Предлагается новое химическое соединения пирролонового ряда, а именно 1-фенил-3-окси-4-этоксикарбонил-5-n-бромфе- нил-2,5-дигидропиррол-2-ону (I) формулы
которое проявляет противовирусную активность и может быть использовано в медицине.
Целью изобретения является поиск в ряду пирролонов новых соединений, обладающих широким спектром высокой противовирусной активности, превосходящей активность известных противовирусных препаратов.
П р и м е р. 1-Фенил-3-окси-4-этоксикарбонил-5-n-бромфенил-2,5-дигидропиррол-2-он (I).
К раствору 3,0 г (0,0159 моль) диэтилового эфира щавелевоуксусной кислоты в 5 мл этанола прибавляют смесь из 2,95 г (0,0159 моль) n-бромбензальдегида и 1,45 мл (0,0159 моль) анилина в 10 мл этанола. Реакционную смесь выдерживают при 20оС в течение 24 ч, выпавший осадок отфильтровывают, перекристаллизовывают из толуола и получают 3,2 г (50%) целевого продукта. Т. пл. 191-193оС.
Найдено, С 56,84; Н 3,98; Br 19,61; N 3,31.
С19Н16BrNO4
Вычислено, С 56,72; Н 4,01; Br 19,83; N 3,48.
В ИК-спектре соединения I, снятом в вазелиновом масле, присутствуют полоса поглощения С=С-двойной связи при 1655 см-1, полосы поглощения лактамного карбонила при 1680 см-1, сложноэфирного карбонила при 1705 см-1 и енольного гидроксида при 3312 см-1.
В ПМР-спектре, снятом в CDCl3, присутствуют триплет и квадруплет протонов этоксигруппы при 1,15 и 4,07 м.д. синглет протона в положении 5 гетероцикла при 5,43 м.д. и мультиплет ароматических протонов при 7,25 м.д.
Соединение I испытывали на противовирусную активность в отношении вирусов везикулярного стоматита, герпеса простого, осповакцины, венесуэльского энцефаломиелита лошадей, бешенства и клещевого энцефалита.
При проведении испытаний использовали тканевую культуру первично-трипсинизированных фибробластов эмбрионов кур (ФЭК) производства отдела культур клеток БелНИИЭМ, выращенную на 5%-ном гемогидролизате, беспородных белых мышей-сосунков обоего пола, вирусы осповакцины (ВОВ), герпеса простого I типа (ВГП), везикулярного стоматита (ВВС), венесуэльского энцефаломиелита лошадей (ВВЭЛ), вакцинного бешенства, клещевого энцефалита (КЭ), клещей.
Культуры ФЭК, выращенные на чашках Петри и дне пенициллиновых флаконов, отмывали от ростовой среды средой 199, наносили 0,00002 БОЕ/клетка ВОВ, ВГП, ВВС и ВВЭЛ в среде 199. После часового контакта вируссодержащую жидкость удаляли и наносили покрытие на основе среды 199, включающее 1% бактоагара; 0,005 нейтрального красного, антибиотики. Для культур, выращенных на дне пенициллиновых флаконов, в состав покрытия добавляли соединение I с тем, чтобы его конечная концентрация составила 12,50 мкг/мл и менее (метод редукции бляшек). После застывания агарового покрытия на чашках Петри вырезали лунки на всю глубину слоя. В лунки устанавливали мерные (0,05 мл) отрезки стеклянной трубки, заполненные взвесью излучаемого вещества (скрининг-тест). После 48-часовой инкубации культур сосчитывали количество бляшек (при исследовании методом редукции бляшек) или измеряли диаметр концентрических зон токсичности и подавления образования бляшек (при исследовании методом скрининг-теста). Титр вируса рассчитывали, исходя из количества бляшек.
