Способ получения дипептидныхэфиРОВ Советский патент 1981 года по МПК C07K5/75 

Изобретение относится к способу получения новых производных дипептид ных эфиров - биологически активных соединений, которые могут найти применение в качестве Промежуточных продуктов при получении сахаристых веществ. Известен способ получения N-защищенных или незащищенных дипептидных эфиров путем взаимодействия ангидрида аминокислоты, имеющего защищён ную или незащищенную аминогруппу, с алкильным сложным эфиром аминокислоты l . Недостаток этого способа состоит в том, что наряду с целевыми дипептидными эфирами образуются дипептид ные эфиры, имекнцие пептидные связи по карбоксильной группе боковой цепи аминокислоты. Цель изобретения - создание спос ба получения новых производных дипе тидных эфиров, позволяющего получит дипептидный эфир со свободной в бок вой цепи карбоксильной группой без образования побочных продуктов. Поставленная цель достигается способом получения дипептидных эфиров общей формулы Q . NHR, (сн)-6н-с-йн-сн-с-к I )t-.( где R -бензилоксикарбонил или п-метоксибензилоксикарбонил;. R -бензил; R,-низший алкоксил; п -1 или 2, заключающийся в том, что соединения формулы .0 о NHR.O О (fH-NH НОС-(СН,), -CH-C-NH-CH-C-Rg R где R, Rj, R,n имеют указанные значения, обрабатывают водным раствором кислоты и отделяют полученный целевого дипептидный эфир в виде твердого продукта . Способ состоит в разложении продукта присоединения дипептиднох-о сло« ного эфира и соли сложного эфира аминокислоты под действием водного раствора кислоты. Существенная часть Дипептидного сложного эфира находится в твердом состоянии после окончания реакции, поскольку он обладает низкой растворимостью в кислом водно раствор.е. в силу того, что соль хорошо растворима в растворе, реакцион ная система становится ,смесью твердо го дипептидного сложного эфира и раствора соли, который может содержать избыток кислотного компонента. Полученный твердый дипептидный слож ный эфир отделяют обычным способом, например фильтрованием или центрифу гированием.. Для выделения из отделенного солевого раствора сложного эфира аминокислоты используют кристаллизацию или экстракцию, после ос вобождения сложного эфира аминокислоты . Согласно предлагаемому способу дипептидный сложный эфир может быть легко получен и вьщелен путем разло жения продукта присоединения без ус ложненной стадии экстракции и обработки ионообменной смолой. Выход и чистота дипептидного сложного эфира высокие. Пример 1. К раствору 1335 Ml (5 ммоль) N-бензилоксикарбо нил-1 аспарагиновой кисшоты и 1078 мг (5 /lмoль) хлоргидрата меТилового эфира L-фенилаланина в 20 мл воды с рН б (доводят с помощью 7%ой аммиачной воды) прибавляют 50 мг термолизина и смесь встряхивают при температуре 38 - 40°С в течение ночи , Выпавший в осадок продукт отделяют, промывают 40 мл воды, сушат, получают1145 мг тонких игольчатых кристаллов, имеющих точку плавления 117 - 120°С (продукт присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонйл- 1-аспартил-1-фенилаланина и ме тилового эфира L-фенилаланина (1:1) ВЫХОД: 75,5% в расчете на хлоргидрит метиловго эфира L-фенилаланина) Продукт перекристаллизовывают из смеси, этилацетата и п-гексана. Точка плавления .120 - 124°С. 7,1 (С 1, метанол). Элементный анализ. Найдено., %: С 63,15; Н 6,15; N 7,00. Si Вычислено, %: С 63,24; Н 6,13; N 6,97. 1145 мг полученного продукта рас творяют в40мл1нНС1 и трижды экстрагируют 30 мл этилацетата. Экс траты смешивают и промывают порциями по 20 мл воды (3 раза) и сушат над безродным сульфатом магния. Раствор концентрируют в вакууме, ос таток кристаллизуют при добавлении п-гексана, получают 640 мг кристаллического продукта. Точка плавления 115 - 125 С. 15,3 (, метанол). Элементныйанализ. Найдено, %: С 61,52; Н 5,65; N С2.2Н24«207- .. Вычислено, %: С 61,67; Н 5,65;N 6,54. Метиловый эфир L-фенилаланина выделяют из смеси солянокислой фазы и фракции промывочной воды, отделенной при экстракции из этилацетатной фазы. Соединение, полученное посредством первой реакции, является продуктом присоединения метилового эфира N-бeнзилoкcикapбoнил-L-acпapтил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина. Из спектра ЯМР подтверждено, что их молярное отношение составляет 1:1. П р и м е р 2. к раствору 267,2 мг (1 ммоль) N-бензилоксикарбонил-1-аспарагиновой кислоты и 537,6 мг (3 ммоль) метиловго эфира L-фенилаланина в 5 мл буферного раствора Мак-Илвайна (рН 7,0) добавляют 100 мг термоазы и 100 мг картофельного ингибитора и смесь встряхивают в течение 20 ч при 38°С. Осадок собирают, промывают водой, сушат, получают 580 мг неочищенного кристаллического продукта присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-acпapтил-L-фeнилcLлaнинa и метилового эфира L-фенилаланина (1:1) (точка плавления 123 - 125°С, выход 35,5% в расчете на N-бензилоксикарбoнил-L-acпapaгинoвyю кислоту). Продукт растворяют в 40 мл смеси из диметилформамида и воды (1:1) и к раствору добавляют при перемешивании Н-форму сильнокислотной катионообменной смолы, смолу отделяют, фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Остаток растворяют в диметилформамиде и к раствору добавляют воду. Выпавший, осадок собиреиот, получают 330 мг метилового эфира N-бeнзилoкcикapбoнил-L-acпapтил-L-фенилаланина (выход 77,0% в расчете на N-бeнзилoкcикapбoнил-L-acпapaгиновую кислоту, точка плавления 123 - 125С) . Пример 3. К раствору 267,2 мг (1 ммоль) N-бензилоксикарбонил-1.-аспарагиновой кислоты и 359,4 мг {2 ммоль) метилового эфира L-фёнилаланина в 5 мл буферного раствора Мак-Илвайна (рН 7,0) добавляют 100 мг тациназы-N и 100 мг картофельного ингибитора и смесь встряхивают в течение 6 ч при . Выпавший в осадок продукт отделяют, про№ вают водой, получают 120 мг неочищенного кристаллического продукта присоединения метилового эфира Nбeнзилoкcикapбoнил-L-acпapтил-L-фeнилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1) (точка плавления 119 - выход 19,7%). Продукт обрабатывают по примеру 2 Н-формой сильнокислотной катионообменной смолой, в Н-форме получают 50 мг метилового эфира М-бензилоксиг|

