Способ получения производных полипептидов или их фармацевтически приемлемых солей Советский патент 1989 года по МПК C07K5/107 C07K7/06 A61K38/07 A61K38/08 

00 Ро

Изобретение касается производных полипентидов ,в частности, соединений общей ф-лы 1: R-PHE-W-NH-CHR₂-CH(OH)-CH₂(O)R₁, где R -трет.-бутилоксикарбонил или трет.-бутилоксикарбонил PRO

W - HIS или N - метил HIS

R₁ = A-PHE-OH -(при A=LYS

JLE) или LYS

STA

PRO-OCH₃

или NH -CHR₄-CH₂- NH - CHR₅ - C(O) OH [при R₄ - втор. бутил, R₅ = -CH₂-C₆H₅]

1,2,3,4 - тетрагидроизохинолин- 2-ил

1,2,3,4-тетрагидро-3-метоксикарбонилизохинолин-2-ил

4-фенилметилпиперидин-1-ил

1,2,3,4 - тетрагидро-3-аминокарбонилизохинолин-2-ил

1,2,3,4 - тетрагидрохинолин-1-ил

R₂ -циклогексил или изобутил, или их фармацевтически приемлемых солей, которые могут быть использованы в медицине как биологически активные вещества. Цель изобретения - создание более активных и менее токсичных веществ указанного класса. Их синтез ведут реакцией соединений ф-л П и Ш: HW-NH-CHR₂-CH(OH)-CH₂ C(O) R₁ (П) или его кислотно-аддитивной соли с R-PHE-OX (Ш), где W, R₁ - даны выше

OX - карбоксильная группа, активированная для проведения ацилирования. В случае необходимости защитные группы удаляют и выделяют целевой продукт в свободном виде или в виде соли. Новые вещества оказывают ингибирование на ангиотензин - расщепляющее действие ренина IN VITRO. 1 табл.

Изобретение относится к способу получения производных полипептидов - новых биологически активных соединений, которые могут найти применение в медицине.

Цель изобретения - способ получения новых производных полипептидов - малотоксичных соединений, обла;дающих более высокой рении-ингибирующей актин ноет ью.

Пример 1.N-(t-Бутилоксикар- б()Нил)-сЬе(-Гис-(.: ,|-Л11 1-Фр) .

А. Ы-Альфа-(t-бутилоксикарбонил)- Ы эпсилон-бензилоксикарбонил-лизин - фенилаланин, бензиловый эфир.

N-Гидроксибензотриазол (162 мг, 1,2 ммоль), N-метилморфолин (101,2 мг, 1 ммоль), L-фенилаланин, бензиловый эфир р-толуолсульфоната (428 мг, 1 ммоль), Н-;)льфа-( t-бyтил- oкcикapбoнил)-Ы-эncиJIOИ-бeнзилoкcи- кapбoнил-L-лизин (456 мг, 1,2 ммоль) 1 -циклогексил-2-( 2--морфолиноэтил)- кapбoдии oIД мето-p- i олуол сульфонат (Г)35 мг, 80% ЧИСТИТ,:, 1,2 ммоль) по

U4

следовательно рлстпоряют Б метилен- хлориде |гри и получ,1Ю1цийся раствор избалтынлют н течение 19 ч при 20 С, Реагирующую смесь последона-

т пьно .тают 75 мп 5,5%-ног 5 }5од- яого раствора НС 1, 75 мл насыщенного водтюго раствора NaUCO а, и 75 мл соляного раствора и сунгат 1{ад обечно- «ченной магнезией. После филрл рации и иысутчивания нолучают 669 мг продукта в виде пены ЯМР, CDC Ц , 1 , 5 сГ, 9HS(BOC), который испольяуют и последующем без дальнейшей очистки.

Б, (Ы-Эпсилон-бензилоксикарб(;нш1 лизин)-фенилаланин, бензиловьп эфир, гидрохлорид,

L М-Альфа-( t-бутилокс-Икарбонил )-N- эпcилoн-бeнзилoкcикapбoнил-лизин - фенилаланин, бензиловый эфир, лолу- ченный на этапе А (650 мг, 1 ммоль), растворяют в 7 МП 3,7 н. НС 1 диок- сан и оставляют на 1 ч при 20 С.Раствор в последующем упаривают досуха, получают 583 мг маслянистого исход- ного продукта, который в дальнейшем используют без очистки Н ЯМР, 5,2 сГ, 2HS (бензин С1Ц).

В . N-(t-Бyтилoкcикapбoнил)-cтa- нин }-(К-эпсилон-бензилоксикарбо)ил- лизин)-фенилаланин, бензиловый Э|Ьир, Бензиловый эфир (-1 -эпсш10к-бен- зилоксикарбомил-лизин)-фенилалаиина, полученный на этапе Б (583 мг, 1 ммоль), N-метил-морфолин (101,2 мг 1 ммоль), N-(t-бутилоксикарбонил)- статин (330 мг, 1,2 ммоль), N-гидрок сибензотриазол -(162 мг, 1,2 ммсэль) и 1-щ1клогексил-3 (2-морфолинэ гил)-кар бодиимид мето-р-толуол сулгзфопат

(635 мг, 80% частоты, 1,2 ммоль) последовательно растворяют в 50 ми ме- тиленхлорида при О С, получающийся раствор размешивают в течение 19 ч при , Смесь обрабатывают, как

указано в пункте Л, получают 760 мг продукта, который используют без дальнейшей очистки на следующем этапе синтеза н ЯМР, СДС1 ,,, 1,5, 9HS(BOC).