Токсические свойства соединения I для ФЭК исследовали на культурах, выращенных на боковой стенке флаконов из-под антибиотиков. Вещество разводили на среде 199 с добавлением 1% диметилсульфоксида и наносили на отмытые от ростовой среды клетки. Инкубацию вели 96 ч, после чего регистрировали цитопатическое действие изучаемого соединения при малом увеличении микроскопа. Затем в поддерживающую среду добавляли 0,1 мл 0,1%-ного водного раствора нейтрального красного на 1 ч, клетки трижды отмывали раствором Хенкса без фенолового красного, заливали на 1 ч этанолом и оценивали степень поглощения нейтрального красного клетками по оптической плотности. Последнюю измеряли на СФ-26 при 510 нм. Максимальной толерантной концентрацией (МТД) считали наивысшую дозу соединения I, не вызывающую изменений клеточной морфологии и нарушения поглощения красителя.
Критерием антивирусного действия служили наличие и величина зоны подавления образования бляшек, снижение титра вирусов в присутствии различных концентраций соединения. Минимальной активной концентрацией (МАК) считали дозу, в присутствии которой регистрировалось снижение титра вируса на величину, соответствующую не менее 1,25 lg БОЕ/мл. Химиотерапевтический индекс (ХТИ) высчитывали как отношение МТД/МАК.
В экспериментах на животных использовали дозу вируса КЭ и бешенства, соответствующую 10 LD50/0,25 мл. Инфицирование проводили подкожно, суспензию вируса готовили на среде 199. Раствор соединения I на бидистиллированной воде с добавлением 25%-ного диметилсульфоксида вводили мышам подкожно в дозах 12,5 и 6,25 мкг/жи- вотное за 24 и 1 ч до заражения и еще в течение трех дней после него один раз в день (лечебно-профилактическая схема) или в течение 5 дней по одному разу в день, начиная с дня инфицирования (лечебная схема).
Наблюдение за мышами вели в течение 21 дня. Об эффективности соединения судили по увеличению выживаемости в сравнении с контрольной группой. Животным контрольной группы вводили растворитель.
Исследования на животных выполняли одновременно с известным противовирусным препаратом амантадином. Оба вещества исследовали в каждом эксперименте параллельно. Использовали водный раствор амантадина.
В экспериментах на тканевой культуре установлено, что соединение I обладает способностью подавлять размножение ВГП, ВОВ, ВВС и ВВЭЛ (см. табл.1).
При этом в отношении ВОВ он проявляет высокую активность, в отношении ВГП и ВВС среднюю. Значимое снижение титра ВВЭЛ отмечено только в присутствии соединения в концентрации, соответствующей МТД.
В опытах на животных соединение I обеспечивает высокий защитный эффект, достигающий 62,5% снижения летальности мышей и увеличения продолжительности их жизни до 5,4-10,3 дней (см. табл.2).
В экспериментах на белых мышах, зараженных вирусом КЭ, соединение I также проявило четко выраженное протективное действие. Выживаемость животных на 7 сутки составила 87,5% при 100% гибели контроля, продолжительность жизни возросла в 1,5 раза.
В крови белых мышей, получавших 1-фенол-3-окси-4-этоксикарбонил-5-n-бромфе- нил-2,5-дигидропиррол-2-он (I), подавлялось размножение вируса КЭ более чем в 100 раз. Если в контроле у животных развивалась напряженная вирусемия (4,25 lg LD50/0,03 мл), то у подопытных животных титр вируса в крови был 2,0 lg DD50. Известно, что при арбовирусных инфекциях, таких как КЭ, при низком уровне вирусемии преpывается диссеминация возбудителя через питающихся иксодовых клещей, которые являются переносчиками и длительными хранителями вируса КЭ. В экспериментах, где на зараженных вирусом КЭ животных, получивших соединение I, подсаживали для питания личинки иксодовых клещей, последние получали ничтожную дозу вируса, на 2,25 lg LD50 меньшую, чем в контроле. Более того, под влиянием соединения I сами клещи погибали в 68,8% случаев. Следовательно, соединение I не только ингибирует вирус КЭ в организме животных, но и подавляет интенсивность циркуляции названного арбовируса между позвоночными животными и переносчиками кровососущими членистоногими.