карбонил-1-аспартил-1-фенилаланнна (точка плавления 95 - 105С, выход 11,7%).

Пример 4. К раствору 133,6 мг (0,5 ммоль) N-бензилоксикарбонил-1-аспарагиновой кислоты и 89,6 мг 0,5 ммоль) метилового эфира L-фенилаланина в 2,5 мл буферного раствора Мак-Илвайна (рН 7,0) с 0,07 мл триэтиламина при рН 6,7 добавляют 50 мг термоаэы и 50 мг картофельного ингибитора, смесь перемешивают путем встряхивания при в течение 20 ч. Осадок отфильтровывают, промывают водой, получают 130 мг неочищенного продукта присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1) (точка плавления 115 - , выход 85,5.% в расчете на метиловый эфир L-фенилаланина) .

Полученный продукт растворяют в 20 мл диметилформамида и воды (1:1) и обрабатывают сильнокислотной катионообменной смолой в Н-форме (по примеру 5), получают 75 мг метилового эфира N-бeнзилoкcикapбoнил-L-фeнилаланина (полный выход 70% в расчете на исходный метиловый эфир L-фенилаланина) .

Пример 5. Процесс проводят по примеру 4, за тем исключением, что используют 0,05 мл N-метилморфолина вместо 0,07 мл-триэтиламина, при начальном рН 6,4.Получают 120 мг неочищенного кристаллического продукта присоединения метилового эфира N-бeнзилoкcикapбoнил-L-acпapтил-L-фенилаланина и метилового эфира Lфенилаланина (1:1) (точка плавления 118 - 124°С, выход 78,9% в расчете на метиловый эфир L-фенилаланина).

Продукт -обрабатывают сильнокислотной катионообменной смолой в Нформе. Получают 70 мг кристаллического метилового эфира N-бензилоксикapбoнил-L-фeнилaнинa(полный выход 66% в расчете на исходный метиловый эфир L-фенилаланина с учетом его . 50%-го использования).

Пример 6. 534 мг (2 ммоль) N-бeнзилoкcйкapбoнил-L-acпapaгинoвoй кислоты и 863 мг (4 ммоль) хлоргидрата метилового эфира DL-фенилаланина помещают в колбу емкостью 30 мл и растворяют в 7 млводы, значение рН доводят до 6,2 с помощью 7%-ой аммиачной воды.

Полученный раствор смешивают с 50 мг термолизина и .встряхивают при температуре 38 - 40°С в течение ночи. Осадок отфильтровывают, сушат, получают 1045 мг кристаллов продук,та присоединения метилового N- бeнзилoкcикapбoнил-L-acпapтил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1) (точка Ш1авлё11ия 104 - , выход 86,1% в расчете

на N-бeнзилкapбoнил-L-acпapaгинoвyю кислоту).

После перекристаллизации из смеси этилацетата и п-гексана получают продукт, имеющий следующие физические свойства и результаты элементного анашиза. Точка плавления 127 - 135°С. Соб1 6,4 (, метанол).

Элементный анализ.

Найдено, %: с 63,52; Н 6,19; N 6,92.

SiS7S°

Шлчислено, %: С 63,24; Н 6,13; N 6,97.

Продукт тождественен с продуктом присоединения метилового эфира N-бензилoкcикapбoнил-L-acпapтил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1), поскольку инфракрасный спектр и спектр ЯМР продукта идентичны со спектрами соединения, Полученного по примеру 1.

