Способ инактивации грибного токсина Советский патент 1980 года по МПК A61K31/225 A01N25/30 A61K31/14 

Изобретение относится к области ми, дотоксиколопии, в частности к способам инактивации грибных токсинов, конкрег- . но токсина дендродохина -остротоксгического метаболита гриба Dendfodochlum ioxicum Pidope. et Bifioii. Известен способ инактивации токсина афлатоксина в пищевых продуктах .смесью окиси этилена с метилмормнатом ij , Известен также способ инактивации бактерийных токсинов, основанный на . использовании поверхностно-активного вещества - гексаметилендиизоцийната, избыток которого при гидролизе превращается в гексаметилендиамин и угольную кислоту 2 .. . Однако ни одиним из этих способов нельзя инактивировать токсин дендродохи Целью изобретения является создание способа, позволяющего эффективнй инак- . тйвировать то.ксин дендродохин. Указанная цель достигается тем, что в качестве поверхностно-активного вещес йа используют этоний или додецоний, которые в 0,1-1, концентра- , ции водного раствора йа 10-30 мг/мл дендродохина, а инактивацию Проводят в течение 1-3 сут. П р и Kt е р . Инактивацию образуемого грибом токсического метаболита дендродохийа проводили путем добавления к спиртовым растворам, содержащим раз- личные концентрации (1г-100 мг/мл) кристаллического препарата токсина, 0,1; 0,5; 1,0%-йЫХ растворов атония или дедоцойия. Реакционные смеси объвмам. 2-10мл инкубировали при комнатной температуре в течение lv-7 сут. В качестве контроля использовали соответствующей концентрации спиртовые раств-оры дендродохина, к которым добавляли определенные .объемы дистиллированной воды без инактивато- ров. Присутствие дендродохина в реакционных смесях после контакта с поверхностно-активным веществом (ПАВ) устанавливали по изменению фунгистатической активНости микотоксина по отношению к чуествитепьиой к нему тест-культуры . .Canolido s-tettatorolea штамм 63 методом бумажньтх дисков или серийных разведений, чроматографически, кожной пробой в опытах на лабораторных животнйх. Бумажные диски диаметром 4 мм смачивали в контрольных растворах и опытных смесях, затем наносили на поверхность агаризованного сусла (среда, оптимальная для роста тест-культуры), засеянного С, St8№o -toio(eoi штамм 63, и выдерживали в термостате при 24 ч. О количественном содержании ден- дродохина в контроле,и реакционных смесях судили по величине стерильных зон

угнетения роста тест-культуры, образуемых, вокруг дисков.

Серийные разведения применяли для учета степени дендродохининактивирующего действия ПАВ по изменению анти- биотич эской активности токсина в контроле и реакционных смесях (до и после контакта с flAB), которую выражали.,

концентрациями дендродохина в 1 мл . . жидкого сусла ( Баллингу) в пробир,

ках, где отмечали полное угнетение роста тест-культуры. Нагрузка тест-культурьг составляла 200 ООО микробных кле-; ток в 1 мл питательной среды. Время ... ..инкубации 18-24.ч.при 37°С. .. На полости хрома тографической бумаги (Ленинградская быстрая) шириной 1 см и длиной 20 см, на расстояний 3 см от нижнего конца наносили 0,01мл

йШйёЙуёмого раствора W даспе псйёу-ilra- ;

вания помещали хроматограммы в хро- матографические камеры с хлороформом.

После прохождения растворителем отт меченного расстояния (20 см) хрома тограммы высушивали на воздухе и проявляли биавтографически в специальных кгове- тах на агаризованном сусле, засеянном чувствительной к дендродохину культурой C.8teeBoiioic ec( штамм 63 в течение 24 ч при .

О присутствии в контрольных и опыт-. ных пробах дендродохина или других токсических компонентов судили по наличию, величине и расположению стерильных зон угнетения роста тест-культуры. R ден- дродохина в хлороформе 0,8-0,9..

Кожную пробу на кролике осуществляли следующим образом. На депелированный участок кожи стеклянной палочкой наносили контрольные растворы, содержащи;4 соответственно разные концентрации

дендродохина или ПАВ, а также опытные

реакционные смеси (по 0,5 мл). Учет

дерматонекротической реакции проводили

через каждые 24 ч на протяжение 7-10

УТ-.

Характеристика дендродохининактиви- рующего действия этония и додецония по степени фунгистатической активности и изменению содержания дендродохинав реакционных смесях в зависимости от

концентрации ивремени контакта Токсина с ПАВ представлена в таблице.

. Как видно из таблицы, 1 мг/мл это ;:гия инактивирует в течение 1 сут до 4 мг/мл дендродохина, 1 мг/мл додецония - 3 мг/мл дендродохина.

Этоний 0,1 ( 1) ЗО

0,5 ( 5) 30

1,0 ( 10) 30-40

lOO

20

14

Этоний 1%-ный водный раствор Додецоний 1%-ный водный раствор тИ Отсутствие зоны угнетения роста . .Увеличение концентрации ПАВ в реак ционных смесях (5,10 мг/мл), Характеристика дендродохининактивирующего действия этрния и доДецония (по величине сггерильных зон угнетения роста C.sieEgcttoideoi штамм 63 и изменению концентрации токсина в реакционных смесях), приводило к сокращению сроков инактивации и повышению количества обезвреженного токсина. Содержание в реакционных смесях 5 мгУмл атония или додецония за 24-48 ч приводило к. инактивированию до 40 мг дендродохина, 10 мг/мл - в течение 2 сут обезвредили 100 мг токсина. Установленная биологическим путем инактивация дендродохина ПАВ в зависимости от концентрации и времени дейстбия инактйваторов подтвердилась хро- матографически. Зона угнетения роста тест-культуры(R дендродохина в хлороформе 0,8-0,9) при биавтографическом. проявлении хроматограмм отсутствовала.

Продолжение таблицы сультуры. Полная детоксикация дендродохина во всех вариантах опыта отмечалась на третьи сутки контакта токсина с исследуемыми концентрациями ПАВ, Проверка дерматонекротическрго действия реакционных смесей в контрольных растворах, содержащих разные количества дендродохина, показала, что токсин до контакта с ПАВ также , как и кЬнтрольные растворы дендродохина, при нанесении, на депели{эованную кожу кролика.вызывает воспалительную реакцию четвертой степени, которая характеризовалась покраснением, сильным отеком, глубоким сухим некрозом, захватывающим и подкожную клетчатку, образованием долго не заживающих язв. После трехсуточного контакта дендродохйна в концентрации ЗОмг/мл с 0, растворами ПАВ, а также двухпуточного контакта токсина в концентрации 30-40 мг/мл с 0,5 и 1,0 о-ными . 7740 растворами ПАВ, дерматонекрогическая ревкция на коже кролика не отмечалась. Полученные данные позволяют считать возможным использование изученных инактиваторов для обезвреживания кормов, пораженных остро токсическим грибом DendpOdochium toiticum. Формулаиз обретения Способ инактивации грибного токсина, основанный на использовании поверхностно-активного вещества, отличаю-,2498 . щ и и с я тем, .что, с целью эффективнего инактивирования токсина дендродохина, в качестве поверхностно-активного вещества используют атоний или s додацоний, которые берут в 0,1-1,0%ной концентрации водного раствора на 10-30 мг/мл дендродохина, а инактивацию его проводят в течение 1-3 сут. Источники информации, Q . принятые во внимание при экспертизе 1. Заявка.ФРГ № 2557599, кл, А 01 N 9/02, 1977/ 2. Патент ФРГ № 2137630, кл. А 61 К 39/02, 1975.