Г, Статин-(Ы-эпсилон-бензилокси-- карбонил-лизин)-фенилаланин, бензиловый эфир, гидрохлорид.

N-(t-Бутилоксикарбонил)статин }- (N-эпсилон-беизилоксикарбонил-лизип1 (Ьенилаппнин, бензиловый эфир, полученный на этапе В (760 мг, t ммол1), растворяют в 10 мп 3,7 н. НС 1/диок- сан и останляк ч нл 1 ч при 20 С. Эту

CNiecf) обрабатывают, как в пункте Б, получают 620 мг продукта в виде пены Н ЯМР, С/ЦОД, 5,2 iT, 211 S (бепзи . СН) , ко горую использую боз дп1 олнител11иой очистки па следующем этапе,

Л , N-A.(t)a-( 1-бутилоксикарб11Нил) -N -им-(t-бу.тилоксикарбонил)-гистидин статин-(Н- зncиJIO}f-бeнзилoкcикapбoннл Iизин)-фeнилaлaнин, бензиловы11 эфир,

Бензиловый эфир статин-(Ы-эпсилон Г . n лoкcикapбoнил-лизи)фpнилaлa- , гидрохлорид, полученный на этапе Г (600 мг, 0,857 ммоль), 1 1-метил-- морфолин (86,7 мг, 0,857 ммоль), N-ал ьфп-( L -бyrилoкcикapбoни, Гj N-им- ( 1-бутил()коикарбонил)-Ь-гистидин (365 мг, 1,03 ммоль), N-гидроксибен- зотриазол (135 мг, 1,03 ммоль) и 1- циклогексил-3-(2-морф 1линоэтил)-кар- бодииг-шд мето-р-толуол сульфонат (545 мг, 1,03 ммоль) последовательно растворяют в 50 мл метиленхлорида при О С и перемешивают в течение 19 ч г,ри 20 С. Получаемую смесь обрабатывают, как указано н пункте А, получают 770 мл продукта в виде пены ( Н ЯМ1 , СДС1з, 1,5 f, 2Н S (вое) и 1,6 сГ, 911 S (вое), который Ич:г1ользу- К)т на следующем чтапе без очистки,

R , гидин-с гатин-(Н-эпсилон-бен 3 ил о КС ик ар 13 о НИЛ-ли тин)-фенилаланин, бензиловый эфир, дигидрохлорид,

Ы-Альфа-( Е-бут1и1оксикарбонил)-( t бутилоксикарбонил)-гистидин -статин- (N-эпсилон-бензилоксикарбонил-ли- зин)-фенилаланин, бензиловый эфир, полученный на этапе Д (770 мг, 0,85 ммоль), растворяют в -10 мп 3,7 н НС1/диоксан и составляют на 1,5 ч при . Затем смесь обрабатывают, как указано в пункте Б, с получением в виде пены 602 мг продукта (Mi, , 5,2 rf, 2Н S (бензил СН,)), ко- торьи используют в дальнейшем без очистки.

Ж, N-(t-Бyтилoкcикapбoнил)-фeнил- аланин -гистидин-статин-(Ы-эпсилон- бензилоксикарбонил-лизин)-фенилаланин, бензиловый эфир,

Гистидин-статин-(N-эпсилон-бензил- клрбонил-лизин)-фенилаланин, бензиловый эфир, тдрохпорид, полученный на этапе Е (602 мг, 0,689 ммоль), N-метил-морфолин (139 мг, 1,38 ммоль), N-( 1.-бутилоксикарб(знил) -L-фенилала- нин (219 мг, 0,827 ммоль), Ы-г идрокси бензотриазил (112 мг, 0,827 ммоль) и

1-цик, гексил-3-( )ли FH; ггил) - клрбодиимнд мето-р-т(.лу11Л сулi.,iT (438 мг , П,827 MMOJII,) п()сл яонатель- но растворяют в 50 мп мотилеихлорн- да при О С я по;гученн|,11 JJ-TCTBOJ) перемешивают в Т челие 19 ч при 20 Г, В последую1ЦРм ре.згирующук) смесь обрабатывают, как укачарго в пункте А, с получением в виде пены 55S мг продукта, который чистят хроматографичрски (силикатный гель, 95:5 (: и НеОН получают 136 мг очищенного продукта в виде пены и ЯМР, СЛС1, 1,5 J, 9Н S(BOC)J .