800 мг продукта растворяют в 40 м. 1н. НС1 и раствор экстрагируют хлорис тым метиленом (ЗхЗО мл), органическую фазу отделяют, промывают водой,

сушат над фильтратом магния, хлористый метилен отгоняют, твердый остаток перекристаллизовывают из смеси этилацетета и п-гексана, получают 450 мг кристаллического продукта. .Точка плавления 124 - 132°С.

(, метанол). Элементный анализ. Найдено, %: С 61,38; Н 5,58; N6,29. f и и п

.

Вычислено, %: С 61,67; Н 5,65; N 6,54.

Продукт представляет собой ме.тиловый эфир М-бензилоксикарбонил-L-аспартил-L-фенилаланина.

Водный слой, оставшийся после экстракции хлористым метиленом, обрабатывают бикарбонатом натрия, рН доводят до 8,7 и продукт трижды экстрагируют хлористым метиленом смешивают с бикарбонатом натрия, величину рН доводят до 8,7 и продук.т трижды экстрагируют хлористым метиленом, беря порции по 50 мл. Экстракты сушат

над сульфатом магния, пропускают через раствор газообразный хлористый водород в течение 10 мин, раствор концентрируют, к остатку добавляют этиловый эфир, выпавший осадок отфйльтровывают, получают 29,0 мг метилового эфира D-фенилаланина.Точка плавления 149 - 151 С.

15,1 (, метанол). Инфракрасный спектр и спектр ЯМР ее падает со спектрами Ь-формы.

Проведенный анализ показывает,

что полученный продукт --продукт при;соединёния метилового эфира N-бензилоксикарбонил-Ь-аспартил-Ь-фенилапанина и метилового эфира фенилаланина

