1- @ -И @ -дезокси- @ -рибофуранозиды 5-триметилсилилурацила,проявляющие противовирусную активность Советский патент 1983 года по МПК C07H19/06 A61K31/7072 

Изобретение, относится к новёвм хи мическим соединениям 1-oU и/Э-дезок . си-В-рубофуранозидам 5-триметилсили урацила формулы I и li S 51(сн «о 1 1н (CH3)5Si-V но н о I проявляющим противовирусную активность.. Известно применение 5-иод-2-деэ оксиуридина для лечения вирусных заболеваний герпетической этиологии Г1 3. Цель изобретения- новыехимичес кие соединения: 1-о6- и -дезокси-D-рибофуранозиды 5-триметилсилилурац ла, проявлякхцие противовирусную активность и рас1аиряющие арсенал средств воздействия на живой организм - достигается путем -синтеза да ных соединений основанного на извествой реакции конденсации тримети сцлильных производных урацила с ацилгалогенозой.. f2 J. Способ получения 1-о6- и /5-дезокс .-0-рибофуранозидов 5-триметилсилилурсщила обычно осуществляют превращением 5 триметилсилилурацила в бис-О-триметилсилильное производное дейст вием гексаметилдисилазана, с последу щей конденсацией полученного бис-о-триметилсилильного производного 5-триметиЛсилилурацила с 2-дезокси-3 -ди-О-п-толу.ил-о -О-рибофураноэилхло ридом в присутствии SnC ц , снятием защитных групп метилатбм натрия и разделением изомеров тонкослойной хрс 4атографией обычными приемами. П р и м е р. 1-oL- и /З-дезокси-D:-рибофуранозиды 5-триметилсйлилурацила. Смесь,состоящую из 3 г (16,3 ммоль ) 5-триметилсилилурацила, 3 мг сульфата аммония и 12 мл гекСаметилдисилазаняг кипятят в течение 11 ч. Избыток гексаметилдисилазана отгоняют в вакууме, остаток растворяют в 12 мл безводного дихлорэтана и прибавляют к суспензии 5 .г (12,9 ммоль) 2-дезок си-3 f З-ди-О-п-толуил-оС-В-рибофурано.зилхлорида и 0,5 мл (4,2 ммоль) SnCl В 12 мл безводного дихлорэтана,Реакционную массу перемешивают 4 -ч при 20-22с, затем промывают последовательно насыщенным раствором бикарбоната натрия (2x5 мл) и водой. Растворитель отгоняют в вакууме, остаток хроматографируют на пластинах (2Ох х20 см) с силикагелем мкм /Chemapol, ЧССР) в системе хлороформ метанол (10:1), собирая фракцию с R|. 0,6. Получают 3,5 г (50,7%) 2-дезокси-З, 5-ди-о-п-толуйл-В-рибс фуранозил-5-триметилсилилурацила. К полученному веществу прибавляют 100 мл 0,1 н раствора метилата натрия в метаноле, через 2 ч реакционную массу нейтрализуют ионообменной смолой Дауэкс-50 х8 (Н) до рН 7 по универсальному индикатору, смолу отделяют, растворитель отгоняют в вакууме, остаток (2,56 г) хроматографируют на пластинах с силикагелем в системе этилацетат-метанол (9:1) при двухкратном пропускании систекы растворителей через пластину. Из зоны с большей подвижностью выделяют 0,87 г (44,4%) 1-0-Б-дезоксирибозида 5г-тримеТилсилилурацила с т.пл. (,Щ°+9,9°(с 1, спирт). УФ-спектр (96%-ный спирт): Л д 265 нм, 9060. ПМР (CDjOD, ТМС): 7,84 м.д. (Н), 6,31 м.д. (Н.,, J-,2 6,6 Гц), 4,42 м.д. (Н(),- 3,96 м.д. (HJ, J453rO Гц, J.fj 3,3,Гц), 3,76 м,д. (2Н(, JHH12 Гц), 2,27 м.д. (2ti,i), 0,21 м.д. (MeaSi). Найдено, %: С 47,20; Н 6,59; N 9,48; Si 8,97. /3 2° Вычислено, %i-C 47,03f Н 6,80; И 9,14; Si 9,1.7. Из зоны с меньшей хроматографической подвижностью выделяют 0,79 г (40,3%) 1-о1 Б-дезоксирибозида 5-триметилсилилурацила с т.пл. 64-66°С, 25,7° (с 1, спирт). УФ-спектр (96%-НЫЙ спирт) ,с 265 нм, f 1010. ПМР (CDjOD, ТМС): 7,95 м.д. (Н), 6,29 м.д. (Н , J,2(8,1 Гц,. J-f2 2,1 Гц), 4,37 м.д. (H,t), 4,28 м.Д. (), 3,57 м.д. -(2Hjf), 2,7 и 2,04 м.д. (Н2( и JZB Гц, , 15 Гц), 0,23 м.д. (MejSi ). Найдено, %: С 46,6; Н 6,50; Ы 9,47; Si 8,98. ., С. / 20Вычислено, %: С 47,03; Н 6,80; N 9,14; Si 9,17. Определение противовирусной активности. Противовирусная активность ин витро -дезокси-рибофуранозидов 5-триметилсилилурацила i определяют по следующей методике КуЛьтуры куриных фибробластов в дозе 10 мл внося ; в 100-граммовые матрицы. Повицкой. Через 48 ч при образовании сплошного монослоя культуры инфицируют вирусом герпеса простого типа 1 или осповакцины с множественностью от 0,01 до 1 на клетку. После одночасовой инкубации монослой трижды промывают средой . 199 и вносят препараг в дозах от 32 до 250 мкг/мл, матрицы помещают при З7с.на 18-20 ч. Каждую дозу препарата и каждую дозу вируса испытывают в двух матрицах. В качестве контроля служат: а) два матраца с клеточными культурами, инфицированными вирусом, но не обработанные препаратом, б) два матраца, в которые вносят препарат, Но культуры не инфицируют вирусом (контроль токсичности препарата). Через 18-20 ч после инфицирования культуры просматривают подмикроскопом и трижды замораживают на сухом льду. После последнего оттаивания материал центрифугируют при 1000 об/мин в те,чение 20 мин,- Затем методом титрования на однослойных культурах куриных фибробластов определяют в надосадочНой жидкости урожай вируса в опытных и контрольных культурах. Из испытуемых материалов готовят десятикратные разведения на среде 199 и вносят по 1 мл в пробирки с куриными фибробластами. Пробирки инкубируют при З7с в течение 5 дней и учитывают результаты по цитопатическому действию. При описанных условиях постановки эксперимента урожай вируса герпеса в контрольных культурах составляет 10 -10 ЦПДд-о/мл. а вируса осповакцины - 10 i-10 . При ,внесении заявленных препаратов урожай вируса в зависимости от дозы препарата и инфицирующей дозы вируса снижается на 2.-5 лг Щ1Д g(j , Препараты оказывают не только профилактическое, но и лечебное действие. Выраженной профилактической и лечебной эффективностью обладают дозы 62 мкг/мл и более. Тимидин снимал ингибирующее действие описанных соединений при внесении в клеточные культуры в эквимолярных концентрациях, что приводило к полному восстановлению репродукции вируса герпеса. Описанные соединения не являются токсичными для клеток, поскольку они не вызывали видимых цитопатических изменений в неинфицированных клетках при 7-дневном наблюдении. При внутри брюшинной инъекции мышам ДЦ рПрепара та составляла более 400 мг/кг веса животного. Данные о противовирусной активнос ти заявляемых препаратов приведены в табл. 1, 2 и 3.

