Аппарат для культивирования клеток и вирусов Советский патент 1980 года по МПК C12B1/10 

мерный фильтр 23 1C на.бивкой из стекловаты и Пй|рО|ВОЙ рубсМШКрЙ.

Абоо.рбер |выиол;нен в виде ззпо.таенйого абсор бирующнм материалом 24 перфори/розанного peaepisyaipa 14 с центрально устадавленн.ой .на его ля-шце перфорированной Обечай КОЙ 25. Перф;0|р1ирава1Н1ный резервуар 14 соединен съемию болтами 26 с афышкой 27, имеющей центральное отверстие для цро.хода 1культураль:ной жидкости Hsaixoeплеиной на н:иж.нем коздце (вала 8 шривода, который заключен в сильфо.н 28, за кроплснный :iio .краям хомутами 29.

Включенне п:не В МЮ1Н|рИ|&ода осуш,еСТ|ЗЛЯется 13 3a.D.ii:CHiMCiCTH от сигнала С датчика 9 рИ.

Аппарат работает .следующим О:б:раз1с;м.

П;рО|Мытый а5сорби ру1ОЩ:.Й материал 24 {Стеклл ные , шарики, Кольца и т. л.) засылается IB шростратЮпво между сте,Н1ками ;перф,ори:раванного ipe3epiByaip.a 14 и перфорироза.н.ной обечайиси 25. Затем перфОрирова;нный ;резер;в;уар 14 |; ри1креитляюг к 27 1болта:ми 26, чэго крыглкп 3 аппарат ; в Сборе € |1гнев:мопрк,В|ОдоМ; рсзер|Вуарам 14 и датчика уш 9-12 устана-зливается ,и зЗКропляется ) OMIKOCTH /. Затем i3 руба:ш1ку 2 подается пар через патрубхж 22, и аппарат стерилизуется 2 ч при 130° С. По.сле охлаждения ам|кость / заполняется на 0,65 своего объема клеточной суспензией с оптимальней Л0сев:кой концентрацией я.лн данного типа клеток, а в рубащку 2 через патрубки 21, 22 подается от термостата вода с температурой +37° С.

После седи:ментации .клеток и iH.x адг-езш; на повархмости Збсорбирующего материала 24 :начинается .процесс пролиферации клеток, Который 1сот1рс1вождается и.. расп1.е1плвн:ием глюкозы в питательной среде с накоплением углекн слоты ,и происхо.дит смещение рН в .кислую сторону. В время си1г.нал с датчика 9 р.Н а1ВТ01мат;иче1аки включает подачу газовой смеси через 2-камерный фильтр 23 для коррегирования рН литательк.ой сроды до .оштнмальной 1зеличикы, и .ой.нов ременно подается в пневлювд .ТИ1НДР 4 через штуцер 7 с.жатый . П0рфорИ|ро:в.ак:ный рсз-аршуар 14 :пол:ни:маотся из жида 1ости, при этом п.итатель:Н-ая среда, .находящаяся над ним, через цептралыйое отверстие лфьжгки 27 пврете кает в перфорированную обечайку 25 и затем через абсорбирующий материал 24 - а емBvocTb 1. TaiMHiM образом .соЗ|Дается дополнительное радиальное перемешивание питательной среды. Во время подъема перфорированного резервуара 14 и К|ратковременной экспозиции в течение 1-2 мин происходит насыщение питательной среды газовой смесью, а поверхность клеток также реагирует с газовой средой. Затем перфорированный резервуар 14 вновь погружается в питательную среду за счет подачи ожато.Г|0 воздуха в

щтущер 6 диевАю.цилиндра 4. После .выхода системы на оптнмальную 1ве.Л1Ичи.ну рН подача (газО(Вой смеси и движение перфориро-ванHOiro резер/вуара 14 .црвк;ращаются.

Ko.HTipo.Tb содар.жания кислорода .с.суще1ствляет1ся датчи1ко,м 10 кислорода и IBTOрпчны.м .прИб 01ро:м. Регулирование процесса культи|зяро а;ния 1может также осуществляться .по содер.жанию :кислорода в .питательной среде ,в записиMOiCTH от сигнала с датчиком 10. В этом случае регулирование рН осуществляется за счет доба1вле.ния раствора КИС.ЛОТЫ или щелоЧ И.