(l:lK Пример 7. В колбе емкостью 100 мл в 70. мл воды растворяют 5,34 г (20 ммоль) N-бензилоксикарбонил-1-аспарагиновой кислоты и 7,32 г (42 ммоль) метилового эфира L-фенила ланина. К полученному раствору с рН 6,2 - 6,3 добавляют 200 мг термолизина и смесь встряхивают при температуре 38 - в течение 4 ч. Осадок отфильтровывают, промывают в 70 мл водыгсушат, получают 10,11 г кристаллов (точка плавления 117 ). Проведенный анализ показывает , что продукт есть продукт присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-1-аспартил-1-фвнилаланинаи метилового эфира L-фенилаланина (1:1). После перекристаллизации, продукта из смеси этилацетата и п-, гексана получают следующие значения Точка плавления 120 - 124С. Со(|,+ 7,2 (С 1, метанол). Элементный анализ. Найдено, %: С«.63,16; Н 6,14;. 6,99, С 63, 24; Н 6,13; BычиcJleнo, N 6,97.. , . Инфракрасный спектр и спектр ЯМР проявляют те же характеристики, кото рые указаны для продукта присоединения (1:1) метилового эфира N-бензил оксикарбонил-1-аспартил-L-фенилалани на и метилового эфира L-фенилаланина После обработки сильной кислотой про дукт экстрагируют этилацетатом, после отгонки которого получают в оста ке метиловый эфир N-бензилоксикарбо нил-L-acпapтил-L-фeнилaлaнинa. К 1,00 г (1,65 ммоль) получен-ного продукта.присоединения метилового эфира N-бeнзилoкcикapбoнил-L-acпapтил-L-фeнилaлaнинa и сложного эфира L-фенилаланина добавляют 2 мл и 2,0мл 1 Н НС1 , смесь перемешивают при. комнатной температуре в течение 10 мин. Полученную суспензию фильтруют и осадок промывают 4. мл .воды, получают 0,72 г кристаллического ме лового эфира N-бензилоксикарбонила:-L-аспартил-L-фенилаланина (выход . 98,8%). Полученные кристаллы перекристал лизовывают из смеси этилацетата и п-гексана. Точка плавления 121 - 124 С. CC( 15,4 (, метанол). . Элементный анализ. Найдено, %: С 61,58; Н 5,64; N6,56. имп - С2дН24. Вычислено, %: С 61,67; Н 5,65;, N 6,54. Инфракрасный спектр продукта сов падает соспектром стандартного про дукта. Идентичность продукта го стандар ным подтверждена посредством сравне ния водного раствора продукта с вод ным раствором стандартного соединения в высокоскоростной жидкостной хроматографии. Чистота,, измеренная этим способом, составляет 100%. Этот способ использован также .для оценки чистоты продуктов разложения присоединения в следующих примерах . (если это не оговорено иначе) . Устройство для высокоскоростной жидкостной хроматографии (TSK - HLC 801, поставляемой Тоуо Soda К.К.) включает колонку, внутренний диаметр которой 7,5 ммк, длина 30 см, детектор (дифференциальный рефрактометр). В качестве наполнителя используют крахмальный геЛь с размером частиц 5 мк (TSK - CELLS 170, поставляемый Тоуо Soda К.К.). Элюентом служит 0,5%ный водный раствор ацетата натрия. Измерения проводят при комнатной температуре,скорости потока 0,8 мп/мин, перепаде давления 20 кг/смI Пример8. К1,00г (1,65 IMoль) продуктов присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил- L-acпapтил-L-.фeнилaлaнинa и метилового эфира L -фенилаланинадобавляют 2 мл воды и 1,32 мл 1н НС Г и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин. Реакционную массу обрабатывают по примеру 7. Получают 0,70 г тонких призматических кристаллов, имеющих точку плавления 100 - 126С (содержание метилового эфира N-бeнзилoкcикapбoнил-L-acпapтил-L-фенилаланина 96,8%). Пример 9. О,534 г (2 ммоль) N-бензилoкcикapбoнил-L-acпapaгиновой кислоты и 0,863 г (4 ммоль) хлоргидрата метилового эфира DL-фенилаланина растворяют в 10 мл воды, значение рН доводят до 6,0 с помощью 7%-ой аммиачной воды.. . Полученный раствор смешивают с 50 мг термолизина, смесь встряхивают. в течение ночи при температуре 38 . осадок отфильтровывают, промывают 10 мл воды, сушат, получают 0,90 г кристаллов, имеющих точку плавления 120 - 126С. Часть Кристаллов перекристаллиэовывают из смеси этилацетата и п-гексана, получают продукт с точкой плавления 128 - 134°С иПо равный -6,3 (, метанол). .Этот продукт имеет инфракрасный спектр и спектр ЯМР, которые, идентичны этим же спектрам продукта присоединения метилового эфира N-бeнзилoкcикapбoнил-L-acпapтил-L-фeнилаланила и метилового эфира L-фенилаланина (1:1). Элементный анализ. Найдено, %:С63,42;Н6,17; С Н N О Вычислено, %: С 63,24; Н 6,13; N 6,97. Затем продуктОбрабатывают кислотой, получают метиловый эфир N-бензилоксикарбонил-1-аспартил-1-фенилаланина и метиловый эфир О-фенилаланинагг. в мольном отношении 1:1. Эти результа ты позволяют сделать вывод, что полученные кристаллы есть продукты присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонила-1-аспартил-1-фенилаланина и метилового эфира D-фенилаланина (1:1). . 0,50 г (0,82 ммоль) продукта присоединения смешивают с 4 мл воды и 0,26 г лимонной кислоты, смеси перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин и обрабатывают по примеру 7, псэлучают 0,35 г кристаллов метилового эфира N-бензилоксикарбонил -Ь-аспартил-Ь-фенилаланина (чистота 100%, выход 99,3%). , Пример 10. К 0,50 г (0,82 ммоль).