Способ получения гемоглобина Советский патент 1980 года по МПК A61K35/18 

(54)

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕМОГЛОБИНА

. t .

, Изобретение относится к гематологии, а именно к способу получения .нативного гемоглобина.

Известен способ получения гемоглобина из эритроцитарной массы путем ее отмывки, и гемолиза с последующей очисткой гемолйзата от балластных веществ, отделения осадка и стабилизации полученного раствора гемоглобина 1 .

Однако известный способ не обеспечизвает достаточной чистоты конечного продукта вследствие образования метгемоглобина и попадания в раствор фосфолипидов, повышакадих прокоагулянтную активность. Кроме того, по этому способу невозможно получить концентрированный раствор гемоглобина, так как происходит заметное нарастание прокоагулянтной активности препарата.

Цель изобретения - повышение концентрации и чистоты целевого продукта.

Цель достигается тем, что очистку гемолйзата от балластных веществ ведут обработкой его смесью бентонита и коллоидной кремниевой кислоты, взятых в соотношении 7:1, и затем пропускают раствор гемоглобина

через колонку с катионитом в натриевой форме.

Способ осуществляют следующим образом. К эритроЦитарной массе, отмытой раствором хлористого натрия, добавляют охлажденную (О + ) дистиллированную воду, гемолиз ведут в течение 30-40 IVMH. Полученный гемолиз ат обрабатывают смесью бентони0та и коллоидной кремниевой кислоты, взятых в соотношении 7:1, и центрифугируют. ОбразовавшийсяpacTEfbp гемоглобина пропускают через колонку с катионитом в натриевой форме.

5

Пример. 2л эритроцитарной массы, оставшихся после отделения стромы, смешивают с 8 л 1,6% хлорида натрия. Смесь перемешивают и содержимое вносят в сепаратор Сатурн-2,

0 где происходит отделение эритроцитов от более легкой части (воды). Полученный 1-1,2 л отмытых эритроцитов вливают в бутыль, содержащую 4 л охлажденной до 2°С дистиллиро5ванной воды. Гемолиз происходит в течение 40 мин при перемешивании. В ту бутыль к 5 л гемолйзата добавляют 400 г смеси бентонита и коллоидной кремниевой кислоты, взятых в соотно0шении 7:1. Содержимое размешивают при плавном вращении ее в гориэон ёШ йОМйапра1шёййй в течение l ч. После чего смесь гемолизата с сорбен том центрифугируют в центрифуге ЦЛРв течение 30 мин при 3000 об/мин и температуре 2С 3 л полученного супернатанта (раствор гемоглобина) пропускают под давлением 0,6-0,8 атм через асбестовые пластины (типа СФ) фильтра Сальникова, затем - через ко лонку с катионитом КУ-2 в натриевой форме, содержа1аую 1рр г катионита. К фильтрату (около 3 л) добавляют 90 г порошкообразной глюкоза, рН рас вора доводят до 7,2-7,4, 4J 10%йЬгб гйдрокарбоната натрия ТнаНСОд ) . Стерилизуют раствор посредством фильтрации через фильтры Миллипор с Диаметром пор 0,22 ммк. Фильтрат разливают во флаконы емкостью 250 или 500 МП,замораживают при теМпера туре не выше и затем подвергаю лиофилиз адии, Хранится препарат в сухом состоянии при в темном. Препарат гемоглобина, полученный предложенным способом, содержит в ср нем в 2 раза меньше ьютгемоглобина и обладает меньшей ПрОкОагулянтноЙ активностью при большей (в 2 раза) концентрации гемоглобина в растворе. Способ позволяет повысить выход гемоглобина, а также получить препарат его, свободный от стромы и растворимых фосфолипидов, повЕлшающих прокоагулянтную активность. Формула изобретения Способ получения гемоглобина из эритроцитарной массы путем ее отмывки и .а с последующей очист-кой гёкюлизата от балластных веществ, отделения осадка и стабилизации полученного раствора гемоглобина, отличающий ся тем, что, с целью повышения выхода и чистоты целевого продукта, очистку гемолизата от балластных веществ ведут обработкой его смесью .бентонита и коллоидной кремниевой кислоты, взятых в соотношении 7:1, и затем пропускают раствор гемоглобина через колонку с кафионитом в натриевой форме. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Великина М.М. Получение и экспериментальное изучение гемоглобинсодержащего продукта (эригем), автореферат диссертации кандидатской, Л., 1967, с. 18.