Ы--(С-Бутилоксикарбонил)-фенил- аланин J- гиcтидин-cтaтин-(N-эrIcилoн- бензилоксикарбонил-пизин)-фенилала- нин, бентиловый эфир (136 мг, 0,17 ммоль) и 70 мг 20X-iioro Pd(OH) последовательно прибавляют к 15 мл метанола и получаемую смесь гидро- генизируют в течение 1 ч при 50 Пси 20 С. Затем смесь фильтруют через Супер-цел, сушат и получают 76 м стекловидной массы, которую растирают в порошок с эфиром с получением 63 мг очищенног о Н-( t-бутилокси- к ар б о ни л ) - фе НИЛ ал а пин - ги с ги д ин - с г я - тин-лизии-фенилаланин в виде порошка t n ЯМР, , 1,5сГ, 9Н Я(ВОС) .

Пример 2, Н-(t-Бутилокси- карбонил)-Фе }-1 ис-Ста- ANiHHo-( 2-втор бутил-этилен)-Фе соль анетиловой кислоты,

А, N-(1-Бутилоксикарбонил)-Ь-изо- лейцинал.

Готовят смесь Т -изолейцин метилового эЛира (24,3 г, 0,134 ммоль) и триэтиламина (13,5 г, 0,134 ммоль) в метиленхлориде (210 мл), к ней по каалям добавляют раствор дитертбутил- дикарбоната (AldRich, 29,1 г, О,134 ммоль) в метиленхлориде (25 мл) при 0°С, По завершении добавления смесь нагревают до комнатной температуры в течение ночи, затем фильтруют. Фильтрат тщательно отмывают водой (3 X 75 мп), водным раствором 0,1 н, НС 1, водой ( X 100 мл) и насыщенным водным раствором ЫаНСО (I х 75 мл), высущивают и выпаривают с получением метиловпго эфира )-( 1;-бутилоксикар- бонил)-1 -изолейцина в виде масла 30,7 г, выход 93%, Ml Я№ (СДС); f: 0,92 (д, Л 7, 611); 1,43 (с, 9Н); 3,70 (с, ЗН); 4,17 (дд, Л 3, 9, 1Н); 5,03 (д, Л 9, 1Н). Раствор

83926

М(1 ,пг(1 флрл N-( t-n -тилоксик.т- Гчппгл )-L-i 3c norin;ni,i в виде м.к ла (15,0 г, 61,1 ммоль) в бсз1Ч дном толуоле (260 мл) охлаждают дс. -78 С и 1 раствор диизобутила алюминий т-ид- рата в гексане (153 мл) по каплям добавляют так, чтобы при этой экзотермической реакции температура не

to повьпча.чась вьшт -65 С, Затем следует перемешивание при 78 С, по завершении смесь Т1чательно охлаждают с помощью 15 МП метанола (температура смеси не должна превышать -65 С), за5 тем следует добавление 200 мл раствора Рапель-соли. После нагревания ДС1 ко1 1натной температуры отделяют ор- 1-аническпй слой, который экстрагируют эсЪиром (3 X 200 мл), повторно до0 бавляют раствор Рашель-соли в случае необходимости растворения аммониевых солей. Комбинированный органический экстракт высу1Г1ивают ( ) и выпаривают с получением промежуточного

5 продукта в виде масла. Это масло хранят при -78°С во избежание возможной рецемизации и используют без очистки на след то1цем этапе синтеза 132 г, выход 98%, Rf 0,32 в 35%-ном эфире

0 в гексане, п ЯМР СДС1 j . 1,00 (д, Л 7, 6Я); 1,46 (с, 9П); 9.65 (с, ПО .

Б. Амино-(2-сек-бутил-этилен)}- фенилаланин, бонзиловый эфир, дигидг рох.чорид.

Смесь N-(Г-бутилоксикарбонил)-Ь- изолейцинала (2,00 г, 9,29 ммоль) и бензилового эфира п-тозилата фенил- аланина (кемснии-, 3,73 г, 8,84 ммоль)

0 н метаноле (150 мп) перемешивают в течение 35 NOIH в присутствии молекулярной сетки с шагом 3 Анстромг (Вен- трон) при комнатной температуре, Затем добавляют 0,73 г (I1,6 ммоль)

с NaCNBH, и смесь перемешивают еще в

течение I ч при комнатной температуре, Затем сетку отфильтровывают и фильтрат концентрируют с получением маслянистого остатка, который растворяют

0 в концентрированном NaUCO и дважды экстрагируют с помощью эфира. Комбинированный эфирны) экстракт высушивают (Na.SO) и концентрируют с получением масла, которое чистят фпэш-хрос матографией с испсиЕьзованием 12%-ного этилацетата в гексапе - элюенте, после чего получают 1,()9 г бензилового эфира ( 1-бутилок(-иклрбонил)-амин 1- (2-втор.бутил-этмлсп)-фенш1аланина

