Способ приготовления питательной среды для культивирования продуцентов -лизина и глутоминовой кислоты Советский патент 1980 года по МПК C12B3/14 C12D13/06 

Вариант 1. Вреакторе с машалкой готовят 5-20%--ную, преимущественно 15%-ную, водную суспензию пшеничных отрубей.. При постоянном перемешивании гидролизуют ее собственными ферментами при в течение 18- 24 ч. Отделяют экстракт от шелухи.. Вариант 2. Готовят 15-20% ную водную суспензию пшеничных отрубей, добавляют 0,5% (от объема суспензии) ферментного препарата протосубтилина ГЗк и проводят гидролиз в течение 6-12 ч при 45-48° С и рН 7,2-7,4 (при необходимости регулируют рН добавлением ;аммиачной воды) . Экстракт отделяют от шелухи„ Вариант 3. 5-15%-ную водную суспе зию отрубей подвергают термической обработке при 0,5-1,0 ати в течение 40-60 мин и отделяют экстракт от шелухи , Вариант 4. Готовят 20%-ну1о суспен зию отрубей в 3%-ной соляной кислоте и гидролизуют при 1,5 ати в течение 2 ч и отделяют экстракт от шелухи. Полученный экстракт отрубей является богатым источником веществ,спо .собствующих интенсификации биосинте|3а и увеличению выхода продуктов. Экстракт отрубей содержит (от.содержания сухих веществ) is редуцирующие вещества 11-78, азот 11-17, калий 3,6, ФОСФОР 0,7, аминокислоты 0,6-1,7, тиамин 400-1500 мкг%, биотин 20-50мкг%. Сущность способа заключается в следующем. , готовят жидкую питательную среду, в состав которой входит- источник углерода, например меласса или сахара, источник азота, например сернокислый или мочевина, и в качест ,ве биостимулятора экстракт от рубей, полученный по одному из вариантов. Среду перемешивают, устанавливают рН (6,8-6,9 и стерилизуют,. После стерили зации среду направляют в стерильный, ферментатор. Культивирование продуцентов L-лизина и L-глутаминовой кис лбты из рода Brevibacterium и Micrococcus на полученной среде ведут известным способом. П ример1.К40г отрубей .до 270 млдобавляют водопроводную воду, перемешивают при в течение 24 ч, фильтруют, переносят экстракт В ферментатор (рабочая емкость 2 л) добавляют 600 г мелассы (50% РВ) и 70 г сернокислого аммония, доЪавотют водопроводную воду до 2 л и перемешивают, Добавляют 20 мл 4 н NaOH до рН 6,9 и 0,6 г пеногасителя подсолнечного масла, стерилизуют при 1,2 эти- в течение 1 ч и охлаждают до 30°С. 200 мл 24-Ч посевной культуры Brevibacterium flavnm RC-11 предварительно выращенной на качалке «а жидкой питательной среде аналогич ного состава, вносит в среду, культи вируют в аэробных условиях поддерживая давление О 0,1 атм в течение первых 24 ч и 0,05 атм в течение последующих часов, рН 7,3-7,8 и температуру 31-33°С. Культивирование продолжают до практически полного использования редуцирующих веществ. После культивирования культуральная жидкость содержит: L-лизин монохлоргидрат 55,0 г/л, биомасса 17,0 г/л, остаточные сахара 0,5%, сухие вещества 15%. Пример2. К 20 г отрубей до 100 лл добавляют .водопроводную воду и 0,5 г ферментного препарата протосубтилина ГЗх, перемешивают 6 ч при , добавляют 4 н. NaOHi до рН 7,3 фильтруют, переносят экстракт в ферментатор, добавляют 600 г мелассы (50% РВ), 70 г сернокислого аммония и водопроводную воду до 2 л, В качестве .пеногасителя используют подсолнечное масло. Устанавливают рН 6,9 добавлением 4 н. NaQH.стерилизуют при 1,2 ати в течение 1 ч и охлаждают до 30° С. Затем проводят опыт, как в примере 1. Культуральная жидкость содержит: L-лизин.монохлоргидрат 48,2 г/л, биомасса 16,7 г/л, остаточные сахара 0,7%, сухие вещества 18,0%. Примерз. Суспензию 60 г отрубей в 400 мл водопроводной воды подвергают термической обработке при 0,5 ати в течение 60 мин, фильтруют, охлаждают до 30°С, переносят- в фермеь татор, добавляют 600 г мелассы, 70 г сернокислого аммония, воды до 2 л и 0,6 г подсолнечного масла и проводят опыт аналогично примеру 1. Культуральная жидкость содержит: L-лизин монохлоргидрат 53,7 г/л, биомасса 20,4 г/л, остаточные сахара 0,7%, сухие вещества 20,3%. П р и м е р 4, 40 г отрубей гидролизуют в 3%-ной соляной кислоте (до 200 мл) при 1,5 ати в,течение 2 ч, фильтруют и нейтрализуют NHji ОН до рН 7,0. В ферментаторе к экстракту добавляют 600 г мелассы, 70 г сернокислого аммония, 0,6 г пеногасителя и воду до 2 л. Проводят опыт аналогично- примеру 1, Культуральная жидкость содержит : L-лизин 48,7 г/л, биомасса 18,3 г/л, остаточные сахара 0,7%, сушие вещества 19,3%. Пример 5. Получают экстракт отрубей как в примере 1, 20 мл его переносят в ферментатор (рабочая емкость 2 л) и добавляют, г: сахароза 200, , К,НРО)2, MgSO 7Н. О 1, MnSO 4Н„О 0,2, вода до 1,9 л. Пеногаситель синтетический. Среду стерилизуют при 0,8 ати в течение 30 мин о 30 г мочевины в виде 40%-ного водного раствора стерилизуют отдельно и добавляют к среде после стерилизации. 100 г культуры MiQprococcus glu- tamicus 541 Р, предварительно выращенной на аналогичной среде, вносят в среду и культивируют при рН 6,8 7,8, температуре 30il°C и аэрации срецы{давление 0 20-40% насыщения).Культивирование проводят до практически полного использования сахара. После 68 ч культивирования культурашьная жидкость содержит s L-.глутаминовая кислота 47,5 г/л, биомасса 9,2 г/л, сахар 0,5%.

Предложенный способ- приготовления питательной среды для культивирования продуцентов L-лизина- и L-глутаминовой кислоты позволяет получить стерильные питательные среды при обычных режимах -стерилизации, способствует интенсификации массообмена по кислороду и тем самым ускорению .биосинтеза (продолжительность биосинтеза сокращается на 20%), вследствие чего увеличивается коэффициент использования аппаратуры, а также увеличению выхода целевых продуктов (выход L-лизина увеличивается на 29-68%).

.Формула изобретения

Способ приготовления питательной

среды для культивирования продуцентов L-лизина и L-глутаминовой кислоты путем смешивания в условиях аэрации источников углерода и азота, минеральных солей и биостимулятора, о тличающийся тем, что, с цепью интенсификации процесса и увеличения выхода продуктов,в качестве биостимулятора используют экстракт

пшеничных отрубей.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР 171727, кл. С 12 Д 13/06, 1965.