Способ диагностики сальмонеллезной инфекции Советский патент 1980 года по МПК A61B10/00 

1

Изобретение относится к медицине, а именно клинической иммунологии.

Известен способ диагностики слль монеллезной инфекции путем определе- , ния наличия специфических антител в сыворотке крови 1. i

Однако этот способ недостаточно специфичен и не позволяет быстро диагностировать сальмонеллезную инфекцию, .Q так как длительность реакции 18 ч.

Цель изобретения - повышение специфичности и ускорение диагностики.

Цель достигается тем, что в сыво ротке крови определяют К-сальмонеллезные антитела добавлением К 0-штам-«5 ма 30 Salmonella typhimurivun и люминесцентной сыворотки против 1а человека и по интенсивности свечения клеток К о штамма № 30 диагносцируют сальмонеллез.

К О-штамм 30 Salmonella typhimurium получен из полноценной по антигенному составу К О-культуры S. typhimurium путем селекции под контролем просмотра популяции в косопадагощем пучке света с последующим изучением антигенной структуры. Штамм депонирован в коллекции ИЭМ.им. Н.Ф.Гамалеи AWH СССР. Это грамотрицательиая, неспоро |осная палочка, активно под- 30

вижная, не образует пигмента, аэроб, растет на обычных питательных средах. Оптимум роста 37®С. На мясопептонном бульоне образует равномерную муть, на мясопептониом агаре дает гладкие В-форми колонии нормальных размеров, на среде Плоскисюва растет в виде бесцветных прозрачных колоний.

Штамм ие разлагает лактозу,сахарозу, быстро ферментирует с образованием кислоты и газа глюкозу, мальтозу, рамнозу, сорбит, восстанавливает нитриты до нитратов, образует сероводород.

При просмотре популяции в косопадакяцем пучке света, в отличие от зеленых с коричневой исчерченностью колоний исходного К О-штамма К О-культура дает колонии красно-серого свечения. Штамм характеризуется наличием ярко выраженного поверхностного К антигена и нарушенным синтезом О антигена. Его агглютинабельность в отношении К антисыворотки составляет 1:640. С 2 антисывороткой он реагирует только до титров 1:20-1:40. В иммуноэлектрофорезе установлены перекрестные реакции к Ь-штамма № 30 с антисывороткги ш к сальмонеллам различных вариантов, имеющих К антиген. Пример. Больной М. находится в стационаре с диагнозом Пищевая токсикоинфекция. Реакцию проводят следу мцим рбраэо На предцлетное стекло наносят пасте ровской пипеткой по 5 капель суточной агаровой суспензии К о-шталта 30 в фосфатном буфере рН 7,2, содержавеЪ 2x10 клеток, из которых приготавлива ют 5 мазков. После подсушивания на воздухе при комнатной температуре маэ ки фиксируют в течение 5 мин. в ме тиловом спирте. Параллельно гот,оаят серийные двукратные разведения исгштуемой сыворотки, начиная с It2, На мазки наносят по 1-ой капле различных разведений сывсфотки и выдерживают при ксжнатной температуре 45 мин t Мазки отмывают трижды по 5 мин,фосфатным буфере и подсушивают на возду хе. На препараты наносят по 1-ой капл люмийесцирующей кроличьей сыворотки против глобулинов человека в рабочем разведении 1:8 и окрашивают при комнатной температуре в течении 30 мяч, После Т(ех сратного промывания по 5 мин, буферным pacTBcqx и высушивания на воздухе препараты заключают в буферный глицерин (1 ч. фосфатного бу фера рН 7,2+9 ч, глицерина) и исседу ют в люминесцентном микроскопе МЛ-25 при увеличении 7x90. Положительную реакцию оценнвэюФ по интенсивности свечения. За титр К антител принимают то максимальное разведение испытуемой сыворотки, при котором отмечается специфическое свечение клеток к о щтаглиа 30 на ++. Контролями в опытах служат: 1. Антиген 30) фосфатный буферч-люминесцирующая сыворотка. 2.Антиген )там4 № 30) /различные разведения нормальной сыворютки+люмннесцирукздая сыворотка. 3.Антиген бвтамм № 30)+люминесцируввтая сыворотка. 4.Антиген битамм S.glasgo - вариант S.typhimurium-HtcnHTyeMaH сыаоротка+люминесцирующая сыворотка. Испытание сыворотки больного М. с , токсикоинфекцией, вызванной S.virchovV при использовании К тест-штамиа S.typhirauriuqt в качестве антигена в непрямом катоде люминесценции позволяет в течение 3 ч. выявить антитела к поверхностному К антигену сальмонелл в высоких титрах - 1:128. Изучены сыворотки больных сальмонеллезньяхЕИ заболеваниями, обусловленными, другими серопарами сальмонелл, а также сыворотки дизентерийных больных и доноров. Результаты опытов по изучению сывороток сальмонеллезных больных представлены в таблице. Исследования показали высокую специфичность и чувствительность способа..

Отрицательная р Предлагаемый способ выявления ан Гител к поверхностному К антигену сгшьмонелл в сыворотках больных с помощью селекционированного К Отестштамма позволяет быстро в течение 34 идентифицировать сальмонеллезную инфекцию, атакже проводить дифференциия с неразведенной сывороткой альную серологическую диагностику сальмонеллезов от других острых кишечных заболеваний иной этиологии, сходных по клинической картине. Формула изобретения Способ диагностики сальмонеллез-. ной инфекции путем определения нали57869946

чия специфических антител в сыворот-по интенсивности свечения клеток

ке крови, отличающийся тем,штамма 30 диагиосцкруют сальномечто, с целью повьаиения специфичностинеллеэ.

я ускорения диагностики, в сывороткеИсточники иифс мации,

крови определяют К-сальмонеллеэ1шеприиятые во внимание при экспертизе антитела добавлением К №30 . 1. Руководство по иммунологии.

Salmonella typhimurlum и люмииесцеит-Под ред. О.В.Вязова.Ш.Х.Ходжаева.

ной сыворотки против 1 человека цМ., 1973, с.221-227.