После того, как клетки образуют монослой И выработают питательный субстрат (по на:копле.нию молочной кислоты, пиро|Вино.градной, уменьщение , сдвигу рН iB 1кисл.ую сторону за счет нелетучих продуктов), ростовая питательная среда сливается через латруб01К 20, и iB аппарат азо1ДЯТСЯ чдрез .патрубок 15 поддерживающая питательная среда и матрс вый 1з;;,с.

Режи.м 1культи13(ир0:вания виру..-а а::-1ал.э;гичен режшму .ивиразания клетох. но :; yseiOiM саобенностей усл.о;ний азрирсзания и лоддержащия рН.

Контролем окончания про-цесса ку.чьти1вп,розаиия iBiipyca я-вляется ио:я|Бле:т1ие ,з суспензии слущенных клеток, прекращение по-цребленпя 1глю.козы и сЛ( рН В П).ел;;ч, стсрОиу. Обьгчно этот срок отрабатывают .на дрхлих Системах и он .выражается в ч:а.сах.

Перед сливом вируса перфорирова)ный резервуар 14 поднимается п олускается ;з шнтательнлю рреду .на повышенной скорости за счет п.одапп в пнввмацили1НД|р 4 сжатого зоздуха под более BbianKHM, чгм рабодсо, давлением. При этом клетки, пораже.нные вцрусом, .интенсивно омываются и стряхи(заютол с поверхности a6capi6HpyioHiero материала 24. Слд-йвают snipyc через патрубок 20, при этом абсорбирующий материал 24 -остается в е.мжости / для дальнейшей .сте;ри;;иза1ции. перфорированный резерiir. rip 4 с абсорбирующим .материалом 24 с.н.Имается и отправляется на мойку. Емкость / промывается, на крыщке 27 закрепляется заранее под-готовлевный перфорированный резервуар с лро;мыты.М абсор.биpi юилн.м матвриало:м 24 и ци1кл повторяется.

-Выпол.нение аппарата длЯ культивирования (клеток и вирусов подобной ;конструкции .дит:

1) и-сп.ользо(вать промышленную а.ппаратуру для суапензиопного культи1В.ир01за:-1ня и для монослойного ку.льтивирозапия в твромышленных объемах как перевпваемых, та(К и .первичных клеток и .получения иа .них -вируса, что оущественно повысит производителиность труда то -сравнению с п.рИМеняемой технологией культивирования клеток в матрасах, роллерах и мпо-годисковых аппаратах;

2),дбК)а1НТ|И1ровать сывороточную иптательную среду, на которой культивируют клетки, без потерь клето;К, наблюдаемых при суопензиоганом культивиразании;

3)произ(водить шроцесс культивирования в стерллнных уславиях;

4)существенпю ушр.астить ко-нструкадпо по сранению с аналопичными аппаратами, так KiaiK перемешивающее устройство содержит только абсорбер в виде иерфорировално ло рвзервуа|ра И пнавмоцилиндр;

5)упростить 9епули1рова1ние |режимо;в переметив алия путем изменения давления и подачи сжатото воздуха в ппевмоцилиндр;

6)упростить ороцеос отделения абсорбирующего материала от вирусной суспензии для дальнейщей его качественной мойки для повторного использования;

7)уменьщить простои аппарата за счет использования заранее подготовленного комтейнера с абсор|бн рующим материалом.

Формула изобретения

Аппарат для культивирования клеток и BHpycoiB, содержащий емкость и -размещенный ,в ней абсорбер, укрепленный на валу привада с 1возможностью возвратно-поступательного перемещения ino 1вертикали, о тл и ч а ю щ и и iC я тем, что, С целью упрощения конструкции и обеспечения стерильности процесса культивирования, абсар;бер выполнен 1В виде нерфорированного резервуара, заполненного абсорби1рующи1М матер|ИалО|М и снабженного центрально установленной на его днище перфорированной Обечайкой и крыщкой в форме усеченного конуса, меньщее основание которого обращено вниз и имеет отверстие для прохода культуральной жидкости внутрь обечайки, при это;м .вал привода заключен в гильфон и

жестко связан с крыщкой резбр|вуара.

Источник информации, принятый во внимание лри экспертизе:

1. Авторское свидетельство СССР Ло 579302, :кл. С 12 В 1/10, 1975.

i

13