продукта присоединения метилового, эфира N-бензилоксикарбонил-1-аспартил-1-фенилаланина и метилового эфира 1,-фенилаланина, получен ного по примеру 7, добавляют 4 мл во ды и 0,24 г (1,2 ммоль) р-толуолсуль фокислоты моногидрата. Смесь обрабатывают в условиях примера 7. ПолучаютО,33 г кристаллов метилового эфира М-бензилоксикарбонила-1-аспартил-L-фенилаланина (чистота 100%, выход 93,6%). Пример 11. В колбу емкостью 30 мл помещают 0,45 г -(3,2 ммоль) 85% муравьиной кислоты и 8 мл воды и к смеси добавляют 0,50 г (О-,82 ммоль продукта присоединения метилового эф ра М-бензилоксикарбонил-1-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина, полученного в примере 7. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 мин, продукт отфильтровывают, промывают 10 мл воды, сушат, получают 0,312 г белых кристаллов метилового эфира М-бензилоксикарбонил-1-аспартил-1-фенилаланина (чистота 100%, выход 88,6%). Пример 12. К 0,47 г (8,2 ммоль) ледяной уксусной кислоты к 8 -МП воды добавляют 0,50 г (0,82 ммоль) продукта присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-1-аспартил-1-фенилаланина и мети лового эфира L-фенилаланина, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин, продукт отфильтровывают. Промывают 10 мл воды, сушат. Получают 0,308 г белых кристаллов метилового эфира N-бензилокси карбонила-1-аспартил-L-фенилаланина (чистота 100%, выход 87,2%). П р и, м е р 13. 1,00 г (1,65ммол продукта присоединения метилового эфира N-бeнэилoкcикapбoнил-L-acпapтил-L-фенилаланина и метилово-о эфира L-фенилаланина, полученного в при мере 7, загружают в колбу емкостью 30 мл и добавляют 2 мл воды и 0,2 мл 1 н НС1 . Смесь перемешивают при в течение 3 мин, а затем обрабатывают по примеру 7. Получают 0,35 г кристаллов метилового эфира N-бензилoкcикapбoнил-L-acпapтил-L-фeнилaлaнина (чистота 100%, выход 100%). Пример.14. ,В колбу емкостью 30 мл помещают 0,594 г (2 ммоль) N-p-мeтoкcибeнзилoкcикapбoнил-L-acпaрагиновой кислоты и 0,860 г-(4 ммоль) хлоргидрата метилового эфира L-фенилаланина и растворяют в небольшом количестве 1н NaOH, величину рН доводят до 6,0. Полученный раствор смешивают с 50 мг термолизина и встряхивают при температуре ot 38 до в течение ночи. Осадок отфильтровывают, npoi«Mвают 10 мл воды и сушат. Получают 0,928 г кристаллов, имеющих точку плавления 68 - . Полученный продукт представляет собой присоединение метилового эфира N-p-мeтoкcибeнзилoкcикapбoнил-L-аспартил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1). Продукт перекристаллизовывают из смеси этилацетата и п-гексана. Точка плавления 72 - 76°С. 6,5 (, метанол). Элементный анализ. Найдено, %: С 61,85; Н 6,04; N 6/46. с н N О Вычислено, %: С 62,15; Н 6,16; N 6,59. Инфракрасный спектр: 3280 (колебания растяжения связи N-H } 3020 и 2930 см-- (колебания растяжения С-Н) ; 1735 см(сложный эфир ); 1700 ( уретан) ; 1640 (1-ое амидное поглощение); 1500 до 1540 см- (2-е амидное поглощение); 1435 см- (С-Н деформационное колебание) ; 1380 (карбоксилат); 1210 до 1240 см- (колебание растяжения связи С-О-С и 3-е амидное. поглощение) ; 1030 см- (колебание фенила в плоскости) и 690, 740 и 810 см- (колебание фенила вне плоскости).. Спектр ЯМР: () 2,7 частей на миллион (2Н) } ; (2) 3,1 частей на миллион (4Н); (3 )3,6 частей на миллион (ЗН)и 3,7 частей на миллион (ЗН); (4)3,8 частей на миллион (ЗН); (5)4,0 частей на миллион -(IH) ; (6)4,5 частей на миллион (IH); (7)4,8, частей на миллион (IH); (-8) 5,0. частей на миллион (2Н) } (9)5,65 частей на миллион (ЗН); (10)5,65 частей на миллион (1Н) (11)6,2 частей на миллион (1Н); (12)6,8 до 7,3 частей на миллиоь (14Н). Эти результаты показывают, что продукт является продуктом присоединения-формулы (1), где R, Rj/ п означает р-метоксибензилоксикарбоНИЛ, бензил, метокси и 1; соответственно. 0,500 г (0,78 ммоль) продукта при соединения метилового эфира N-p-Мето си6ензилоксикарбонил-1-аспартил-1-фе нилаланина и метилового эфира и-фени аланина, полученного образом, помещают в колбу емкостью 30 мл,доба ляют 2 мл воды иО,94 мл (0,94 ммоль 1 н НС1, смесь перемешивают при в течение 3 мин, фильтруют, осадок промывают б мл воды и сушат, получают 0,32 г кристаллов.Следующие результаты подтверждают что продукт является сложным эфиром М-р-метоксибензилоксикарбонил-1-аспа тил-1-фенилаланина (чистота 100%, вы ход 89,1%).. Кристаллы растворяют в этилацетате и высаживают при добавлении п-ге сана. Точка плавления 128 - 130с. 15,1 (, метанол). Элементный анализ. Найдено, %: С 60,30; Н 5,74; N5,99., г н N п . Вычислено, %: С 60,25 Н 5,72; N 6,11. Инфракрасный спектр: 3280 см--, (раСтяжение N-H),; 2930 и 3020 см- (колебание растяжения С-Н) ; 1735 CM- (с 0 сложный эфир) ; 1700 см- ( уретан) ; 1650 см-- (1-ое амидное поглощение)} 1510 1540 см .(2-е амидное поглощение); 1440 смг. деформация С-Н) : 1220 1270 см-ч колебание растяжения С-О-С 3-е амидное поглощение); 1030 и 1050 см- (колебание фенила в плоско ти ) f 690 и 810 (колебание фени ла вне плоскости). ЯМР спектр: . (1)2,8 частей на миллион (2Н); (2)3,0 частей на миллион (2Н); 3,6 частей на миллион (ЗН); 3,8 частей на миллион (ЗН); 4,5 частей на миллион (1Н); 4,8 частей на миллион (1Н); 5,0 частей на миллион (2Н); 6,0 частей йа миллион (1Н); (9)6,6 частей на миллион (1Н); (10)6,6 частей на миллион (1Н); (11)6,8 частей на миллион до 7, частей на миллион (9Н); Эти результаты показывают, что конеч 1ым продуктом является соедине ние формулы ( ), в котором R, Rg, R и n означают р-метоксибензилоксикарбонил, бензил,метокси и 1, соответственно. 0,2 вес.ч. полученного метилового эфира N-p-метоксйбензилоксикарбонил-1-аспартил-1-фенилаланина растворяют в 2 вес.