Таблица 1 Возраст стеариновая олеиновая 4,OtG,7tl,7tO,38 2,214,2i 1,010,15 0,39 0,23 О,58 Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. Мочу в количестве Ю мл (из суточного сбора) охлаждают для инактивации содержащихся в ней бактерий 12-14 ч, далее мочу центрифугируют 10 мин при 15ОО об/мин. Для очистки жирных кислот мочи от примесей низкомолекулярных и неорганических солей используют диализ в дистиллированной воде при 37° С в течение 24 ч. В таком виде моча готова для дальнейшей обработки. Мочу берут всю, что осталось после диализа и добавляют к смеси хл роформметанол в соотнхшении 2:1 иа расчета: 1 объем объекта к 2О объемам растворителей. После добавления растворителей пробирку энергично встряхивают в течение 1 мин, ставят в горячую баню и оставляют на ночь при дня экстракции жирных кислот. Содержимое пр бирки отфильтровывают через обезжирен ный фильтр и добавляют 1/5 часть объема 0,74% хлористого калия для удаления нелипидов из экстракта. Про&1рку встряхивают и оставляют для полного расслоения смеси. Верхнюю водную фазу удаляют сифонированием. Растворител отгоняют в вакууме пр« температуре не вьпие 4О°С. К остатку приливают 5 мл смеси метанола с концентрированной сер ной кислотой, 0,5 стандарта (32 мг% для сыворотки и 2 мг% для мочи - рас вор гептодекановой кислоты в метаноле) Пробирку .выдерживают в водяной бане при 7О-8О°С с обратным холодильником 60 мин. Чтобы освободиться от серной кислоты, ее нейтрализуют 1О мл 0,5 и раствора двууглекислой соды, про мьшают дистилированной водой и наслаивают 5 мл бензола. Лишнее количества бензола испаряют. Хроматографирование производят в изотермическом режиме на хроматографе модели Цвет-3-66 при 19О-25ООС. Длина колонки 2 м, неподвижная твердая фаза - целит 545, неподвижная жидкая фаза - полиэтиленгликольадипат. Газ-носитель-азот. Чувствительность прибора 1Ох )4Q-10 Посадку пробы производят микрошприцем (1-10 мкп), посадка должна содержать минимальное количество растворителя, объем посадки О,2-3 мкл. Количество жирных кислот определяют в относительных единицах по отношению к стандарту. Для этого определяют плошадь каждого пика на хроматограмме по формуле b /Iti , где 5 - площадь пика; Ъ - высота пика; Ъ ff - ширина пика на половине его высоты. Концентрацию кислот определяют по формуле где С- - концентрация кислоты; 5 - площадь пика кислоты; 0 - площадь пика стандарта. Для определения концентрации жирных кислот в моче используют (1) в следующем виде: . c,.4i к , о где О - суточное количество мочи; 10- количество мочи, в мл, которюеберется для анализа; 16- множитель. КОТ01ЯЛЙ используют для того, чтобы можно было сравнить показатели мочи и сыворотки, введение этого множителя обусловлено тем, что при хроматографическЛм анализе сыворотки вводят 32 мг% стандарта, а при анализе мочи - 2 мг% стандарта; 51МГ /о ,, ЦАГУо В моче определяют концентрацию олеиновой и стеариновой кислот. Полученные данные сравнивают с нормой для соответствующего возраста и пола и диагностируют атеросклероз при увеличении в суточной моче относитепьно нормы стеариновой и олеиновой киспот, вегетососудистую дистонию - при содержании их, близком к норма.
Пример 1. Больной Ж - 49 пет поступил с диагнозом: стенокардия покоя и напряжения, атеросклеротический коронарокардиоскпероз.
Проверенные биохимические исследования на содержание общего холестерина, фибриногена и белковых фракш1й не указывали в пользу диагноза: общий хопесте рин - 194 мг%, альбумины - 5О.5%, глобулины - 49,5%, фибриноген-25Омг, т.е. все показатели в пределах нормьь
Содержание жирных кислот в сыворотке крови следующее (в относительных еш1ницах к стандарту): пальмитиновая 298, стеариновая - 94, олеиновая 275, линолевая - 117, арахидоновая 27,0.
