Питательная среда для выращивания энтомопатогенных бактерий Советский патент 1984 года по МПК C12N1/20 C12R1/07 

00

со 17 Изобретение относится к области микробиологической промышленности, в частности к производству микробио логических препаратов.,и может быть использовано при производстве энтобактерина. Известна питательная схема для промьшшенного культивирования бакте рий вида Вас. thuring, содержащая кормовые дрожжи, кукурузную муку, глюкозу, кукурузный экстракт гидролизат рыбокостной муки, зерновые от вары и экстракты Cl3. Эта среда позволяет выращивать энтопатогенные- бактерии в промышленных условиях, однако обладают низкой продуктивностью (концентрация бактериальньрс спор в культураль ной жидкости не превьшает 1-3/ хЮ спор/мл) . Известна также дрожжеполисахарид ная среда, содержащая кормовые дрож ,(3%) и кукурузную муку (1,5%). Эта питательная среда является в настоя щее время основной для промьшшенного получения как энтобактерина, так и других бактериальньпх средств защиты растений-дендробациллина и инсектина. Продуктивность среды невысока И составляет (3+0,5)-10 спор/м в условиях промьпЕленного производства 2 . Недостаток этих питательных сред состоит в том, что они не обеспечивают высокого выхода энтомопатогенных бактерий. . Цель изобретения состоит в увели чении выхода бактерий. Эту цель достигают тем, что питательная среда содержит следующие компоненты, вес.%: Дрожжи кормовые 3,0-4,5 Мука кукурузная 1,2-2,5 Гидрол 2,0-4,0 ГидрОЛИзат хлопкового шрота3,4-6,8 Вода Остальное Питательную среду готовят следую щим образом. Дрожжи и муку смещиваю с водопроводной водой, используют для приготовления суспензии, содерж щей 60% воды, необходимой для приго товления соответствующего количества среды. Суспензию пцательно перемешивают и. кипятят при помешивании в течение 3-5 мин, после чего охлаж дают до температуры 30-40°С.Готовят ферментативный гидролиаат шрота сле дующим образом. Одну часть шрота (по весу) смеш11вают с-.7 вес.ч. воды, смесь кипятят в течение 15 мин, охлаждают до 55 С, доводят рН до 8,0 20%-ным раствором NaOH и добавляют ферментный препарат протосубтилин в количестве 2,0% от веса взятого шрота. Смесь тщательно перемешивают. Процесс ферментолиза проводят при температуре 55°С, периодически через каждые 2 часа перемешивая сме,ь в течение 3-5 мин и поддерживая рН на уровне 8,0+0,05. Ферментолиз длится в течение 14-16 ч. На окончание процесса указывает накопление аминного азота в смеси до концентрации SOO-400 мг%. Полученную смесь фильтруют, окончательно определяют концентрацию аминного азота и используют для приготовления среды в концентрации 15-20 мг% по азоту. В питательную среду добавляют ферментолизат шрота. Далее готовят 20%-ный раствор NaCH и с его помощью доводят рН до 7,6-7,8. После чего замеряют объем среды и добавляют оставшуюся водудо заданного объема. Питательную среду подвергают термической стерилизации при температуре 130 С в течение 50 мин. Гидрол стерилизуют отдельно при температуре 118°С в течение 30 мин и добавляют стерильно в среду перед посевом культуры бактерий. Культуру энтомопатогенных бактерий выращивают на данной среде в течение 32 ч, затем определяют титр спор методом высева на питательный агар, для чего используют 10 разведение культуральной жидкости. Пример. Наилучшим составом питательной среды, при котором продуктивность превышает более чем в два раза продуктивность производственной дрожжеполисахаридной среды, является следующий, вес.%: Дрожжи кормовые 4,0 Мука кукурузная 2,0 Гидрол 3,0 Гидролизат хлопкового шрота5,0 ВодаОстальное Питательную среду .указанного состава готовят следующим образом. В зависимости от количестве получаемой среды рассчитывают необходимый весовой состав составляющ1-1х ее компонентов. Из всего количества дрожжей и муки готовят водную суспензию,

3770

используя для этой цепи 60% воды, необходимой для приготовления смеси. Суспензию перемешивают и кипятят в течение 3-5 мин, охлаждают до температуры 30-40 С и добавляют ферментолизат шрота. Затем доводят рН смеси до 7,6-7,8 с помощью 20%-ного раствора щелочи (NaOH) замеряют объем среды и добавляют остальную воду до заданного объема. Среду стерилизуют

при температуре в течение 50 мин. Приготовление основы питательной среды на этом заканчивается. Гидрол, простерилизованный при температуре 118°С в течение.30 мин, добавляют в среду непосредственно пере посевом культуры.

Приготовленная -таким образок питательная среда позволяет значительно повысить выход целевого продукта.

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ ЭНТОМОПАТОГЕННЫХ БАКТЕРИЙ, содержащая водную суспензию кормовых дрожжей и кукурузной муки, отличающаяся тем, что, с целью увеличения выхода бактерий, она содержит гидрол и ферментативный гидролизат хлопкового шрота при следующем соотношении компонентов, вес.%: Кормовые дрожжи 3,0-4,5 Кукурузная мука 1,2-2,5 Гидрол2,0-4,0 Гидролизат хлопкового шрота 3,4-6,8 ВодаОстальное (Л