ч. ацетона и к полученному раствору добавляют 1 вес.ч. 4н НС 1. Смесь нагревают на водяной бане со слабым противотоком в течение 1,5 ч до полного разложения и получё ния раствора, содержащего .в качестве основных компонентов метиловый сложный эфир 1-аспартил-1-фенилаланина, метиловый эфир L-фенилаланина и анисовый спирт. Из указанного раствора получают метиловый эфир L-аспартил-L-фенилаланина. Пример 15. 0,562 г(2 ммоль) М-бензилоксикарбонил-1-глутаминоврй кислоты и 0,862 г (4 ммоль) хлоргидрата метилового эфира L-фенилаланина помещают в колбу емкостью 30 мл и добавляют 1 н NaOH до их полного растворения, рН доводят до 6,0. Полученный раствор смешивают с 50 мг термолизина, встряхивают при температуре 38 - 40°С в течение ночи. Осадок отфильтровывают, промывают 10 мл воды, сушат. Получают 0,510 г кристаллов, имеющих точку плавления 80 - 85°С. Следующие результаты подтверждают, что вещество представляет собой продукт присоединения метилового эфира N-бeнзилoкcикapбoнил-L-глy тамил-L-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина (1:1). Продукт перекристаллизовывают из смеси атилацетата и п-гексана. Точка плавления 92 - 97с. WJff- 0,1 (, метанол). Элементный анализ. Найдено, %: С 63,61; Н 6,31; N6,65. г U м р. Вычислено/ %: С 63,75; Н 6,32; N 6,76. Инфракрасный спектр: 3340 см (колебание растяжения связи N-H) ; 2950 и 3030 CM-t (колеба- ние растяжения связи С-н); 1730 и . 1745 см- ( сложный эфир) ; 1690см ( уретан); 1660 (1-ое амидное поглощение) ; 1620 см (карбокси- . лат) (2-ое амидное поглощение) ;1440cAi. (С-Ндеформационное колебание)1405см (карбрксилат) ,1240 до 1310 см С-О-С колебание растяжения и 3-е амидное ; поглощение); 1440 см (С-Н деформационное .колебание) ; 1405 см (карбоксилат), 1240 до 1310 см (С-О-С колебание растяжения и 3-е амидное поглощение); 1050 см (колебание фенила в плоскости); 700 и 750 см, (колебание фенила вне плоскости). Спектр ЯМР: (1)2,0 частей на миллион (2)2,3 частей на миллион (3)3,0 частей на миллион 3,6 частей на миллион частей на миллион (5) 3,8 частей на миллион (6) 4,3 частей на миллион (7) 4,8 частей на миллион (8) 5,0 частей на миллион (9) частей на миллион (10)5,8 частей на миллион (11)7,2 частей на миллион (12)7,2 частей на миллион (ЮН); (13)7,3 частей на миллион (5Н) . Эти результаты показывают, что продукт является продуктом присоединения формулы;(I),где R, Rg, Rg и n означают бензилоксикарбонил, бензил, метокси и 2, соответственно. 0,001 г продукта присоединения метилового эфира N-бензилоксикарбонил-1-глутамил-1-фенилаланина и мети лового эфира L-феннлаланина добавляют к 2 , 3 мл (0,32 ммоль) 0,14 н НС1 при перемешивании в пробирке емкость 15 мл. Смесь перемешивают при комнат ной температуре в течение 15 мин. Полученный белый осадок отфильтро вывают, промывают 3 мл воды, сушат, получают 0,683 г кристаллов. Следующие результаты подтверждают что продукт представляет собой этило вый эфир М-бензилоксикарбонил-1-глутамин-1-фенилаланина (чистота 100%, выход 95,8%) . Кристаллы растворяют-в этилацетате и переосаждают при добавлении пгексана. Точка плавления 97 - 99°С, 11,0 (, метанол). Элементный анализ. Найдено, %: С 62,63} Н 5,94; N 6,24. р и U n Вычислено, %: С 62,43; Н 5,92; N 6,33. Инфракрасный спектр: 3300 см- (колебание растяжения N-H) ; 2930 и 3030 см- (колебание растяжения С-н) ; 1735 см ( слож ный эфир) ; 1690 см - ( уретан) ; 1650 см- (1-ое амидное поглощение) 1530 см- (2-ое амидное поглощение) 1440 (колебание деформации С-Н от 1220 до 1280 см- (колебание рас тяжения С-О-С и 3-е амидное поглоще ние) ; 1050 см- (колебание фенила в плоскости) и 695 и 735 см- (колеба ние фенила вне плоскости). Спектр ЯМР: (1)2,0 части на миллион (2Н); (2)2,4/части на миллион (2Н); (3)3,1 части на миллион (2Н); (4)3,7 части на миллион (ЗН); (5)4,3 части на миллион (1Н); (6)4,8 части на миллион (1Н); (7)5,1 части на миллион (2Н); (8)5,9 части на миллион (1Н); . (9). 7,2 части на миллион (1Н); (10)7,2 части на миллион (5Н); (11)7,3 части на миллион (5Н)} (12)8,1 части на миллион (1Н). Эти результаты показывают, что конечный продукт представляет собой соединение формулы ( II ), где R , R R и n означают бензилоксикарбонил, бензил,- метокси и 2, соответсгвенно Полученный метиловый эфир N-бенз локсикарбонил-1-глутамил-1-фенилала нина можно превратить посредством восстановления водородом в метиловы эфир 1-глутамил-1-фенилаланина, и его также можно превратить гидролизом в Н-бенэилоксикарбонил-1-глутамил-1-фенИлаланин. Пример 16. В колбу емкостью 100 мл помещают. 0,686 г (3,12 ммоль) хлоргидрата метилового эфира L-фенилсьпанина, 25 мл воды, к полученному раствору добавляют водный 2н NaOH при охлаждении льдом и при перемешива 1ии рН доводят до .7,5. Продолжая перемешивания к раствору постепенно добавляют 0,360 г (1,44 ммоль) ангидрида Ы-бензилоксикарбонил-1-аспарагиновой кислоты и поддерживают рН от 7,0 до 7,5 с помощью -2н водного раствора NaOH. Продолжают перемешивание в течение 2 ч и к .реакционной смеси добавляют водную 1н НС1 и доводят рН до 6. Выпавший в осадок продукт отфильтровывают, про1«ывают 50 мл воды, сушат, получают 0,416 г продукта присоединения, метилового эфира М-,бензилоксикарбонил-1-аспартил-1-фенилаланина (смесь 86% метилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-acnapтил- (С)-1-фенилаланина и 14% метилового эфира N-бензилаксикарбонил-L-аспартил- (Сп)-1-фенилаланина) и метилового эфира L-фёнилаланина (1:1)(точка плавления от 108 до 115°С). В процессе реакции образуется значительное количество метилового эфира Ы-бензилоксикарбонил-1-аспартил- (Cf, )-1-фенилаланина, но большая часть этого соединения остается в фильтре..