Штамм "бк-харьков Советский патент 1979 года по МПК A61K39/04 

Штамм Mycobacterium tuberculosis (БК-Ха ков № 841, вариант штамма Vallee типа Bovis, предназначенный для изготовления противотубер кулезной вакцины). Изобретение относится к ветеринарии и пред ставляет собой новый штамм микобактерий туберкулеза, который может быть использован для приготовления противотуберкулезных препаратов вакцины, других антитенов, а также сывороточных препаратов. .Для профилактики туберкулеза людей во всем мире применяется живая вакцина из микобактерий туберкулеза штамм БЦЖ/BCG (Ч)В ветеринарии вакцинопрофилактика ВЦЖ как в Советском Союзе, так и большинстве стран мира, в настоящее время не осушествляется. Одной из основных причин этого, помимо недостаточной нммуногенности БЦЖ является возникновение продолжительной аллергии у вакцинированных БЦЖ животных, сохраняющейся в течение года и более, и отсутствие пригодных для практики методов дифференциации поствакшшальных реакций на туберкулин от постинфек ционных. Одним из средств для улучшения вакцинопрофилактики туберкулеза у людей и создания препарата для таковой у чсивотных является применение новых, более иммуногенных, вакцинных штаммов микобактерий туберкулеза. Эти штаммы должны быть безвредными и обладать достаточными для защиты вакцинированных от развития туберкулезного процесса иммунизирующими свойствами, а также не обусловливать возникновения продолжительной аллергии. Целью изобретения является получение штамма микобактерий туберкулеза, отвечающего основным требованиям, предъявляемым к вакцинным 1итаммам: безвредный, достаточно иммуногенный, чтобы защитить вакцинированных от развития туберкулезного прюцесса. Полученный штамм микобактерий туберкулеза БК-Харьков имеет следующие морфологическую, культуральную и другие биологические характеристики. Морфологические признаки: слегка изогнутые, иногда с утолщениями на концах, полиморфные, грамположительные палочки, длиной 2-8 мкм и толщиной 0,2-0,5 мкм, типично окращиваются no- методу Циль-Нильсена, стойко сохраняющие эту окраску при воздействии кислот, и1елочи и спирта, не образующие спор и не имеющие капсулы. Цитоплазма бактерий имеет гомогенный вид и содержит гранулы, микрогранулы и вакуКультуральные свойства: на поверхности жидких питательных сред формируется рыхлая, морщинистая пленка светло-желтого цвета. На плотных питательных средах (Петрова, Виногра-дова) растет в виде изолированных колоний типа R с образованием пигмента лимонно-желто го цвета. Растет в аэробных условиях. Анаэробиотические свойства не отмечаются. Оптимальные параметры температуры 37,8-38,0С рН 4,58,0. Биохимические свойства: снижена активность каталазы, уреазы и дегидразы. Иммуногенные свойства: индекс защиты БК-Харьков в эксперименте на морских евинках после однократного подкожного введения им 5 мг БК-Харьков и последующего заражения 0,01 мг вирулентной культуры микобактерий туберкулеза штамм Vat lee, а также на телятах после двукратной внутрикожной вакцинации по 2 мг/кг или трёхкратной подкожной вакцинации в дозах 0,4-0,6-0,8 мг/кг веса теленка с интервалом 5 суток и экспериментального заражения 15 мг подкожно вирулентной культурой штамма № 8, либо естественного заражения после длительного контакта с больными туберкулезом телятами, достигает 100%. Остаточная вирулентность: незначительная, первичные туберкулезные комплексы не формируются. Аллергизирующие свойства: аллергия слабо выражена и относительно кратковременна ( у морских свинок до двух, а у телят до шести меся къ). Приобретенные штаммом микобактерий туберкулеза БК-Харьков вирулентные свойства оказались стойкими, наследственно закрепленными Реверсионное пассирование в течение 10 лет не обнаружило восстановления его исходной вирулентной характеристики. Штамм БКХарьков был получен из вирулентного штамма микобактерий туберкулеза Vallee, бычьего типа, который пассировали в течение 1-1,5 лет на мясо-пептонно-глицериновом бульоне, содержащем 3-15% препарата Эктерицид . (врдррастворимые продукты окисления рыбьего жира в физиологическом растворе хлорида натрия), причем концентрацию экстерицида в среде выращивания микобактернй туберкулеза увеличивали с 3 до 15% по мере возрастания кратности пассажей. Сравнительная характеристика штаммов микобактерий туберкулеза БК-Харьков и БЦЖ приведена в таблице.