Таблица 1 Ингибирующее действие 1-о1-дезокси-В-рибофуранозида 5-триметилсилилурацила (ot-дезоксирибозида) на вирус герпеса при внесении в клеточные кул ,туры через 1 ч после инфицирования. Доза пре-I Число ЦПД Множественность парата, ингибируинфицированиямкг/мл прев тЯ о/клетI паратом Лечебную эффективность oi-дезоксирибозида ин витро определяли по следующей методике. Культуры куриных фибробластов инфицируют вирусом простого герпеса с множественностью . 0,1 ЦПДуд на клетку. -Через 4 ч инкубации культуры трижды промывают средой 199 и вносят препарат в дозе 250 мкг/мл. Далее опыт проводят по описанной вьойЁ методике. Урожай вируса в контрольных культурах составляет lOC ЦПД50/МЛ, а в культурах, обработанных препаратом,он равен 10 ЦПД5о/мл т.е. препарат ингибировал -урожай вируса на 4 лг . Способность тимидина снимать ингибирующее действие ot-дезоксирибозида о,пределя1ст по следующей методике. Клеточные культуры заражают вырусом герпеса с множественностью 0,1 ЦПД на клетку, после одночасовой инкубации моаослой трижян промьшают раство ром Хенкса и вносят в клеточную куль fTypy последовательно сС-дезоксирибоЦи и Т1йиидин в эквимолЩЖых концентра1ЩЯХ (по 250 мкг/мл), Эквимолярные. концентрации тимидина практически полностг ю снимают ин.гибируквдий эффект препарата, что приводи т к полному восстановлению репродукции вируса rejMieca до 10 , ; . Учитывая высокую противовирусную активность ci-дезок.сирибозида ин витро, была исследована его терапевтическая эффективность ин йитро.при экспериментальном герептическом кератите кроликов. Препарат применялся в виде инстил ляций б раз в сутки водного раствор в 0,5%-ной концентрации. Предвари-. тельно в течение Ю дней изучалась переносимость 0,5%-ного раствора препарата тканями глаз кроликов. Токсикоаллергических осложнений не наблюдалось . Изуче«ие терапевтической -эффективности препарата проведено на 10 кро-. ликах. Из них 5 были контрольными, которыми б раз в сутки проводилась инстилляция дистиллированной воды.. Заражение осуществляют по общепринятой методике путем скарификации роговицы и внесения в конъюктивальную полость глаз кроликов. Лечение начиналось на 5 сутки от момента заражения, когда развивалась типичная картина герпетического точечного кератита. Об эффективности препарата судили по степени снижения индекса тяжести герпетического кератита в баллах в опытной группе по сравнению с контрольной. На чертеже представлены результаты исследования. Как видно из чертежа, уже на вторые сутки от началалечения отмечается задержка процесса в опытной группе и прогрессирование в контрольной, В последующие сутки разница между леченньми и контрольными глазами возрастает. Таким образом, экспериментальные данные указывают на выраженное противовирусное действие сС-и /1-дезоксирибозидов, при сравнительно низкой токсичности.

l-ct- И /а-Дезокси-в-рибофуранози- rfbj 5-триметилсилилурацила, формулыI и IIяо,0,lifi T°(СНз)з31\-'1^Н-0.Д^А^БКСНэ);«YHO^HOПпроявляквдие противовирусную актив- ^ ность.S(Л15гвконтроль^ SЮ00^Iч>&IЙ5557 H? Дни после заражения12Опыт.>&1.0-