Способ получения пуринсодержащих соединений Советский патент 1982 года по МПК A61K31/52 A61K35/66 

(5) CriOCOfe ПОЛУЧЕНИЯ ПУРИНСОДЕРЖАЩИХ СОЕДИНЕНИЙ

--

Изсйретение относится к медицинской промышленности, а именно производ ству медицинских препаратов.

Известен способ получения пуринсодержащих соединений путем ферментации штаммов-продуцентов, отделения биомассы, извлечения сорбцией с последующей промывкой и десорбцией, упариванием, пропусканием раствора черезионообменный адсорбент, с последую- . щей очисткой Cl .

Однако известный способ обеспечивает недостаточно высокую степень чистоты - 90.

Целью изобретения является повыше;ние чистоты целевого продукта.

Эта цель достигается тем, что перед сорбцией культуральную жидкость обрабатывают сульфатом алюминия, доводят е до рН 5,2-5,5, отделяют надосадочную жидкость, раствор пропускают через ионообменник, содержащий сульфогруппы,и кристаллизуют.

П р и м е р 1. К 50 л культуральной жидкости, содержащей следующие Компоненты, г/л: рибоксин 8, гипоксантин 0,2, гуанозин 2,2, с рН 6,0 добавляют k% по весу от обгема культуральной жидкостиал юминия сернокислого для установления значения рН, равного 4,0. Затем значение рН культуральной жидкости доводят до 5,2 с помощью 25%-ного раствора натра едкого, культуральную жидкость нагревают до 50°С и отфильтровывают на фильтр -прессе. Биомассу промывают 10 л смягченной воды, которую присоединяют к нативному раствору. Натйвный раствор п ропуекают через батарею колонн с волокнистым углеродным материалом, скорость пропускания 400 мл/ч.см. Фильтрат нативного раствора, не содержащий пуринов, сливают в трап. Колонны промыварт 5 л смягченной воды для вытеснения нативного раствора. Десорбцию пуринов проводят спиртовоаммиачной смесью (25%-ный водный раствор аммиака. , 67 1МЯГ 4f2HH iH вода, этиловый спирт -9б.,ный, взятые вобъемном соотношеНИИ 2:3:5, со скоростью 75 мл/ч - см при ().. Элюат со средней концентрацией пуринов 15 г/л упаривают под вакуумом при температуре греющей воды не выше 80 дб кбнцёнтрацииТ2Ь г/л, Полученный концентрат постепенно охлаждают до температуры и вадерживают при этой температуре 4-6 ч ,: что приводит к кристаллизации пуринов. Дь1павший осадок отфильтровывают, про-,.,мь1вают от маточника ацетоном. Получен ный сырец содержит рибоксин и гуаноЗИН. Вес сырца в пересчете на сухой составляет 400 г. Осадок сырца растворяют при нагревании в смягченной воде с концентрацией 80 г/л, отфйльтровывают через угольную подушку, разбавляют водой до концентрации 10 г/л и полученный l acfmp npbny f mr колонну диаметром 4О мм и высотой 80р ммс; волркнийШмадсорбЖтШу HWсущим сульфогруппы. Предварительно адсорбент переводят в Н-фбрму и отмьг вают водой до значения рН 5.0. Раствор после колонны контролируют хроматографичёскй на содержание гуайозина и рибоксина. ,По насыщении сорбента колоннУ отМывают водой, проводят дасорбцию сорбированного на адсорбенте рибоксина. Растворы рибоксинГа,Тне содержащие гуаноЗин, после нейтрализа. ции концентрйрованнь1м раствором аммиака упаривают до кЬнцентрации 120 г/л. Полученный концентрат нагревают до ™ 95°С, пропускают через угольную подуш. куи проводят кристаллизацию, как описано выше. Выпавший рибоксин отфйльтровывают, промывают этиловым спиртом : If высушивают- Получают г рибокси.«..на, что составляет бОГ содержания его в- культуральной жидкости. Степень чи- ТстотъПпреп та 981. Г Волокнистый адсорбент отмывают . спиртовр-аммиачной элюирующей смесью и водой и йсПбльзуют в пбслёдующих операциях выделения рибоксина. Адсорбёнт, несущий с;ульфЬгруппы,ПРслётщательной отмывки рибоксина водой обрабатывают раствором 0,1 н солянрй кислоты, проводят таким образом десорбцйю Ту анозина. Полученными элюат нейтрэлизуют концентрированным pacteopbx аймйака до Значения рН 7,0. Выпавййй гуанбзин отфйлйтрбвывают и перёкрйст:аллизовь вают; из воды. .Получают 40г гуанозина 9б|-ной степени .

