Изобретение относится к медицинской микробиологии.
Известна питательная среда для культивирования и хранения пневмококков, содержащая бульон Мартена, агар, нормальную лошадиную сыворотку и вазелиновое масло 1.
Однако такая питательная среда не позволяет длительно хранить пневмококки без нотерь вирулентности.
Целью изобретения является удлинение срока .хранения пневмококков без потери вирулентности.
Эта цель достигается тем, что питательная среда для культивирования и хранения пневмококков, содержащая бульон Мартена, агар, нормальную лошаднную сыворотку и вазелиновое масло, дополнительно она содержит 1 - 1 10 %-ный водный раствор 1-метнл-6, 7-днметоксибензимидазола гидро.хлорнда нри следующем соотнощенин компонентов, вес. %:
Агар0,2-0,3
Ы о р м а л ы I а я лошадиная
сыворотка4,0-6,0
Вазелиновое масло3,0-5,0
1 . 10- -1 . 10 5%-ный
водный раствор 1-метил-6, 7-диметоксибеизнмилазола гидрохлорида8,0-10,0
Бульон .V apTeHaОстальное
Питательную среду готовят следуюнщм образом.
Первоначально готовят бульон .Мартена
5 сменгеннем нептона .Мартена с равным объемом мясного настоя, устанавливают 1)П 7,8, добавляют 0,5 вес. ч, хлорпстого иатрия, кннятят 10 мин, снижают рН до 7,6-7,5 н фильтруют, К 100 вес, ч, бульона Мартена добавляют 0,2-0,3 вес, ч, ага;)а, выдерживают в автоклаве 30 мим при 120°С и добавляют 4-6 вес, ч. нормальио лоп1а.и1ноп сыворотки. Для сннження i)o,111 бактеринндных факторов нормальную
15 лошадиную сыворотку можно ннактнвировать нрн 58°С в теченне 30 .мин. К полученной смеси добавляют 8-10 вес, ч, водного раствора 1-метил-6,7-диметокеибензимндазола гидрохлорида концентрации
20 1-10 -1 . 10 г/мл. Раствор 1-метил-6, 7-днметокснбензимцдазола гндрохлорнда готовят на днети,1лнрованнО1 воде нли на физиологическом растворе,
В полученную питательную С1)оду засевают суточную бульонную культуру пневмококков нлн культуру, вы.де, енную непосре.дственно от больного ннев.;онией. Сверху питательную сре.ду залнва10Т 3-5 вес. г. вазелннового масла, кото,30 юе пие.дотвранхает высыхание ннтательпой среды при хранении. После суточной инкубации в термостате при 37°С посевы хранят при 4°С.
Через определенные сроки хранения онределяют вирулентность пневмококков. Для этого проводят внутрибрюшинное заражение белых мышей весом 18-20 г. Оценку вирулентности пневмококков проводят по количеству погибших в течение 10 дней наблюдения мышей, отнесенному к общему количеству зараженных мын1ей, выраженному в процер1тах.
И р и м е р ы. Приготовляют известную ннтатольную среду, три предложенные питательные среды и две нитательные среды, одна из которых содержит водный раствор 1-мети л-6, 7-диметоксибензимндазола гидро.хлорнда концентрации больше 1 10 г/мл в количестве больше 10 вес. ч., а другая - водный раствор 1-метил-6, 7-диметоксибензимидазола гндрохлорида концентрации
4
меньше 1 10 г/м-ч п ко.шчеетве меньше 8 вес. ч.
Культуру нневмококков засевают в нитательную среду. Сверху носев заливают слое.м вазелинового масла. После суточной инкубации при 37°С в термостате посевы хранят при 4°С. Через 24 ч после посева (т. е. до хранения), а также через 2, 4, 5,
6, 7 недель хранения проводят внутрибрюшинное заражение белых мышей вееом 18-20 г с целью опенки вирулентности нневмококков в зависимости от сроков хранения. Подсчитывают количество мышей,
ногибших в течение 10 дней наблюдения. Паходят отношение количества ногибших в течение 10 дней после заражения мышег к обш,ему количеству зараженных мышей, выраженному в процентах. Составы нитательных сред и результаты опытов приведены в таблице.
Из таблицы видно, что вирулентность пневмококков при хранении на известной среде сохраняется в течение менее двух недель (опыт 1). При хранении на питательной среде с водным раствором 1-метил-6,7-диметоксибензимидазола гидрохлорида концентрации 1.10 -1 10 г/мл, взятым в количестве 8; 9 и 10 г, вирулентность сохраняется 6 недель. Пневмококки, хранившиеся 7 недель, гибели мышей не вызывают (опыты 2-4).
При хранении пневмококков на питательной среде с добавлением водного раствора 1 -метил-6,7-диметоксибензимидазола гидрохлорида концентрации меньше 1 . 10 г/мл в количестве меньше 8 г вирулентность иневмококков снижается после двух недель хранения до величин, не приемлемых для применения пневмококков в исследованиях (опыт 5). При хранении пневмококков на питательной среде с добавлением водного раствора 1-метил-6,7-диметоксибензимидазола гидрохлорида концентрации больше 1 г/мл в количестве больше 10 вес. ч. вирулентность пневмококков ко второй неделе хранения в значительной степени подавляется (олыт 6). Пневмококки с такой вирулентностью но. применимы для исследований.
Применение предложенной питательной среды для культивирования и хранения пневмококков дает возможность увеличить срок сохранения вирулентности пневмококков до 6 недель, в то время как на известной питательной среде, пневмоко-кки сохраняют вирулентность не более двух недель, т. е. срок сохранения вирулентности увеличивается в 3 раза.
Длительное сохранение вирулентности пневмококков имеет большое значение при микробиологических исследованиях для диагностических и лечебно-профилактических целей, например, для получения диагностических препаратов, для определения типов пневмококков по антигенным свойствам, для определения тяжести заболевания через определение степени вирулентности посредством исследования процента капсулообразования, фагоцитабильности, токсинообразования, для определения чувствительности пневмококков к антибиоти. кам, для получения вакцинных штаммов.
Ф О ) м у .1 а изобретения
Питательная среда для культивирования и хранения пневмококков, содержащая бульон Мартена, агар, нормальную лошадиную сыворотку и вазелиновое масло, отличающаяся тем, что, с целью удлинения срока хранения пневмококков без потери вирулентности, она дополнительно содержит 1 . 10 -1 10 - %-ный водный раствор 1-метил-6,7-диметоксибен0 зимидазола гидрохлорида при следующем соотношении компонентов, вес. %:
Агар0,2-0,3
Пормальная лон1ад11ная
5сыворотка4,0-6,0
Вазелиновое масло3,0-5,0
1 . . 10-з%-ный
водный раствор 1-мстил-6. 7-диметокснбензимидазола гидрохлорида8,0-10,0
Бульон МартенаОстальное Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Л. Б. Балаян. Образование сульфид. но-устойчивых штам.мов пневмококков. - «Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, № 3. 1947, с. 71-75.