71Д

в виде масла (иых(чд 4П7,, Rf - 0,28 в 25Z-HOM тгилацетате н (:;.1ие) . )г(1 Kicjio крИ(У1 , при хранении I т.р. 5 3-55°С, П ЯМ1 (СДГ,,), f : 0.6-1,0 (м, 6Н); 1,48 (г, 9П); 2,92 (л, J 7, 211); 5.07 (с, 2И); 7, 17 (г., 51); 7,25 (с, 511}. Раг. (t-бyтил()кcикapбoниJI)-n 1ииn- 2-in-op утил-этилен) }-|{)еиилалаиии, беи.чипо- вый эфир (2,94 г, 6,47 ммоль) в 4 н. НС1 /диоксан ( 1 10 мл) пс1)еме111ипа1от в течение 2 ч при комнлтн(и температуре, защищая от атмос11)ерм трубой с СаС. Растворитель удаляют при пони женном давлении с эфир-азеотропом и остаток растирают с эфиром с получением белот о твердогс.) вещества 2,65 г, деблокированньп выход 95%, т.р. 183-184°С; Rf 0,73 в ВиОН,

fbO и уксусной кислоте (4:1:1) Я№ (С/ЬОЛ), 1,00 (широкое д, 6И); 5,13 (с, 2Н); 7, 1-7,5 (м, 10 ) . В. N-( t-Бyтилoкcикapбoнил)-cтaтин }- амино-(2-сек-бутил-зтилен)- (Н-бензилоксикарбонил-фенилалании),

бензиловый эфир (1,55 г, 3,63 ммоль) Суспензию амино-(2-бутилэтилен) - фенилаланин, бензилового эфира, гидрохлорида в метиленхлориде (40 мл) охлаждают до и )1ейтрализуют при этой температуре гриэтиламином (0,808 г, 7,99 ммоль).

N-(С-Бутилоксикарбонил)-статин (1,00 г, 3,63 ммоль) и N-гидрокси- бензотриазол (0,74 г, 5,45 ммоль) добавляют к суспензии г:ри О С. В -ьч- ключение дициклогексилкарбодиимид (0,75 г, 3,63 ммоль) и метиленхло11И- де (2 мл) добавляют к суспензии при 0°С и полученнум смесь перемеишвают в течение 3 ч при О С, а затем еще в течение 16 ч при комна -ной температуре. Образующийся осадок фильтруют и фильтрат концентрирует и смеши- вают с 125 МП этилацетата. После от- фильтровывания нерастворимых твердых веществ этилацетатный слой отмывают насьш1енным водным раствором ЫаИСО (135 мл), в.|суигивают () и н,|- паривают с получением пенистого ве- пества. Последнее чистят флэш-хроматографией, используя 35%-ный этилацс тат в гексане как элюент с 1толучени- ем очи111е1 ного Н-( t-бутилоксиклрбо- нг.л ; с гагип - амино-( 2-сек-бутил-г1ти де т)3 фенилплаиин, бензилового Э|Ьир в вг; - .| 1,96 г ; выход 88%; Rf 0,;И п -ксип.чпнт.-гп- и Г(ч;г,ап1. ( I: О

78

И Я№ (СЛС), 0,6-1,1 (м, 12 И)

i, 12 ММОЛ1Л п диоксапе ( 16 мл) пцили руют бенэил1)ксика))бонилхлоридом (ке- малог , 67 мкл, 0,80 г, 4,68 ммоль) с и с пол 1)3 он, ищем на( Ы1ие} Ного водного ; Djopa Ма11(()д , утя получения рИ 8. Ь все исходные матери;глы изр,и;хс допаны (но показателям TLC), д)1оксян удаляют при пониженном даяленни, а остаток растворяют в иоде и экстраги эти:1ацетатом. ПтиллцетатиьпЧ эк- (;ракт нысущиваюг (MgSO) и ньП1::ри}5а KIT с г(1л ченисм neHucTorcj вещества, которое чиг тят (1шэш-;.роматографией, после получают белую пену (2,06 г; Ri - 0,7 в этпллцетате и гексане (1:1); И Я№ (СДС1з), : 0,6-1,0 (м, 1210; 1,48 (с, 9Н); 7,0- 7,4 (м, 15И).

Г.-Ж. N-( с-Бутилоксикарбонил)-фе нилгшанип -1П1стидин-статин- амино- (2-нтор .бутил-этилен) - 14-Оензилокси карб(Л1ил-фенилш1анин , бенэиловый эфир.

По способу, описанному н этапах К - примера 1, очищенный ( t-бутил оке и карбонил)-статин но-(2-втор бутил-этилен)-(N-бензилоксикарбонил фенилал анин) , бензил1)вый Э(1)ир , полученный на эт апе В (2,03 1,2,72 ммоль) превра1цают в очищенный N-(t-бyтил- оксикарбонил)-фенила.ланин -г истидин- статин- ам}1но-( 2-в тор. бутил-этил ей) (N-бензилоксикарбонил-фенилаланин), бензиловый эфир 0,595 г; пена; Rf 0,36 в 50%-ном метаноле в хлороформе; Я ЯМР (СЛС1з),(: 0,6-1,0 (м, ); 1,38 (с. 9Н); 6,75(с, 1Н); 7,1-7,3 (м, 20Н); 7,38 (с, 1Н).

