Способ моделирования энцефалопатии Советский патент 1980 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к экспериме тальной медицине. Известен спосо.б моделирования энц фалопатии путемвоздействия на орга низм животного патогенными веществами Ы . Однако известный способ не позвол ет приблизить модель к клиническому течению патологического процесса. Целью изобретения является прибли жение модели к клиническому течению патологического процесса за счет-пол чения эндогенного прогрессирования. Эта цель достигается тем, что животному однократно вводят внутривенно эндотоксин кишечной палочки штамм № 821 в разведении 1:10000 в дозе 8 10 мкг/кг веса тела, затем через 30 40 мин вводят в общую сонную артерию раствор адреналина в дозе 50 75 мкг/кг веса животного в течение 10-15 с. Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. Пример. Собак фикс ируют в станке. На шее выбривают шерсть. Под местным обезболиванием 0,25%-ным раствором новокаина на шее вырезают кожный лоскут. Общую сонную артерию, отпрепаровывают от блуждающего и зашивают в кожный лоскут. Операцион ную рану промывают 0,1%-ным раствором фурациллина и зашивают. Животных освобождают от станка. После заживления операционной раны снимают швы. Натощак в подкожную вену конечности .вводят эндотоксин кишечной палочки в разведении 1:10000 в,дозе. 10 мкг/кг веса животного. Через 30 мин в зашитую в кожный лоскут общую сонную артерию в течение 10 - 15 с вводят 0,1%-ный раствор адреналина в дозе 75 мкг/кг веса животного. Собак забивают через 30 мин, 1, 15, 30 и 60 суток после однократного введения эндотоксина и адреналина. Патогистологическому исследованию подвергают отделы новой коры: лобную,ripeкоронарную, посткоронарную,теменную I височную,лимбическую области;аммониев рог-подкорковые образования: хвоста тоеядро и зрительный бугор; мозжеч-ок с соответствующим стволовым отделомj продолговатый мозг. При изучении состояния клеточно-тканевых структур головного мозга используют основной комплекс нейрогистологических методик: Ниссля в модификации Снесарева на нервные клетки и ядра глии, Снесарев на фиброзные астроциты и феномен цен ральной тинкториальной ацидофилии, БильшовскогЬ на внутриклеточный нейр фибриллярный аппарат, Шпильмейера на миелиновую оболочку нервных валокон, Кахала на протоплазменные.и волокнис тые астроциты, Мийагава в модификаци Александровской на мезенхймную таию и олигодендроглию, Эросс-Нисс.ль-Боче рикова на мозговой кровоток. Результаты нейрогистологических исследований показывают, что через 30 мин после введения эндотоксина и адреналина морфологические сдвиги обнаруживаются преимущественно в эктодермальных элементах головного мозга. Острое набухание является основной формой патологии корковых нер ньк клеток. Указанный вид нервноклеточной патологии 4aiiie встречаетея во Л,. III и V слоях коры/ в меньшей степени распространен среди нервных клеток хвостатого ядра, зрительного бугра, клеток Пуркинье и стволовой части мозжечка. Нервные клетки череп но-мозговых нервовпродолговатого мозга, в основном, сохранны::. Лишь в некоторых из них отмечают начальные явления тигролиза. Явлениявакуолизации практически отсутствуют и выявляются чаще в не{)вных к летках, расположенных близ эпендимы. В ядрах набухших нервных клеток происходит активация хроматина, В отдельных мелких группах наоухших нервных клеток появляются признаки кариоцитолиза, что приводит к появлению клеток - теней и весьма мелких, диффузно рассеянных очагоЕ выпадения нервных клеток преимущественно в in слое коры. В этоМ: периоде течения патологического процесса .рбратимые структурно-функциональные изменения нервных клеток сопровождаются выраженной глиальной реак цией. Она представлена сателлитозом, как набухших, таки неизменных нервных клеток. В субэпендимных зонах подкорковых образований происходит пролиферация ядер глии, формируются симпласты ядер астроцитов и олигодёндроглии, а, также фигуры глиозного дерна . В миелиновых оболочках отдельных центральных миелиновых волокон появляются реактивные сдвиги в виде тинкториальной контрастности и некоторого набухания. Реакция со ст роны мезенхимных образований весьма умеренная и ограничивается набуханием и слущиванием эндотелия преимуществен но мелких артериальных сосудов. Через 1 сутки наряду с обратимыми структурно-функциональными сдвигами, являющимися ведущими патогистологичес кими признаками, характерными для предыдущего срока исследования, появ-ляются качественна Н&выё нёрвнок лёточ нйёйзмергейия. К последним относится нарастающая вакуолизация преимуществе но набухших нервных клеток. Встречаются клеточные формы, цитоплазма которых сплошь заполнена вакуолями, деформирующими ядро. В ядрах этих клеток обнаруживаются более крупные базофильные гранулы и разрыхленные ядрышки. Вакуоли встречаются также в нервных клетках с начальными явлениями базофйлии. Общими для них признаками являются активация ядерного хромати-. на, появление в части ядер более крупных базофильных гранул и начальные признаки разрыхления ядрыщек. Отдельные нервные клетки II, III и, особенно, у слоев проявляют тенденцию к базофилии. Встречаются базофильныё нервные клетки с остаточными явлениями набухания и прогрессивной реакцией апикальных отростков. Ядра базофильных нервных клеток также склонны к базофилии, в нихпоявляются более крупные базофильныё гранулы, ядрыики разрыхлены, иногда с кристаллоидом в центре. Явления базофилии в меньшей степени представлены в нервных клетках J oдкорковых образований и стволовой части, мозжечка; отсутствуют в нервных клетках черепно-мозговых нервов продолговатого мозга и нижних олив.Сателлитоз нервных клеток представлен менее отчетливо, чем в преды(Дущем сроке исследования. Наибольшая его активность наблюдается в субэпендимных зонах. Отмечается меньшая выраженность феномена центральной тинкториальной ацидофилии. Этот феномен, более отчетливо представлен в клетках П кинье. Определяется некоторое огрубение внутриклеточных нейрофибрилл. Выявляемые аксональные синаптические контакты гиперимпрегнироййны, в состоянии набухания. Изменения интракортикальных миелиновых волокон ограничиваются реактивными сдвигами, но они приобретают большую распространенность. Миелиновые волокна мозжечка и продолговатого мозга более сохранны. В фиброзных астроцитах обнаруживаемся некоторое набухание ядер, активация г ядерного хроматина, появление до ядрышкоподобных центров. Несколько,бог лее выражены реактивные сдвиги со стороны неподвижных элементов ,и эндотёлиальных клеток сосудов мелкого и среднего калибров, приводящие к сушению сосудистого просвета. Мягкая ,мозговая оболочка местами разволокнена отеком, в ней обнаруживаются начальные -явления застойного венозного полнокровия.. Через 15 суток патргистологические изменения в мозге эксЬериментальных животных не ограничиваются структурнофункциональными сдвигами. Бледные нервные клетки в своем большинстве вакуолизированы и, нередко, с остаточными признаками набухания тел. Они распространены преимуи1ествен но во, . 