Таким образом, соединение I обладает способностью подавлять размножение вирусов простого герпеса, осповакцины, везикулярного стоматита, венесуэльского энцефаломиелита лошадей. Оно высокоэффективно ингибирует указанные вирусы, ХТИ для вируса осповакцины составляет 8, а для вирусов простого герпеса и везикулярного стоматита 4. Активность соединения I превосходит активность известного препарата амантадина в 4 раза.
Кроме того, соединение I эффективно защищает лабораторные животные от инфекции, вызванной вирусом бешенства. На 100 62,5% снижается летальность животных и увеличивается продолжительность их жизни до 5,4-10,3 дней.
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
Производные 3-(2-метил-4-тиазолил)- или 3-(5-этоксикарбонил-2-фурил) хромонов, обладающие противовирусной активностью | 1986 |
|
SU1415716A1 |
Противовирусное средство | 1991 |
|
SU1835291A1 |
ШТАММ РЕКОМБИНАНТНОГО ВИРУСА ОСПОВАКЦИНЫ, ЭКСРЕССИРУЮЩИЙ СТРУКТУРНЫЕ БЕЛКИ ВИРУСА ВЕНЕСУЭЛЬСКОГО ЭНЦЕФАЛОМИЕЛИТА ЛОШАДЕЙ И ПРИГОДНЫЙ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ | 1993 |
|
RU2091489C1 |
НАТРИЕВАЯ СОЛЬ 2-МЕТИЛТИО-6-НИТРО-1,2-4-ТРИАЗОЛО[5,1-C]-1,2,4-ТРИАЗИН-7(4H)-ОНА, ДИГИДРАТ, ОБЛАДАЮЩАЯ ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТЬЮ | 2005 |
|
RU2294936C1 |
ПРОТИВОВИРУСНОЕ СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ НУКЛЕАЗЫ БАКТЕРИЙ РОДА SERRATIA | 2014 |
|
RU2580242C2 |
СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ОПАСНЫХ НЕЙРОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ | 2016 |
|
RU2642312C1 |
Диметилцетилбензиламмоний хлорид, проявляющий вирулицидную активность | 1977 |
|
SU653251A1 |
Вакцина и способ повышения иммуногенности и специфической активности средств профилактики инфекций | 2020 |
|
RU2741834C1 |
Бензотиазолиламид 4-нитро-N-(4-этоксифенил)антраниловой кислоты, проявляющий противовирусную активность | 1985 |
|
SU1340076A1 |
Штамм бактерий Serratia species, обладающий противовирусной активностью | 2017 |
|
RU2650762C1 |
Изобретение относится к гетероциклическим соединениям, в частности к 1-фенил-3-окси -4-этоксикарбонил-5-n-бромфенил - 2,5-дигидропиррол -2-ону, который проявляет противовирусную активность и может быть использован в медицине. Цель - выявление более активных соединений указанного класса. Получение ведут реакцией диэтилового эфира щавелевоуксусной кислоты со смесью n-бромбензальдегида и анилина в спирте при комнатной температуре. Выход 50%, т. пл. 191 - 193oС. Брутто-ф-ла C1 9 h1 6 BrNO4. Новое соединение подавляет размножение вирусов простого герпеса, осповакцины, везикулярного стоматита, венесуэльского энцефаломиелита лошадей. Активность превосходит активность амантадина в 4 раза. Кроме того, новое соединение защищает лабораторных животных от инфекции, вызванной вирусом бешенства. Защитный эффект при лечении соединением состоит из 100 - 62,5% снижения летальности животных и увеличения продолжительности их жизни до 5,4 - 10,3 дней. 2 табл.
1-Фенил-3-окси-4- этоксикарбонил-5-п-бромфенил -2,5-дигидропиррол-2-он формулы
проявляющий противовирусную активность.
Первичное изучение антивирусных свойств синтетических и природных соединений | |||
Методические рекомендации | |||
Минск: БелНИИЭМ, 1986. |
Авторы
Даты
1996-05-27—Публикация
1988-10-17—Подача