Катализатор - 10% Pd/C - добаш1Я- ют к раствору бензилового эфира N- ( t-бyтилoi;cикapбoнил)-фeнилaланин 1- т истш1ИН-статин- амино-(2-ьтор,бу- 1ил-этилен)- Ы-бензилоксикарбонил- фенилаланина (150 мг, 0,150 ммоль) в 4 M;I смеси: этанол и муравьиная кислота (1:1), полученную смесь гид- ро 1 рнизируют п течение 12 ч при ком- п.тгнсН температуре и 40 Пси водорода После этг)го смес) (1)ильтруют и фильтр.11 КОПКСЯ г рируюг с fnit:M TBt-p

ч1Д98392

нсмцестна (128 MI ), KOTojine растирают с -эфиром до получения очищенного нродуктл N-t:-(Пyтилoкcик pбo- нил)-ф ч илaлat ин - гис: гидии-i:татин- а ми но-( 2-втпр , бутил-Э р.лен) -фенил- аланина п ви/1и уксугнокигло соли 109 мг; вых(ц т.р. liy-lZG C; Rf 0,57 n ,иО, и АсОМ (4: I: 1); Н Я№ (СЛзОЛ, 250 МП), (f l 0,8-1,0

1

к

с

10

циклогексил I СНг

(i-5ymuлoяcL// ap5oнuл) СН- СН-СН - СООН

I

Ледяную уксусную кислигу (65 мл) и 10Z Шт/С (каталитатпр, 1,5 г) добавляют к раствору М-( t-пу ги.гюксикар 6oHi Ln)-4(;-))aNniHo-3( S)- i идрокси-5-фе нилпентаноной кислоты ( 1(J,()2 г, 9,70 ммоль) в ме ганоле (2000 мч), полученную cMecii г идро ге)1и чируют в течение 8 ч при комнатноГ температуре и 45 Пси водорода. После реакции смесь фильтруют и фильтрат концентрируют до белого тверлого вещества, которое растирают в гексаие. Получают очищенный продукт (8,46 г-; выход 83%; т. р. 109-ПО°С; Rf 0,72 в CnClj, МеОН и уксусной кислоте (18: :2:1); Н ЯМР (): ,45 (с, 9Н); 2,55 (д, Л 6, 211).

Б, Названное вещество.

Подобно CHOC(j6y, описанному в примере 1, но с испо.)ванием N-(t-6y- тнлоксикарбонил)-диклостатин вместо N-(t-бутилокси карбонил)-статин, из го тпвливяют названное ве.щест} :) ЯМР (), 1,50, 9fl S(B()(;), выход 5%.

П р и м е ji 4, t I4-( t-1 утилокси- к ар б о ни л)-Про -Фе-1 ис-ииклостатин- Лиэ-Фе,

Подобно способу, oпиcaннo fy на этапах А-Е примера I, но с использованием N-( t-бyтилoкc;икapбoнил)-цик лостатин вместо Ы-(t-бутилоксикарбо- нил)-статина, получают не1чество гис- тидин-циклостатин-(Ы-тпсилон-бензил- карбонил-лизин)-фенилал шин, бензи- ловый эфир, ди г идрохпори;. Аналогично этапам Ж и Ч, О11исанп|.1м в примере I, но с исг1ольз( N-(L-6y- тилоксикарб(нил)-11ролип -фенилалани- на (имеющегося в продяже) iii-iecTo N-( 1-бутилоксик,) -ф С НИЛ ал а НИН а и с испольч{)ваниом lilI M; и MeDH 95:5

8392

10

(м, 1211); 1,36 (с, 9Н); 1 ,2 (с, ). 2,2-2,45 (м, 2Н); 4,28 (дд, Л 9. 4, 1Н); 3,54 (широкое т. 111); Ь,.2 (,-, 1Н); 7,2-7,4 (м, ЮН); 7,63 (с, 1H)J.

И р и м е р 3. N-(t-ByTnnoKCH- кярбо){ил)-Фе -1 иг-1шклостатин-Лиз-Фе .

Л. N-( С-1;утил(ксикарбонил)-цикло- статии:

10

СН- СН-СН - СООН

20

0

5

0

5

0

5

I

ОН

как злюенга при силикатной хроматографии, названное вещество изг отавливают в вих;е твердого очищенного -1,

продукта И Я№, (СЛзОД), 1, 49 Л 9Н S(BOC), выход 2,5%.

Пример 5. N-(t-Бутилокеи- карбонил)-Фе }-Гис-1Ц1клостатин- ами- 5 но-(2-втор.бутил-этилен)-Фе, соль муравьиной кислоты.

По способу, описанному в примере 2, но с использованием N-(t-6y- тилоксикарбонил)-пиклостагина вместо N-( 1-бутилоксикарбонил)-С ; тин, получают названное вещество т,р. 150- 163°С (дек.); Rf - 0,50 в бутаноле, уксусной кислоте и воде (4:1:1) (нин- гидрил); и ЯМР (): 0,6-2,4 (м, 23Н); 1,37 (с, 911); 7,1-7,4 (I IH); 6,95 (с, 1Н); 7,70 (с, 1Н).