11 - с. 1М и меньше в V и vi слоях. ЯД1эа клеток набухшие и подчас деформируются в связи с прогрессирующей вакуолизацией. Ядрышки разрыхлены. Щ1толизу подвергаются чаще бледные и вакуолизигюванные нервные клетки. В результате, в корковых слоях их преимущественного расположения возникают более обширные, чем наблюдались ранее, очаги выпадения, намечаются нарушения цитоархитектоники. Лизируются также нервные клетки с явлениями базофилий. В базофильных и базофильных с переходом в гиперхромию нервных клетках, расположенных преимущественно во О г Ц а, б и слоях коры, ядра обнаруживают признаки нарастающего дистрофического процесса: склонность к базофилии, появление более крупных базофильных гранул, разрыхление ядрыш ка. Феномен центральной тинкториаль.ной ацидофилии более распространен и выявляется во многих нервных клетках коры, подкорковых образований, мозжечка и нижних олив. Реакция сателлитоза- менее выражена. Грубьлх нарушений внутриклеточного нейро ибриллярного аппарата не выявляется. Изменен ные нервные клеткирасполагаются преи мущественно в прекоронарной, посткоро нарной, височной областях коры и коре мозжечка. Нервные клетки лимбическ.ой коры, нижних олив, стволового отдела мозжечка и ядер черепно-мозговых нервов продолговатого мозга относительно сохранны. Наряду с набуханием миелиновой оболочки возникает ати пичное распределение миелина с появл нием веретенообразных вздутий. Появляются отдельные глыбки миелина за пределами волокна. Нарастающие измен ния в нервных клетках не находят отр жения в соответствующих глиальн з1х ре акциях. На фоне пролисЬеративной реакции фиброзных астроцитон появляются клетки с гибелью отростков. Через 30 суток базофилия и гипер,хроматоз становятся основными тинкто риальными свойствами нервных клеток корковых отделов. Исключение составляет лимбическая кора. Гиперхромные и Гиперхромные с переходом всморщив ние нервные клетки заполняют, тодчас все поле зрения. Сморщенные клетки в тягиваются по длиннику и, нередко, сохраняют прогрессивную реакцию апикальных отростков, которые в чаЬти клеток штопорообразно извиты. Такого рода изменения представляют единстве ную форму патологии нервных клеток f слоя коры. Явления гиперхроматоза распространяются на клетки Пуркинье, нервные клетки стволовой части мозжечка и ядер черепно-мозговых нервов продолговатого мозга. В базофильных нервных клетках обнаруживаются явления вакуолизации и набухания. Ядра их базофильны, с крупными базофильны ми гранулами, неровной поверхностью. уменьшены в размерах. Встречаются нервные клетки с начальными признаками тяжелого заболевания по Нисслю. Наблюдается прогрессирующая гибель нервных клеток с образованием во Г( -с, Ш , IV , у и У| слоях рассеянных более крупных очагов выпадения нервных клеток. Часть базофильных и гиперхромных нервных клеток сохраняет начальные признаки набухания. Встречаются отдельные сверхнабухшие формы. В части базофильных нервных клеток формируются начальные признаки тяжелого заболевания, проявляющиеся.в нарастании базофилии, прогрессирующем уменьшении размеров ядра, появлении в цй-топлазме и ядре укрупненных базофильных гранул, появлении щелей в цитоплазме. В лимбической коре (поясная извилина) базофильные и Гиперхромные нервные клетки располагаются преимущественно в наружных слоях и не явля ются доминирующими. В этом отделе наибольшее распространение получают бледные набухшие и вакуолизированные нервные клетки. Внутриклеточное нейрофибриллы в состоянии гиперимпрегнации и склеивания. Выявляемые отдельные аксональные: синаптические контакты в состоянии гиперимпрегнации и огрубения.. Морфологические изменения в системе интракортикальных миелиновых волокон указывают на нарастани-е в них дистрофических изменений, обнаруженных на более ранних этапах течения патологического процесса.. Явления сателлитоза приобретают более ограниченную и избирательную распространеЯ1 ость. Гиперхромные и базофильные с переходом в гиперхромию нервные клетки большей частью лишены сател:г1итов. Относительно сохранные и вакуолизированные, а также бледные набухшие формы привлекают к себе ядра олигодендроглии. Явления сателлитоза наиболее выражены в подкорковых образованиях и, особенно, в субэпендимных зонах.В исследо- ванных отделах сохраняются признаки пролиферативной реакции фиброзных астроцитов с набухшими телами и отростками. Пролиферативная- реакция глиозных элементов особенно выражена в субэпендимных зонах подкорковых отделов. В этих участках встречаются весьма крупные симпласты ядер олигодендроглии и астроцитов. Как и в пред.ылущие сроки исследования реакция мезенЬсимной глии .отсутствует,. Наблюдавшиеся ранее реактивные сдвиги в эндотелии мелких сосудов становится более выраженными.Указанная эндотелиальная реакция распространяется на более крупные артериальные сосуды, в стенках которых обнаруживается размножение неподвижных элементов. Отмечается более выраженное наруп ение гемодинамики.В мягкой мозговой оболочке преобладает застойное полнокровие вен.Кроренапблненные вены чаще встречаются в сером веществе мозга, а в венозных сосудах белого; з ещества мозжечка и Продолговатого мозга появляются признаки застоя. В веществе всех исследованных отделов мозга преобладает ишемический фон артериально-капиллярной сети. Лишь в отдельных/ местах сохраняются небольшие участки с активацией капиллярного кровотока. В просветах отдельных сосудов обнаруживается плазма крови, лишенная форменных элементов. Нарастает отечное разволокнение мягкой мозгово оболочки. Гранулы зеленого пигмента, лежащие свободно и связанные с клетоными элементами сосудистой стенки, встречаются чаще и связаны с сосудам не только малого, но и более крупног калибров.