и в промывочной воде. В химическом стаКане ёмкостью 12 мл при перемешивании к полученному продукту присоединения метилового эфира Н-бенпилоксикарбонил-1-аспартил- (с I и Са)-1-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина добавляют 1,7 мл (0,7 ммоль) 0,4 НС1 водного раствора и смесь продолжают перемешивать при комнатной температуре в течение 15 мин. Белый осадок отфильтровывают, промывают 3 мл воды, сушат. Получгиот 0,136 г (выход 96,3%) кристаллов Nметилового эфира N-бензилоксикарбонйл-1-аспартил-L-фенилаланина (содержащий 17% N-бензилоксикарбонил-1-аспартил-(Са)-L-фенилаланина . Точка плавления 110 -- 118с. Пример 17. В кстбе емкостью 30 мл 0,543 г (2 ммоль) N-бензилoкcикapбoнилгL-acпapaгинoвoй кислоты и 0,918 г (4 ммоль) хлоргидрата этилового эфира L-фенилаланина растворяют в 5 мл воды, к раствору добавляют 4н водный NaOH, рН доводят до 6. В полученный раствор вводят 50 мг термолизина и смесь встряхивают при температуре 38 - 40°С в течение ночи. Осадок отфильтровывают, промывают 30 мл воды, сушат. Получают 0,913 г кристаллов, имеющих точку пдавления 85 - . Продукт тождественен с продуктом присоединения этилового эфира N-бен зилоксикарбонил-1-аспартиЛ-1-фенилаланина и этилового эфира L-фенилал нина (1:1). Продукт перекристаллизовывают из этилацетата и п-гексана. Точка плавления 93 - 95с. 6,0 (С 1, метанол).. Элементный анализ. Найдено, %: С 64,50} Н 6,56; Г н м п Вычислено, %: С 64,23; Н 6,50; N 6,61. Инфракрасный спектр: 3300 см (колебание растяжения связи N-H); 2900 - 3050 см- (колебание растяжения С-Н); 1710 - 1740с ( сложный эфир и С О уретан); 1640 . (1-ое амидное поглощение) 1585 см- (карбоксилат) ; 1520 см- (.2-ое амидное поглощение) ; 1440 см (деформационное коле бание С-Н) ; 1380-. см (кэрбоксилат) ; 1200 и 1270 см(колебание растяжения С-О-С и 3-е амидное поглощение) ; 1055 см колебание фенила в плоскости); 700 730 и, 750 СМ, (колебание фенила вн плоскости). Спектр ЯМР: (1)1,1 части на миллион (6Н); (2)2,7 части на миллион (2Н); (3)3,0 части на миллион (4Н); (4)4,0 части на миллион (4Н); (5)4,1 части на миллион (1Н); (6)4,5 части на миллион (1Н); (7)4,0 части на миллион (1Н); (8)5,0 части на миллион (2Н); (9)6,2 части на миллион (1н),; (10)6,7 частина миллион (ЗН) (11)7,2 частина миллион (1Н); (12)7,2 частина миллион (Юн); (13)7,3 частина миллион (5Н). Эти результатыподтверждают, что продукт является продуктом присоеди нения формулы (I) ,где R , R, vi n означают бензилоксикарбонил, бенз этокси и 1 соответственно. В колбе емкостью 30 мл 0,125 г (0,197 ммоль) полученного продукта присоединения метилового эфира Nбензилоксикарбонил-1-аспартил-Ь-фенилаланина и этилового, эфира L-фени аланина смешивают с 2 мл воды и 0,24 мл 1н НС1 (0,24 ммоль), смесь перемешивают при комнатной температ ре в течение 30. мин. Полученную сус пензию фильтруют, осадок промывают 5 мл воды, сушат, получают 0,0807 г кристаллов этилового эфира N-бензил оксикарбонил-1-аспартил-1--фенилалан на (чистота 100%, выход 92,6%). Кри таллы перекристаллизовывают из смес этилацетата и п-гексана. Точка плавления 128 - 135с. 17,3 (, метанол) . Элементный анализ. Найдено, %: С 62,82; Н 5,96; «.л«/ Вычислено, %: С 62,43; Н 5,92; N 6,33. Инфракрасный спектр: 3300; 2900 - 3100; 1730; 1690; 1665; 1530; 1440; 1200 - 1280; 1030; 620; 740 см Спектр ЯМР, (f: . . 1,1 части на миллион; 2,8 части на миллион, 3,0 части на миллион, 4,1 части на миллион; 4,6 части на миллион, 4,8 части на миллион; 5,1 части на миллион; 6,0 части на миллион; 7,1 части на миллион; 7,3 части на миллион; 9,6 части на миллион. Пример 18. 1,189 г (4ммоль) N-p-метоксибензилоксикарбонил-L-acnaрагиновой кислоты и 1,837 г (8 ммоль) хлоргидрата этилового эфира L-фенилаланина помещают в колбу емкостью 30 мл и растворяют в 1н водном NaOH, рН доводят до 6,0. Раствор разбавляют водой до 15 мл и смешивают с 0,1 г термолизина.Смесь перемешивают при температуре 38-40с в течение 7 ч. Полученный осадок отфильтровывают. Промывают 30 мл воды, сушат. Получают 2,401 г (выход 90,2%) продукта присоединения этилового эфира N-p-меТоксибензилоксикарбонил-Ь-аспартил-L-фенилаланина и этилового эфира .L-фенилаланина (1:1). Продукт перекристаллизовывают из смеси метанола и диэтилового эфира. Точка плавления 82 - . 6,0 (, метанол). Элементный анализ. Найдено, %: С 63,52; Н 6,77; .°-ro Вычислено, %: С 63,14; Н 6,51; N 6,31. . Спектр инфракрасного поглощения и ЯМР дают следующие- характеристические, максимумы. Инфракрасный спектр: 3300 СМ (колебания растяжения N-H) ; 2900 - 3050 см-I (колебание . растяжения С-Н); 1720, 1730 и 1740см ( сложные эфиры и уретан); 1650см (1-ое амидное поглощение); 1510 ,1540 (2-ое амидное поглощение); 1440 см-f (деформационное колебание С-Н); 1390 см- (карбоксидат) ; 1220 1280 СМ (С-О-с) растяжение и 3-е амидное поглощение) ; 1030 (деформация фенила в плоскости); 690, 760 и 810 (колебание фенила вне плоскости). Спектр ЯМР (с значение) : (1)1,2 части на миллион (6Н); (2)2,7 части на миллион (2Н); (3.) 3,1 части на миллион (4Н);