По сравнению с нормой заметно увеличипось содержание миристиноъой кислоты (более, чем на 50%), олеиновой (почти в 2 раза), уменьшилась пентадекановая и стеариновая кислоты. Таким образом, ре льтаты опредепения жирных кислот сыворотки крови расходились с данными других биохимических исследований и могли указывать на развитие атеросклеротического лрсщесса.
С целью уточнения диагноза у боль- . ного доттолнительно исследовали содержание жирных кислот в суточной моче по предлагаемому сйособу. В табл. 2 приведены результаты анализа, а также нормальные показатели для мужчин старше 4О пет.
Таблица 2 Примечание: содержание кислот дано в относительных единицах к стандарту - раствору гептодекановой кислоты в метаноле. Из таблицы видно, что у больного зна штепьно повышено выделение стеариновой (в 3,5 раза), олеиновой (на 2ОО%). Спектр жирных кислот в моче больного указал на изменения, характерные для
атеросклерошческой коронарной недостаточностн. Поставленный диагноз подтвердился дальнейшим течением заболевания.
Таким образом, дополнительные исследования жирных кислот в моче дали возможность выявить у больного атеросклеротимеский коронаросклероз, хотя известные показатели белкового и липидного обмена в пределах нормы.
Пример 2. Больной Ч., 1940 год рождения поступил с диагнозом вегетососудистой дистонии кардиотонического типа.
Показатели липидно-белкового обмена в пределах нормы: общий холестерин 2О2 мг%, общие липиды 650 мг%, липопротеиды 30%, липопротеиды - 70%. Артериащ ное давление в пределах нормы. Содержание жирных кислот в сыворотке крови также без отклонений, указываюишх на развитие атеросклероза.
Для уточнения диагноза дополнительно исследовали спектр жирных кислот в суточной моче. Результаты представлены в табл. 3.
Таблица 3 Из таблицы М1ДНО, что у больного содержание жирных кислот в моче характерно для вегетососудистой дистокии:сслержание стеариновой и опеиновой кислот близки к норме. Предлагаемым способом обсгеедовано 50 человек, страдающих вегетососудастой дистонией, и 268 - атеросклеротнческой коронарной недостаточностью. При атеросклеротической коронарнсЛ недостаточности в моче увеличивается содержание стеариновой кислоты, в среднем на 95,311,4%, олеиновой - на 116,7+ 2,1% при вегетососудистой коронарной недостаточности содержание этих кислот близко к норме (разница статистически недостоверна). Предлагаемый способ позволяет повысить точность дифференциальной диагностики атеросклеротической и вегетососудистой коронарной недостаточности на 8%: диагноз, поставленный известным способом, подтвердился в 9О,8% спучаев, пред лагаемым способом - в 98% случаев. Кроме того, предлагаемый способ дает более полную картину нарушений пипид- ного обмена, позволяет судить о потере тех или иных кислот, о повышенном потреблении их организмом, о стабильности или лабильности их, что позволяет сделать правильный выбор лечебно-профилактических мероприятий, провести ко личественный учет изменений функции сердечно-сосудистой системы, диасностировать ранние проявления атеросклероза и в тех случаях, когда известные показатели белковолипидного обмена остают- ся в пределах нормы; способ безболезнен, прост, надежен, непродолжителен, во времени; не требует для своего осуществления редких и дорогих ре&ктивов. Все это свидетельствует о возможное ти широкого использования предлагаемого способа для выявления больных атерю- склеротическим корюнархэкардиосклерозом и вегетососудистой дистонией. ормула изобретения; Способ дифференциальной диагностики атеросклеротической и вегетососудистой коронарной недостаточности путем определения жирных кислот в биологической жидкости пациента, отличаюшийс я тем, что, с целью повышения точности диагностики, в моче определяют содержание олеиновой и стеариновой кислот, и по увеличению их относительно нормы диагностируют атеросклерютическую корюнарную недостаточность, а при содержании их, близком к норме, диагностируют вегетососудистую коронарную недостаточность, Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Акимова Е. К., Аствацатурьян А. Т. и Жаров Л. В. Липиды и жирные кислоты в норме и при ряде патологических состояний. М., Медицина , 1975, с. 237259.
