СПОСОБ ОКРАСКИ АМИНАЗИНА НА ГИСТОЛОГИЧЕСКОМ ПРЕПАРАТЕ Российский патент 1997 года по МПК G01N1/30 G01N1/28 

Изобретение относится к медицине и предназначено для исследования внутриклеточной локализации аминазина.

Известны способы биохимического определения аминазина [1,2] Однако они не позволяют идентифицировать аминазин на клеточном уровне.

Целью изобретения является повышение точности и контрастности внутриклеточной локализации аминазина.

Эта цель достигается обработкой срезов, фиксированных в 10%-ном формалине, органов животных, предварительно получавших аминазин, в среде с ферроцианидом калия в качестве акцептора электронов и катионами меди как осаждающего агента. При этом ацетат и цитрат натрия используют для стабилизации раствора. Образовавшийся ферроцианид-ион осаждается катионами меди в виде кирпично-красного ферроцианида меди. При дальнейшей последовательной проводке срезов через 0,3 1%-ый раствор сернистого натрия и 0,1 0,2%-ый раствор азотнокислого серебра образуется малорастворимый сульфид серебра черного цвета. Возможна докраска препаратов любыми гистологическими красителями.

Пример. Подопытным крысам внутрибрюшинно вводят аминазин из расчета 25-75 мг на 1 кг веса. Контрольным животным инъецируют физиологический раствор. Через 0,5-1,5 часа животных забивают декапитацией, извлекают органы и помещают для фиксации на 24 часа в 10%-ый формалин.

На замораживающем микротоме готовят срезы толщиной 20-30 мкм и помещают на 1-1,5 часа в охлажденный до 4^oC раствор с pH 7,3-7,5, содержащий ацетат натрия, цитрат натрия, сульфат меди и ферроцианид калия при следующих соотношениях компонентов, мас.

Ацетат натрия 1,1 1,6
Цитрат натрия 0,17 0,18
Сульфат меди 0,07 0,10
Ферроцианид калия 0,01 0,02
Вода остальное
После инкубации следует промывка срезов в 4-х сменах дистиллированной воды в течение 20-30 минут.

Для усиления контраста осадка ферроцианида меди срезы обрабатывают 0,5-1 минуту в 0,3-1%-ом растворе сульфида натрия промывают в дистиллированной воде и помещают в 0,1-0,2%-ый раствор азотнокислого серебра. Срезы окрашивают гематоксилин-эозином и исследуют под микроскопом.

Гранулярный осадок сульфида серебра черного цвета четко маркирует места внутриклеточной локализации аминазина в органах, например в нейронах ретикулярной формации (фиг. 1) и в клетках коры надпочечника (фиг. 2). На обоих микрофотографиях увеличение составляет 900 раз. Срезу органов контрольных животных, обработанные способом, указанным выше, остаются неокрашенными.

Предлагаемый способ позволяет визуально исследовать в тканях организма накопление и метаболизм аминазина на клеточном уровне, а также может быть использован в судебномедицинской экспертизе для идентификации аминазина при отравлении последним.

Использование: в области медицины и предназначено для исследования внутриклеточной локализации аминазина. Сущность изобретения: проводят обработку срезов органов животных, фиксированных в 10%-ом формалине, предварительно получавших аминазин, в среде с ферроцианидом калия, сульфатом меди и затем преобразование осадка с помощью сульфида натрия и азотнокислого серебра. Способ позволяет селективно локализовать аминазин внутриклеточно и может быть использован в судебномедицинской экспертизе. 2 ил.

Способ окраски аминазина на гистологическом препарате путем импрегнации в растворе, содержащем сульфат меди, ферроцианид калия, преобразования осадка сульфидом натрия и азотнокислым серебром, отличающийся тем, что, с целью внутриклеточного выявления аминазина, а также повышения точности и контрастности его локализации, импрегнацию проводят при 4^oС в течение 1 - 1,5 ч и pH 7,3 7,5 раствором, дополнительно содержащим ацетат и цитрат натрия при следующих соотношениях компонентов, мас.

Ацетат натрия 1,1 1,6
Цитрат натрия 0,17 0,18
Сульфат меди 0,07 0,10
Ферроцианид калия 0,01 0,02
Вода Остальное
при этом преобразование осадка ферроцианида меди производят 0,3 1%-ным раствором сульфида натрия и 0,1 0,2%-ным раствором азотнокислого серебра.