Через 60 суток патологический процесс распространяется на все исследованные отделы и структурные элементы Головного мозга. Ведущей формой нервноклеточной патологии, особенно распространенной в лобной, прекоронарно и посткоронарной областях, является базофилия, гиперхромия с переходом в «сморщивание и сморщивание нервных клеток. Гибель нервных клеток приводит к образованию более обширных очагов выпадения и довбль }о грубому нарушению цитоархитектоники.Замет на прогрессирующая атрофия сморщен ых нервных клеток,, приводящая к их превращениюВ темные комочки , по Снесареву. Часть базофильных с переходом в гиперхромию нервных клеток сохраняет признаки набухания апикального отростка, В их цитоплазме в ядpax обнаруживаются признаки дистрофии, В наиболее сохранной до этого Срока течения патологического процесса ли мбической коре возникает полиморфизм тинкториальных свойств нервньзх клеток и появляются мелкие, диффузно рассеянные очаги их выпадения. БазофйЛькае нервные клетки иногда сохраняют признаки набухания. В их цитоплазме и ядрах появляютгсяболее; крупные базофильные гранулы. Базофилия и гиперхроматоз распространяются на нервные клетки подкорковых образований и ядер черепно-мозговых нервов продолговатого мозга. В указанных: отделах происходИт цитолиз нервных клеток и образ уютея очаги выпадения, Сателлитоз чрезвычайно бедек 3 корковых отделах, но достаточно представлен в подкорковых образованиях. Более тяжелые изменения обнаруживаются в клетках Пуркинье..В коре мозжечка видны обширные поля их выпадения, имеется сочетание бледных и базофильных форм, появляются признаки тяжелого заболевания. Бледные нераные клетки сохраняются преимущественно в затылочной и лимбической областях больших полушарий, Подкорновых отделах и ядрах черепно-мозповы нервов продолговатого мозга. Однако их патогистологическая характеристи- ка отличается от аналогичных форм, описанных ранее. В своем большинстве они лишены вакуолей. Часто их базофильные ядра окружены лишь -венчиком цитоплазмы. В темных уменьшенных ядрах происходит гранулирование белка проявляющееся в базофили-и. Указанная морфологическая характеристика позволяет рассматривать эту форму нервноклеточной патологии как затянувшуюся раннюю стадию т,яжелого заболевания по Шпильмейеру и Снесареву. Внутриклеточные нейрофибриллы склеиваются вплот ; до образования грубых темных тяжeй i которые продолжаются в апикальные отростки. В цитоплазме наблюдается их фрагментация. Изложенное приводит к наруше.ник нейрофибриллярной архитектоники. Явления центральной тинкториальной ацидофилии обнаруживаются только в, отдельных клетках Пуркинье, так как большинство из них подвергается более тяжелым изменениям. Описанной : выше пролиферативной реакции клеточных элементов эктодермальной глин не наблюдается. Уменьшается количество фиброзных астроцитов. Большинство из них с укороченными отростками, а не-, которые совершенно лишены последних. Пролиферативная реакция клеток эндотелия распространяется на сосуды среднего и крупного калибров.Более выраженные изменения обнаруживаются в средней оболочке сосудистой стенки.В Hqjft отчетливо выявляются размножение неподвижных элементов и явления отека Кроме того, регистрируется огрубение аргирофильного каркаса сосудов мелкого, среднего и крупного калибров. Состояние мозгового кровотока представлено застойным полнокровием преимущественно венозной сети мягкой мозговой оболочки. Полнокровные вены выявляются в веществе мозга. Во всех исследованных отделах мозга встречаются как малокровные участки, так и участки, с, более выраженным кровенаполнением капиллярной сети.Однако преобладает ишемический фон.

