(54) СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ « ЛЕЧЕНИЯ ОСТРЫХ РЕСПИРАТОРНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ -ВИРУСНОЙ ЭТИОЛОГИИ
Изобретение относится к медицине и касается профилактики и лечения тяжелых форм заболеваний вирусной этиологии. Известен способ профилактики и лечения острых респираторных заболеваний вирусной этиолргии путем интраназального введения иммуноглобулина . Однако при известном способе воз можна аллергизация организма, аллер гические реакции и различные осложнения. Целью изобретения является исключение аллергизации организма, снижение тяжести течения болезни и уменьшение числа осложнений. Эта цель достигается тем, что вводят секреторные антитела класса секреторного и /муноглобулина А, выд ленные из женскргомолозива. Пример 1. Приготовление тест-препарата. Из антисыворотЬк к человеским иммуноглобулинам А и G (IgA, IgG) методом экспресс-хроматографии вы деляют IgG и IgA фракции. Белок этих фракций фикс 1руют посредством бидиазотированного бензидина (БДВ) на поверхность стабилизированных формалином эритроцитов барана. Определение клеток, сенсибилизированных с.екреторным иммуноглобулином А и иммуноглобулином G. В опыт берут 40 крыс. 15-ти животным из каждой группы вводят интраназально под легким эфирным наркозом по 0,5 мл препаратов секреторных антител. Другим 15 животным такое же количество гамма-глобулина. Остальные 10 крыс составляют контрольную группу. Взвеси клеток эпителия трахеи интактных животных соединяют с тест-препаратами - эритроцитами, сенсибилизированными анти-lgA или анти-Т.дС антителами. Полученные смеси выдерживают 30 мин при комнатной температуре и взаимодействие между эпителиальными клетками и Тест-препаратом наблюдают с помощью фазово-контрастного микроскопа. Сенсибилизированные антителами эритроциты не прикреплялись к поверхности клеток эпителия трахеи интактных крыс. Через 3, 24 и 48 ч после введения котвотннг. секреторных антител или гамма-глобулина изучают взаимоотнсяаение клеток эпителия трахеи
жйвоЗРНЕ х подопытных групп с теми - же тест-препаратами (см.табл.1). Через 3 ч кбличество клеток, сенсибилизированных IgA и IgG антителами, не различалось между собой (11,0± ±0,14% и 10,242,45%). Однако через 24 и 48 ч было выявлено достоверно (р 0,05) больше клеток, сенсибилизированны с SlgA. .,,„,-,..-,-:,„.--:.
В табл,2 приведены результаты взаимодействия секреторного иммуноглобулина А и иммуноглобулина G с клетками эпителиальной выстилки крйс
Эти данныеуказывают на более йыраженное сродство антит ел класса SjgА с ;клетками эпителиальной выстилШ дыкатёльных путей .
Пример 2. в опыт 20 крыс .Десяти жив от нЕлм «нтранаэаль 0,05
Таблица 2
745523
нО вв6д;ят 0,5 мл препарата секреторных антител, 10-ти другим (контрольная группа) Плацебо-раствор е5ычьего сывороточного альбумина, содержащего 1,8 мг белка в 1 мл. Сутки спустя f всех крыс инфицируют 100 ИД 50/0,1 мл вируса гриппа А (Ленинград)75(НЗ №2). Еще через трое суток, то есть в момент максимального развития инфекции/ живот ных,;забивают и с помощью
непрямой гемадсорбции определяют кр личес до, клеток эпителия трахей, йн фицйрЪванных вирусом. У животных, защищенных секреторными антителами, оно было в 4,5 раза ниже (р «сО,01). Эти данные представлены
5 в табл.2. Они указывают на выраженную антиинфекцйонную активность препарата секреторных антител.
Т а б л и ц а 1
6,05
0,05
Пример З.В опыт берут 480 мькией, распределенных на 12 групп, б контрольным группам животных вводят интраназально по 0,08 мл плацебо (см,пример 2}. Трем группам подопытных мышей вводят такое же количество SlgA фракции, полученной при гельфетрации препарата секреторных антител. Трем другим опытным группам - цельный препарат секреторных антител. Сутки спустя животных из контрольных и опытных групп инфицируют 1,10 и 100 ид 50/0,1 мл вируса. гриппа А(Виктория)72(НЗ №2), адаптированного к организму «лшeй. Eiue через
3 суток всех животных забивают. Легкие от каждых двух мьшей соединяют в одну пробу и в экстрактах, полученных из этих двух органов, определяют присутствие вируса путем заражения культур хорионаллантоисной оболочки 11-дневных развиваюгцихся куриных эмбрионов. Введение sigA фракции (р 0,02) защищает от ре25
0,02
Пла14
25 цебо
Секреторныйиммуноглобулин А
0,02
Плаце11
20 бо
Из приведенных данных можно закючить, что SIgA фракция является основным действующим началом препарата секреторныхантител, что препарат секреторных антител и выделенная из него SIgA фракция обладают выраженной антиинфекционной активностью.
Прим е р 4. Определение концентрации антител в препаратах секреторных антител и сывороточного гамма-глобулина вне организма.
Опыт начинают с определения содержания антител к вирусу гриппа А(Виктория)72(НЗ 2) в препаратах , секреторных антител и титрованного гакма-глобулинч1. В реакции непрямой гемагглютинации (РИГА) титр антител в препарате гамма-глобулина оказался в 8 раз выше, чем в препарате секреторных антител. В реакции биологической нейтрализации тот же препарат нейтрализовал на 2 ед., т.е. в 100 раз больше вируса, чем препарат секреторных антител.
1продукции 10 ИД 50/0,1 мл вируса, а введение цельного препарата от репродукции 100 ИД вируса (см. табл.3).
В табл.3 приведена антиинфекционная активность препарата секреторных антител и выделенной из него фракции секреторного иммуноглобулина А. .
.Таблица 3
2515
0,02
. 0,02
18
2524
0,02
14
Определение профилактич йк(5Й активности препаратов секреторных антител и сыворото 1ного гамма-глобулина модели экспериментальной грип 5 позной Инфекции белых мышей.
В опыт берут 480 мышей, 160 животным контрольной группы интраназально вводят плацебо, 160 животным первой подопытной группы - секреторные антитела, и еще 160 мышам - гамма-глобулин. Через 24 ч всех животных интраназально инфицируют 10 LD 50/0,1 мл Вируса А(Виктория)72 (НЗ №2).В течение 12 дней учитывают
55 гибель мышей. К концу опыта достоверное (,05) снижение смертности было обнаружено лишь у мышей, получавших секреторные антитела. Однако, в период с 4 по 7 день достоверно
gQ меньше погибали животные в обеих подопытных группах, чем в контроле. Таким образом, при заражении большими дозами вируса антитела класса IgG составляющие действующее начало
5 гамма-глобулина, способны только за