Пример 6 , N-(t-Бутилоксикар- бонил ) -П1с-циклостатин-Лиз-Ста,

По способу, описанному в примере 1, но с использованием с.татин-бен- зилового э(})ира гидрохлорида вместо L-фенилаланин бензилового эфира р-толуол сульфоната и N-(t-6y- тилоксикарбонил)-циклостатин вместо N-( t-б у Tiin о к си к арб они л)-с тати- на, получают названное вещество И Я№ (СЛ/ХЛ), 1,5 f, S(BOC), выход 11%.

Пример 7.Ы-(1-Бутилоксикар- бонил)-Фе -Гис-диклостатин-С 3-меток- сикарбонил-1,2,3,4-тетрагидро-2- изохинолин).

А. t N-(t-Бутилоксикарбонил)-цик- лостатин -( 3-метоксикарбонил-1,2,3,4- тетрагидро-2-иэохиполин).

Подобно способу, описанному в этапе В примера 1, но с использованием N- (С-бутилоксикарбон11л)-циклостатина (190 мг, 0,60 ммоль) вместо N-(t-6yтилокгикарбоиил)гтлтинл и З-метс.жсц- кар Зоннл- 1,2,3, 4-тетр, 11 идро-изохиио- лииа гидрохлорида (137 мг, 0,60 ммол вм(0то М-эпсилои-беиг ил-()кснкарбонц- ли ин )-фенилаланин бензилоный -эфир гидрохлоридя н виде пенистого пещест- ва получают N-(Ь-бутилоксикарбонил)- циклостатин -(З-метоксикарбонил- «- 3, 4-тетрагидро-2-изохинолин) , KO торый использунтт без дополнительной очистки на следующем этапе синтеза 301 мг, И ЯМР, (СЛС1 ), 1,5 сГ, 911 S(BOC)j.

Б, Названное ветество.

По способу, указанному в этапах Г-3 примера 1, получают 391 (t- бутилоксикарбонил)-фенилаланина -гис- тидин-циклостатин-(3-метоксикарбо- пил-1,2,3,А-тетрагидро-2-изохиноли- ;{а) в виде пены. Эту пену чистят хро- матографически (силикатный гель, xiio- роформ метаноловыГ г-радиент) с пыхо- дом 138 f-ir очи1ценного продукта в виде белого твердого ве1чества 11 Я1-1Р, 1,5 cf, 911 S(BOC) .

Примеры 8-12. По способу, описанному в примере 7, но с использованием соответствующих производных изохинолина, хинолина или зпншридииа вместо 3-метоксикарбонил-1,2,3,4-тет рагидро-изохинолина, получали следующие вещества:

N-( t-ByтилoкcикapбoниJl) циклостатин-R (см. табл. 1).

Полученные соединения изучены с гшмопп.ю спектроскопии ЯМР,

Пример 13. N-(Ь-Бутилоксн- клрбонил)-Фе -Г ис-циклостатин-Иро, метиловый эфир,

А. ( N-( t-Fyтlfлoкcикapбoнил)-циклo статин -пролинметил,

По способу, описанному в этап К примера I, но с использованием N-(t- бутилоксикарбонил) -циклостатииа (3,15 г, 10 ммоль) вместо Н-( 1,-бутп.11 оксикарбонил)-статина и метило1 ого эфира пролин г щрохлорида (1,65 г, 10 ммоль) вместо бензилового зфира (Ы-эпсилон-бензо.поксикарбонид-лизин) фенилаланина н виде гидрохлорида получают метилоны(1 чЛир Н-( t-бу гилсч;- сикарбонил-пиклосгатин -пролина п и де белого твердого вещества (3,) г

Б. Пачначпое нещест во. По сгюсоПу, . в этапл/; примера I, получаыт N-(t-6y- тилоксик лрбпии 1 -фенил л мл НИН }-I-MI F и

0 5

0

Q

с

0

5

дин-циклостатнп-пролин метило л,1Й эфир, выход 2%,

П р и м е р. N-(трет.-Вутилокси- карбо}1ил)-фенилштанин J-N-метил-гис- тидин-статин-изолейци}1-(})енилаланин.

A,Ы-(трет, -Бутилоксикарбонил) метил-гистидин.

600 мг (2,93 ммоль) N-метнпгисти- дина, 1,65 мл (11,2 ммоль) триэтил- амина, 1,48 мл (6,4 имоль) трет,-бу- тилоксикарбонила, 8,5 мл 10%-ного би- к .рбоната натрия и 10 мл 2 н. НС1 р. воряют в 5 мд диметилформамида. После завер 1 ения реакций диметилформ- амид упаривают, добавляют 15 мл этил- ацетата и 15 мл 10%-ног-о раствора бикарбоната натрия. Полученную смесь промывают этилацетатом (2x5 мл), подкисляют 8 мл 2 н, НС 1, экстрагируют зтиланетатом (4x20 мл), проьивлют - рассолом и высушивают, получая 846 мг пены, н ЯМР, 60 мГц, СДС, частичный: 1,4 (с, 9Н, Вое); 1,6 (с, 9Н, Вое); 2,8 (с, ЗН, N-CHj); 2,85 (м, 111); 3, 15 (м, 1Н); 4,75 (м, 1Н); 7,2 и 8,1 (с, 1Н еа, П имдазолила),

Б, Изолейцил-фенилаланин-бензило- эфир )-(трет .-бутилоксикарбо- ни л ) -N - ме ТИ л- ГИ с т ид ИН J- с т ч н а .