Таким образам,однократное последрвательное введение эндотоксина . кишечной палочки и адреналина предложенным нами способом вызывает диффузное невоспалительное заболевание головного мозга. Патологический процесс начинается как острая знцефалопатическая реакция. С течением времени, без добавочных воздействий извне, происходит утяжеление патоморфологических изменений, в клеточно-тканевых структурах головного мозга, что приводит к формированию энцефалопатии.

Использование предлагаемого способа получения экспериментальной модели энцефалопатии позволяет создать модель.прогрессирующего невоспалительного заболевания головного мозга, которая может явиться объектом для изучения роли условно патогенных микробов и адреналина в мозговой.патологии, изучения дистрофических процессов в головном мозге, которые начинаются как экзогенная, реакций и при,(бретают эндогенные/ черты, Полученная экспериментальная модель энцефалопатии по характеру и течению наиболее близка по сравнению с известными к эндогенным невоспалительным заболеваниям головного мозга человека.

Формула изобретения.

Способ моделирования энцефалопатии путем воздействия на органи.зм животного патогенными веществами.

767820

10

о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью приближения модели к клиническому течению патологического процесса; за счет получения эндогенного nporjpecсирования, животному однократно вводят внутривенно эндотоксйн кишечной палочки штамм № 821 в разведении 1:10000 в дозе 8-10 мкг/кг веса тела, затем через 30 - 40 мин вводят в общую сонную артерию раствор адреналина в дозе 50 - 75 мкг/кг вес животного в течение 10 - 15 с.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Матвеев В.Ф, Морфологические изменения в .головном мозге при экспёри5 ментальной лезергиновой интоксикации. М., Медицина, 1976, с. 56 (прототип) .