У морских свинок и телят 100% до 2, а у телят до 6

У людей 73,2-83,7%

ЦЖ Вакцинированные телята лишь переживают контрольных животных, а через 3-9 месяцев после заражения у них развивается инкапсулированный туберкулез.

Как видно из таблицы, щтамм БК-Харьков отличается от производственного штамма БЦЖ высокой иммуногенной активностью (индекс защиты 100%), почти полной апатогенностью, (не формируется первичный туберкулезный комплекс), ареактогенностью, а также незначиУ морских свинок

Первичные туберкулезные комплексы не формируются месяцев

Формируются первичные туберкулезные комплексы Они инкапсулируются, а затем рассасываются (сроки исчезновения от 100 дней до 4 лет)

тельной аллергенностью - относительно кратковременной и слабо выраженной аллергической реакцией на туберкулин, что дает возможность в практике проводить дифференциацию между вакцинированными и инфицированными туберкулезом животными. Отмеченные преимущества штамма/БК-Харь по сравнению с БЦЖ были установлены на ла лабораторных животных и на 300 телятах. Штам БК-Харьков безвреден для телят и обладает иммуногенн остью. В лабораторных опытах по определению иммунитета у 60 телят, вакцинированных различными методами - внутрикожно, подкожно и перорально - установлен иммунитет, соответственно методу прививки, у 100 - 40% животных при искусственном заражении, (отсутствие имму нитета отмечалось у телят, которым вакцина бы ла применена перорально). В производственных условиях из 489 телят, привитых вакциной внутрикожно и исследованных аллергическим методом после прививки, не реагировали на туберкулин от 20 до 70 % живот ных (по группам), а у трех телят из пяти, поло жительно реагировавших при туберкулинизации и убитых для исследования через 6-9 мес. после вакцинации, обнаружены патоморфологические изменения во внутренних органах и лимфатических узлах, типичные для туберкулеза. Экономический зффект от использования вакцины БК-Харьков для профилактики тубе кулеза только крупного рогатого скота в масштабах страны может достигнуть сотен миллионов рублей в год, так как гибель одного теленка в возрасте до двух лет обходится в 350-500 руб, колеблясь в зависимости от его породы, веса, себестоимости и других показателей в каждом хозяйстве. Формула изобретения Штамм Mycobacterium tuberculosis БК-Харь ков, вариант штамма Vallee типа Bovis, предназначенный для приготовления противотуберкулезной вакцины, хранится в коллекции Харьковского научно-исследовательского института микробиологии, вакцин и сывороток им. Мечникова. Морфологические признаки: слегка изогнутые, иногда с утолщениями на концах, полиморфные, грамположительные палочки длиной 2-8 мкм и олшинойО,2-0,5 мкм, типично окрашивающиеся по методу Циль-Нильсена, стойко сохраняющие зту окраску при воздействии кислот, щелочи и спирта, не образующие спор и не имеющие капсулы. Цитоплазма бактерий имеет гомогенный вид и содержит гранулы, микрогранулы и вакуоли. Культуральные свойства: на поверхности жидких питательных сред формируется рыхлая, морщинистая пленка светло-желтого цвета. На плотных питательных средах (Петрова, Виноградова) растет в виде изолированных ко.10НИЙ типа R с образованием пигмента лимонно-желтого цвета. Растет в аэробных условиях, анаэробиотические свойства не отмечаются. Оптимальные параметры температуры 37,8-38,0°С, рН - 4,5-8,0. Биохимические свойства: активность каталазы, уреазы и дегидразы снижена. Иммуногенные свойства: индекс защиты морских свинок и телят достигает. 100%. Остаточная вирулентность: незначительная. Первичные туберкулезные комплексы не формируются. Аллергизирующие свойства: аллергия слабовыражена и относительно кратковременна (у морских свинок до двух, а у телят до шести месяцев). Источники информации, принятые во внима ние при зкспертизе 1. Вейсфейлер Ю. К. Руководство по сывороточному и вакцинному делу. - М., 1943, с. 241253.