Штамм бактерий VIвRIо сноLеRае еLтоR, используемый в качестве тест-культуры для идентификации гемолизина типа II подтипа @ холерных вибрионов Советский патент 1990 года по МПК C12N1/20 C12Q1/02 

Изобретение относится к медицинской мшсробиологии и может быть использовано при решении таксономии холерных вибрионов.

Цель, из обретения - получение nirafi- ма холерного вибриона эльтор, про- дуцирукнцего гемолизин типа II подтипа В.

штамм получен путем пассирования . штамма холерного вибриона эльтор 149 на питательных средах, содержащих 1,5% эритроцитов овцы. На этих средах методом селекции отобран клон с заданными свойствами - не лизирующий . эритроциты овцы, продуцирующий гемолизин, активный по отношению к эритроцитам морской свинки. Штамм Vibrio Cholerae el tor 149 Hly - type II subtype |3 депон фован под номером KM

№ 81 и характеризуется следующими признаками.

Культур ально-морфологугческие признаки В мазках.- вибрионы, в поле фазово-KOHTpacTfioro микроскопа типичная для вибрионов подвижность.

Прототроф.

На Ж1ЩК1ГХ и плотных питательных средах образуется типичный для холерного вибриона рост: на 1%-ной пептонной воде, диффузное помутнение,

ю

00

@

СП

на поверхности нежная голубая пленка, на щелочном агаре - крупщле, круглые с ровными краями, плоские, прозрачные в проходящем свете колонии Биохикшческие свойства. Штамм разлагает глюкозу в аэробных и анаэробных условиях,.маннозу, сахарозу, маннит, крахмал - образованием кислоть без газа. Продуцирует ацетилметилкарбинол, индол. Лекарбо- ксилирует лизин, орнитин. Не расщепляет арабинозу, не дегидролизирует аргинин. Не образует сероводород.

Обладает протеолитической активностью

Серолопгческие свойства.

Штамм агглютинируется О холерной сывороткой до титра,сывороткой Огава

о титра, с Инаба сывороткой не дает полохштельных результатов. Фагочувствительность.

Лизируется фагом Эльтор до-титра, фагами 3,4,5 до ДРТ, относится

к 10 фаготипу по 7й ожевкиной-Арутюно- ву, не лиатфуется фагом С.

Чувствительность к антибиотикам.

МЗК тетрациклина 0,015 мкг/мл. Растет на полимиксине - 30 ед/мл. Реакция гемагглютинации положительная Реакция Фогес-Проскауэра положительная. Вирулентность для кроликов-сосунков. Обуславливает холерогенную реакцию в дозе 10 м.к.

Способ, условия хранения и состав среды для хранения штамма агар Мартена, рН 7,2, посев уколом, сохраняют под вазелиновым маслом при комнатной температуре. .

Пример 1. Лия выявления продукции гемолизина штамм КМ № 81 (149) выращивают на мясопептонном бульоне, рН 7,2, в течение 18ч при , ко- торьй в дальнейшем используют для постановки пробы по Грейгу, титрования в лунках полистироловых пластин или наносят пятнами на пластинки агара, содержащие 1,5% эритроцитов морской

свинки, В пробе по Грейгу используют 1%-ную взвесь эритроцитов морской свинки, а в..лунки пластин вносят по одной капле 2,5% этих же эритроцитов. Указанные объекты для тестирования гемолизина ставят в термостат при

37 на 30 мин и зачитывают результат по наступившему гемолизу эри-гроцитов.

Для определения активности гемолизина полученную культзфу центрифу

0

5

0

5

0

5

0

5

0

5

гируют при 8000 об/мин и в надоса- дочной жидкости определяют наличие гемолизина и его титр с помощью 1%-н6й взвеси эритроцитов морской свинки на физиологическом растворе. Гемолизин обуславливает лизис эритроцитов морской свинки при 37 С в течение 30 мин. Титр гемолизина 1:800.

ПолученньвЧ: гемолизин, продуцируемый штаммом, фильтруется через керамические свечи, лизирует эритроциты морской свинки в течение 30 мин при 37°С как в. жидких (1%-нь:е взвеси эритроцитов), так и на плотных (1,5%- Ные взвеси эритроцитов) питательных - средах. Не разрушает эритроциты человека и овцы.

Пример 2. Исследуемый штамм холерного вибриона эльтор высевают на плотные питательные среды, содержащие 1,5% эритроцитов овцы, и : после инкубации в течение 18-20 ч при 37 С отбирают колонию, не образующую зоны лизиса. Параллельно высевают тест-культуру - штлмм 149. Далее с обеими культурами ставят пробу по Грейгу с 1%-ной взвесью эритроцитов морской свинки. Наличие лизиса эритроцитов морской-свинки и отсутствие лизиса с эритроцитами овцы свидетельствует о наличии у штамма гемолизина типа II подтипа |1. При исследовании штаммов классического биовара этап высева на плотные среды с эритроцитами овцы исключается, поскольку холерные вибрионы классического биовара продуцируют гемолизин типа II подтипа р, с этими культурами непосредственно ставят пробу по Грейгу с эритроцитами морской свинки. В качестве контроля используют штамм 149.

Использование штамма позволяет проводить идентификацию холерных вибрионов по .тесту образования гемолизина соответствующего типа. Кроме того, штамм может быть использован как носитель стабильного маркера при изучении структуры гена холерного вибриона.

Формула изобретения . Штамм бактерии Vibrio Cholerae eltor KM P 81, используемый в качестве тест-культуры для идентификации гемолизина типа II подтипа fi холерных вибрионов.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при решении таксономии холерных вибрионов. Цель изобретения - получение штамма холерного вибриона эльтор, продуцирующего гемолизин типа II подтипа β. Штамм получен путем селекции холерного вибриона эльтор на питательных средах, содержащих эритроциты различных видов животных. Штамм депонирован под номером КМ N81. Штамм холерного вибриона эльтор КМ N81 не лизирует эритроциты овцы и человека, однако имеет выраженную литическую активность по отношению к эритроцитам морской свинки. Для обнаружения гемолизина штамм КМ N81 выращивают на мясопептонном бульоне в течение 18-20 ч при 37° и ставят пробу по Грейгу, которую зачитывают через 30 мин. При наличии в исследуемом материале гемолизина типа II подтипа β наступает лизис эритроцитов морской свинки.