Изобретекне касается способа получения терапевтически активного сложного по шэ4н{ра серной кислоты с мукопошсахарипом из трахей крупного рогатого скота пригонного в качестве фармацевтическогч) 5 срецства аля лечения заболеваний суставов, который главным образом можно вво- пить внутрь суставов.
Сложные полиаф1фы серной кислоты с 10 мукополисахарипом, облаааюшие .тормозящим свертыванием крош и/или липолитиче.ским(антилнпемическим) цействием, могут быть ПО79Я0ИЫ сульфатщ}оваиием полнсахариаов животного или растительного 15 происхождения (Pharw. Praxis, 12,281 (1969)).
Несмотря на то, что соответствующие способы получения чарто сооержат такие техническн сломшые ступени очистки как 20 энзиматические шаги частичного отщейяения группы при помощи папаина, трипеина, гиалурониаазы или бактериальных протеаз, известные до сих пор препараты на рснозании резко выраженного гапариноиаиого 25
дайсгвия или другого их состава, как правило, не пригодны для печения заболеваний суставов относительно действия и переносимости, что особенно вьшвляется
при внутрисуставном введении.
Известны способы выделении кислых мукополисахаридов (DE- OS 1492 О 17, DE-OS 14678Ш, БЕ 843 О95, IP ; 031353, ЗрО761бО, iP123444), не пригодных, однако, для внутрисуставной инъекции при заболеваниях суставов.
По ОЕ-03 1492017 кислые полисахариды получают из костной или хрящевой ткани при помощи экстракции слабощелочным, водным раствором этияендиа.минтетрауксусной кислоты, обработкой экс1 рактов при рН 5 катионообменной- смолой iP 50 и энзиматическим отщеплением нерастворимых остатков при помощи папаина и трипеина и последующим осаждением кислых полисахаридов четвертичными соединениями аммония.
Далее дуоденальный гепариноиц с антихюпемическим действием по DE-OS 1467 ею был очизиён фракционным осажцеиием четвертичными слоями аммен ния или хлористого цинк а. Сульфата хонцррйтина были получены обработкой хряша пепсином и папаином (BE 843095), кудатуральной жидкостью штаммов Sirratia или Ьас. subt. (IP 031353), обработкой кожи животных липазой, проназой и хроматографироваиием на &owev -1(1 076160) или очисткой при помощи хромагографироеания на грубопористой, сильноосновной «шокообменной смоле (1г 123444). Йзгогрвияемые по японским патентам 7000 156-R (Defwent 04390R), 7001 445 ( Derw&nt O6504R), 7004 744 ( Derwettt 14519R).. t3l4 078 ( Defwevit 2S548U) низкомолекулярные полисульфаты хонпроина (молекулярный вес 4ОО-6000), получаемые Ш ч обработкой сульфата хонцроитнна (молекулярный вес 4ОО-4000) хЛсзр сульфоновой кислотой в пириаине или формамнде с последующим подшелачиванием, перегонкой с водяным паром или обработ«9й катионообменной смолой или же депотшеризяцией полисульфата хондроитина щт помощи хонароитиназы и фракционным осшкшнием органическими растворител;ямЯ хотя и обладают высоким ангилипемичесKtxMf т.е. антиартериосклеротическим ,ствием, одного, пригодность для тченйя ааЗелеванкй неизвестна, Целью изобретения является под/чение сложного полиэфира серной кислоты с му кополисахаридом в качестве терапевтического средства, вводимого прямо в суставную сумку при дегенеративных забо лбВ(шиях суставов. Изобретение основывается на задаче разработать способ получеиия высокоочищенного сложного полиэфира серной кисло ты с к укополисахаридом, свободного от . непереносимых: полисахаридных и iq)OTe- иневьос составныхчастей,: В соответствии с т з-обретением устбьновлэно, что для получения герапевтичеок« активного и переносимого суставами препарата с целью отщепления мешающих высокомолекулярньсс полисахаридов цнонирования этиловым сшртом сьфой смеси мукополисахаридов, подученной иэвест шм способом ив трахей крупного рогатого скота путем щелочной экстракции, фракционирование проводится преимущественно осаждением предварительной фракции при рН 1-2 И концентра1шей этилового спирта 30-34 об.%, которую отбрасывают, и последукхцим осажпб« 9 44 нием желаемой мукополисахарионой фрактга Концентрацией этилового спирта 7О74 об,%. Подученную главную фракцию после частичного гипролиза н сульфати- ровання пля огделення низ омолекулярных составных частей с молекулярным весом до SOOO подвергают диализу в внде 6%-ного водного раствора при рН 910 и при помощи польк волокон или мембран;Частичный гидролиз соляной кислоты к сульфатирование хлЬрсульфоно.вой кислотой в среде формамида проводится известным способом.. Полученный продукт очшдается сильнокислотной катионообменной смолой и обесцвечивается перекис1;Ю . Полученный слокный полиэфир серной кислоты с к Ополисахаридом (МПС) со-, держит 11-13,5% серы, 1,7-2,2% азота, 2О-26%; уроновой с kиcлoты. Тормозящая свертывание крови активность по сравнению со стандартом гепарина составляет менее 15 международных г единиц на мг.; После 12-крвтного вливания по О,2 мл раствора 50 мг МПС/мл в правый коленный сустав задних конечностей кроликов . (по три иньекшга в неделю) никаких воспалительных реакций суставной сумки не |1аблюдалось После 10-кратногр внутрисуставного вливания по 5О мг МПС/1 мл человеку обиаруживалась хорошая переносимость и эффективность препарата при деганерати ных заболевашЫх коленного сустава Пример 1. 10 кг свежих трахей Крупного рогатого скота размельчают в мясорубке и попученную; массу трижды перемешивают с 35 д адетона при комнатной температуре .() в течение 3 ч. После каждого пер1вМешивания фильтруют через грубое сито, Г убоволоконистый псрошок из трахей сушат на воздухе. Выход 2,15О кг, Пример 2. 2 кг сухого порошка трахей экстрагируют 60О г едкого натра и 15 л воды в течение 2О ч при 15 С, изредка переМещивая.-Затем |фибавлением 3,9 л 18%-ной соляной кислоты, рН раствора доводят до 1 и центриф ггируют. К прозрачному цеятрифугату (16 л) прибавляют 48 л этавола после i .нгтояния в течеще 15 ч при - С осадок отоедяюг. центрифупфовавием и промьюают алкоголем и ацетоаом в сушат в вакуумном эксикаторе.. Выход 203,4 г сырой мукополисахвридной смеси Пример 3, 20О г сырой мукопо лисахарицной смеси растворяют в 18ООмл