179 мг (0,43 ммоль) фенил,танин бензилового эфир. хлор гидрата статин- изолейцина, 316 мг (0,65 ммоль) N-( трет ,-бутилокгикарбонил )-N-f1eтил- гиcтидинa со стадии А, 0,91 мл три- этиламина, 165 мг (1,07 ммоль) гидро- ксибензтриазола и 134 мг (0,65 ммоль) дицикло гексилкарбодиимида переносят в 8 МП хлористого метилена. По завершении реакции (7ч) реакционную смесь разбавляют хлористым метиленом, фильтруют, концентрируют, экстрагируют этилацетатом (40 мл), промывают 1 н. NaOH (2x5 мл), промывают рассолом и высушивают над сульфатом Натрия с получением 235 мг пены (выход 62%),

и ЯМР, 250 мГ ц, СДС, частичный: 0,82 (м, 12Н); 1,45 (с, 9П, Вое); 1,6 (с, 9Н, имВос); 1,8, 2,33, 2,52, 2,91, i,24, 3,67, 4,05, 4,25, 6,82 (м, 1Н каждый); 2,93 (с, 311, Н-СП); 3,12 (м, 2Н); 4,8-5 (м, 211); 5,13 (АИ дублеты, С1Ц(1), 7-7,4 (м, 12-15И); 7,96 (с. 111, Н-2 имидазолила).

B.Бензиловый чсЪир хлоргидрата Ы-г-1ети.п-гистидин-ста ( ин-изолейцил- фенила.гиишна ,

Продукт ст.лдии li (228 мг , 0,26 мм(П1ь) рлсч поряшт в 4 н, Пс; I в

диокслне с получением гоепииення, обозначенного в заглавии. 11 ЯМ1 , 250 мПд, ДМСО-dt, частичный: 0,7-0,9 (м, 12Н); 3,03 (м, 215); 3,8 (м, 2Н); 4,25 (м, 2Н); 4,-г Гм, 111); 3,06 (АВ лублрты, 2Н, ОСП.,); /,1-7,4 (м, примерно 1211); 7.3 (г, 1И, И-4 ямид- аэолила); 7,85 (л, Ш); 8,6 (м, 2Н); 8,8 (ш, 1П).

. Беияиловый эсЬир (трет .-бутило к гик арб о НИЛ )-фе пинал;) НИН -1 1-ме- тил-гистидин-гтатин-ичоле/ шил-феншл- .мланина,

Продукт стадии В (100 мг,

0,133 MMt-ль), трет ,-бутилоксикарбо- Mll:Il eнил;. гaпил ( -ir, 0,154 ммоль), гричтиламин (0,08 ti, 0,35 ммоль), 1 идрокг.ибензтриа-зо.; (33 мг, 0,154 ммоль) переносят в 1 ,-ш тот о метиле ьт и 1 мл /шмегил ормами- да. (То завершении реакции гмес1 обрабатывают разбавленно; соля)юй кислотой, нейтрализуют насыщенным водным растворс)м бика боната натрия, вы г.111ин, 1ют раствор, упаривают и получают 74 мг (57%) продукта в виде белой пены. Н ЯМР, 250 мГц, СДС1-,, частим :ый: 0,75-0,45 (м, 1211); 1,35 и 1,4 (с, 9Н обгчие, неэквивалентные Вое Р двух ротамегрических (fxjpMax) ; 3 (с, N-CHj); 3,13 (м, 2-311); -3,95, 4,25, 4,8 и 4,9 (м), 3,1 (ЛР дублеты, 2Н, .j); 6,7 (ill, 1И); 7-7,4 (м, арома- тика).

Д. Зат ларное соединение.

ы-(трет.-Бутнпоксикарбонил)-фе- нилаланин }-Н-мети.а-гистидин-статин- изолейцин-фенилала}}ин получают путем снятия ,и1ения соответствующего бен- зилового эфира, полученного в стадии I . Н-ЯМ), , 250 мГц, частичньп S (ррм от ТМС); 0,9 (9Н, Ml); 1,37 и 1,45 (с, 9Н, обище Вое); 2,71, 3,06 (с, ЗН, общие, N-Clij); 4,2. (д, Ш); 7,2-7,3 (м, лроматика, 10-1211).

Проведет, биологические испытания соединений, полученных в условиях нредлагаемого способа,

И и гиб про ванне ант иотензин-расщеп- ляю1цего действия ренина iti vitro.

