотности срезов надпочечников, полученных от подопытных и контрольных животных. в основу расчета принято следующее: чем больше липилов содержится в надпочечнике, тем интенсивнее по плотности и больше по протяженности .окрасившиеся участки среза и тям светлее изготовленный из него негатив микрофотографии. Для печатания на фотографическую бумагу с нега тивов при различном содержании липи доз потребуется различная пб времени экспозиция. Она находится обратнопрбпорциональной зависимости от ,коли чества содержащихся в срезе, окрашенных липидов. Величина экспозиций н-егативов окрашейных срезовна дпочёчнйкдв контрольных животных принимается за 100%-нбе содержание липидов. Все дальнейшие расчеты содержания липидоэВедутся на основании этого условия. Далее рассчитывают процентное содержание липидов в опыте и контроле путем сопоставления величины экспДзиций при фотографическом печатании с негативов, полученных от различных подопытных и контрольных животных. Для окончательного расчета берут; среднеарифметические показатели экспозиций от всех пяти животных на каждый срок исследования. Например, .среднеарифметическая величина экспозиций в опыте равна 10 сек, а в контроле 4 сек, что составит от шение ,5 или в процентном исч слении 100:2,. Следовательно, в данном случае в опыте липидов содержитгся 40% по отношению к контр лю. Аналогичные расчеты проводят по всем срокам исследований, что дает возможность определять процентное .. содержание липидов в динамике. Полу ченные данные проведенных опытбв с 96 введением продуктов ядерного деления показали, что содержание липидов в надпочечниках подопытных животных в зависимости от дозы облучения колебалось от 12,5 до 97,5% по отношению к контрольным животным. Предлагаемый способ повьтшает точность и объективность определения содержания количества.липидов в надпочечниках животных, так как дает возмоЖНость определить их процентное содержание. Положительный эффект способа проявляется в повышении уровня научных исследований, направленных на разработку средств защиты организма от вредных воздействий внешней среды. Этот способ не требует дорогостоящего оборудования и осуществляется параллельно с изготовлением обычных микрофотографий, необходимых при гистологических исследованиях надпочечников . Формула изобретения Способ определения содержания липи|ДОв в гистологических срезах надпочечников путем, окрашивания их красителем, изготовления нёгативов микрофотографий, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, параллельно ставят контрольные опыты, устанавливают освещения негативов в опыте и контроле и по разнице времени освещения определяют процентное содержание липидов. Источники информации, принятые-во внимание при экспертизе 1. Чучукало А. И. Изменение содержания липоидов, холестерина и аскорбиновой кислоты в коре надпочечников, - Медицинская радиоло-. гия, I960, т. 5, п. 3, с. 37-41.