(4)3,8 части на миллион (ЗН)

(5)4,0 части на миллион (4Н)}

(6)4,1 части на миллион (IH) ;

(7)4,5 части на миллион (IH);

(8)4,7 части на миллион (1Н);

(9)5,0 части, на миллион (1Н)j

(10)5,5 части на миллион {4Н);

(11)6,1 части на миллион (1Н); (12) 6,8-7,4 части на миллион

,(14Н).

Эти результаты показывают, что продукт представляет собой продукт присоединения формул (I),.где R , Rj , Rj и n означают р-метоксибензиоксикарбонил, бензил, этокси и 1, сответственно.

Повторяют процесс описанный в примере 22, за тем исключением,.что используют полученный продукт присоединения вместо продукта присоединения метилового эфира N-p-метоксикарбонил-1-аспартил-1-фенилаланина и метилового эфира L-фенилаланина.Получают этиловый эфир 1-аспартил-1фенилаланина. Выход эфира 95,5%.

Формула изобретения Способ получения дипептидных ров формулы

MUD

оQ

П И Н « «чf

Hot-CCHg bCH - C-NH-CH-C-R

R2

где R,

гл бензилоксикарбонил,

п-метоксибензилоксикарбонилfR - бензил; Rj - низший алкоксил; п - 1 или 2,

личающийся тем, что

о т соединение формулы

О О

NHR.O ( -111 II II

,- L -ен-C-NH-CH-C-Ra R -C-CH-NH . НОС-(СН

iL ИL у

II

йа

5

где ,., Rg, R-j, n имеют указанные значения, обрабатывают водным раствором кислоты и отделяют полученный

.целевой дипепт дный эфир в виде твер|дого продукта.

; Источники информации,

;принятые во внимание при экспертизе 1. Патент Японии № 14217,

-кл. 16 С 64, 1974.