У здоровых сотрудников лаборатории брали плазму крени, кс торую перемешивали и хранили в замс1роженном состоянии. Перед начаш м опьпа часть ima3Nfl4 разморажипа) г, ufirrpif jyгируют и пре.дварител f.Hn с NICIIMIH ИО с ингибиторами протеаз и .-;ц,р,,м ( рП 7,4,

Ингибиторы ренина добавляют в рлзлмч ной кратности разведения к подготовленной плазме. Полученнуто смесь инкубируют в течение 3 ч при . В этих же условиях инкубируют пробы, не со- держа цие инп1биторы ренина.

После инкубации смеси охлаждались в воде со льдом и каждая из них ис- с.чедов. шась на содержание ангиотен- зиногена 1 с помо1цью антител к ан- гиотензиногену 1. Образование ангио- тензиногена 1 в присутствии ингибиторов ренина сравнивалось с его количеством в пробах без ингибитора с последующим исчислением процентного соотношения ингибиции. Используя полу- чентгые данные при дублируемой инку- ,бации каждой из серии концентраций ингибитора, определялась концентра- пия ингибитора в инкубируемой смеси, способная уменьшить ангиотензин-рас- щеиляющее действие ренина на 50%, т.е. IC.jj ингибитора, и этот параметр применялся при изучении различных ин- г ибиторов.

Ангиотензиноген 1 в охлажденных инкубированных смесях изучался радиоиммунным способом с использованием меченого ренина, поставляемого фирмой Бектон, Дики}1сон и К (Орангебург И.И.). Указанная методика радиоиммунологического исследования разработана Haber.

Коэффициент ренин-инп1биции с использованием указанной методики определялся дня каждого из веществ, описанных в ттримерах 1-5 и 7-12. Во всех

0 5

0

5

случаях ТС

50

в зксперименте оказался

ниже 5 NOiKpoMonb на литр.

Подавление экзогенных ренин-инду- цирую1чих прессоров in vivo.

Крысы Sprague-Dawky мужского пола (весом 200-300 г) анестезировались фенобарбиталом натрия (65 мг/кг веса, интраперитонеалыюе введение), после чего бедренная вена и сонная артерия животных катетеризировались. По завершении хирургического вмешательства животных укладывали на спину и проводили на протяжении опыта измерение ректальной температуры. Значения артериального давления (t lAP) записывались через катетер сонной артерии при noMOiun Statham Р-23 Д, (трансдуктора давления и физиографа). По ист рчении периода стабилизации определяли прессорнун) активность ренина

1Ь1/4983921 Ь

(dp) (в Г1р:)еде.и.чх мм рт.ст.) слот ичиун) иыбрлинсл1 при кпитрслльном

исполь:1оваииом снинш о ренина (30-ннедении) ил 5, 15 и Ю-й мин после

80 мИ/кг HGi-.a, внутривенно). Послепнедения ингибиторов ренина, носле

вотврящения МЛР к исходному уровнючего и:эмеряли соответствукицие данные

iipviMGHHJiH ингибиторы ренина (10 мг/кгпрессорной способности ренина (dp),

веса, внутривенно) и животным повтор- Процент подавления исчислялся но форно вводили спиной ренин (дозу, ана- tyлe:

в

(KOHTgojibHoe dg - 3KcnepHMeHTaji 100% контрольное dp

где контрольное dp и эксперименталь-В табл. 2 приведены величины поное dp соответствовали изменениюдаваения прессорного эф(1)екта предлапрессорного эф)екта в 1ЧАР перед иги B.IMH соединениями и соединением

юсле применения ингибиторов ренина. сравнения. Желательно, чтобы в каждом исследовании использовалось не менее трехФорму: а изобретения животных и исчислялись средние вели1 ины, С использованием указанной ме-Способ получения производных потодики может быть определен процент2о липептидов общей формулы подавления прессорного э(1кЬекта.

R-Phe-W -NH-CH-CH-CHjCORi

I I RZ 3

г-де R - трет .-бутилоксикарбонил,Rj - ОН;

трет.-бутилоксикарбонил Pro;Ry - А Phe ОН, где А - Lys, Не; w - His, N-метил His;или Ry - Lys Sta, ProOCH ;

Rj - циклогексил, изобутил;

бтор.бутил

(СН2.) -NH- СН- СООН

CHjCeHs

1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-2-ил,изохинолин-2-ил, 1,2,3,4-тетрагидро1,2,3,4-тетрагидро-З-метоксикарбонил- хинолин-1-ил,

изохинолин-2-ил, 1, 2, 3, 4, 5, 6 , 7, 8-де-или их фармат;евтически приемлем1,1х

ка1-идро-3-метоксикарбонилизохИнолин-солей, отличающийся тем,

-2-ил, Д-фенилметилпиперидин-1-ил, соединение формулы

1,2, 3,Д-тетрагидро-3-анинокарбонилН -1Ш-СН-СН-СН,С(0)Р.

I I i

RX ЕЗ

Ш1И ег(1 кисл(ггно-аддитивную саль под-вированная для проведения

вергают )дeйcтвию с соединениемацилирования,

(формулыс последующим удалением, в случае неР - Phe - ОХ,обходимости, защитных групп и выделением целевого продукта в свободном где ОХ - карбоксильная группа, акти-В1ще или в виде соли.

Т -i б .11 11 ц а 1