,,,-.-t2,4.. : .-.,- ;-;, -- -.-- - . ---. .-.-.

..f VfT--- - -: --1;;-;-т :--.---:.,;-. .-..-.-.,.-

,-i--..W-u.-l.; ч;. ,;:...- .i ;f)l -- 4,...., П р и ме р 2. Берут JOO г сырца рибоксина, полученного по способу, описанному fi примере 1, содержащего 80t рибоксина, 5% гипок-сантина и 7% 5 гу нозина. Сырец растворяют в 5-мл смягчейной воды при , получают концентрацию пуринов 9б г/л. Раствор профильтровывают через угольную подушку,разбавляют 60 л воды до конto центрации7,4 г/л и пропускают через кблонну с сульфокатионитом КУ-23 в водородной форме (0,5 кг сульфокатио- нита). Профильтрованный через смолу раствор, подвергшийся депигментации is и содержащий только рибоксин, собира WH-пбСЛ-Г нейтрализации концентрированным раствором аммиака упаривают до концентрации 120 г/л. Проводят кристаллизацию, как описано выше, и м получают Зб2 г чистого рибоксина чистоты, что составляет 90 от содержания ,его в сырце. . ..: П р и м ер 3. Берут 10 л культу25 ралЬной жидкости, содержащей 6 г/л гипоксантйна и 8 г/л рибоксина (инозина), доб;авляют 2% сульфата алюминия идоводят рЙ раствором едкого натра до значения 5,5. Культуральную зо жидкость нагревают до 50°С и биомассу отфильтровавают на фильтр-прессе. В полученный нативный раствор вносят 600 г активированного угля, и при перемёшиваййй в течение 30 мин проводят jj адсорбцию. „ , ,. „л, -, Уголь отфильтровывает, промывают . водой для вытеснения нативного раствора, после чего при ,„ перемешивании проводят десорбцию спир..Трво-аммиачной. смесью при 40 С. . концентрации 80 г/л и проводят кристаллизацию,: аналогично описанной в предыдущи; примерах. Осадок, содержа 5 щийгйпрксайтин и рибоксин, отделяют, промывают а етоно м и растворяют при -нагревании до температуры 40°С в смяг чённ6й водб с концентрацией 6 г/л. . Раствор пропускают через колонку, со 50 смолой КУ-2-8 в водородной форме (120 г), Кр лрНку промывают водой для десорбции рибоксина (инозина), после чего гипоксантин десорбируют 0,1 н. .раствором рляной кислоты. Элюат нейтрализуют концентрированным раствором аммиака и проводят кристаллизацию гигг6ксантйна7 0садок отделяют, пррмыва ют этилРВ||;м,рпиртом и высушивают. По5 ;&лучают ЦП г гипоксаитина 9 %-ной сте.пеии чистоты. Растворы, содержащие только рибоксин (инозин), упаривают, пропускают горячий раствор через угольную подушку и проводят кристаллизацию рибокси на. Осадой рибоксина отделяют, промы вают этиловым спиртом и высушивают. Полумают 30 г рибоксина (инозина) 97%-ной степени чистоты. Активированный уголь после десорбции промывают водой до нейтрального знамения,рН и используют в последующих операцйях. - . Пример. В 100 л культуральной жидкости, содержащей 10 г/л ри&эксина (инозина) и 2,7 г/л гуанозина, добавляют 6% сульфата алюминия. После доведения раствором едкого натра до значения культуральнуЮ жидкость нагревают до и биомассу отфильтровывают. Биомассу промывают 10 л смягченной воды для вы теснения нативного раствора, и промыв ную воду присоединяют к нативнок у раствору. Далее проводят выделение способом, олисанным в примере 1. В ре зультате полумают г рибоксина и 70 г гуанозина. Степень чистоты рибоксина 982,, гуанозина 95. Предлагаемый /;пособ обеспечивает выход и качество готового продукта. Чистота целевого продукта повышается на 8-15%. Формула изобретения Способ получения пуринсодержащих соединений путем ферментации штаммовпродуцентов, отдележя биомассы, извлечения сорбцией с последующей промывкой и десорбцией, упариванием, пропусканием раствора через ионообменный адсорбент с последующей очисткой, о тл. ичающййся тем, что, с целью повышения чистоты целевого продукта, перед сорбцией культуральную жидкость обрабатывают сульфатом алюминия, доводят ее до рН 5,2-5,5, отделяют надосадочную жидкость, раствор пропускают через ионообменник, содержащий сульфогруппы и кристаллизуют. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР № 382676, кл. А 61 К 31/33, 1973.