Способ получения фосфатидилхолинов Советский патент 1982 года по МПК A61K35/30 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФОСФАТИДИЛХОЛИНОВ

Изобретение относится к .химии природных соединений и касается технологии производства фосфолипидов.

Известен способ получения фосфатидилхолинов из спинного и головного мозга крупного рогатого скота и свиней, включающий измельчение исходного сырья,его обезвоживание последовательную экстракцию ацето-. ..ном и этанолом, последующую очистку полученного экстракта и выделение целевого продукта ГП.

Однако известный способ не обеспечивает выделений продукта с достаточно высоким выходом (.20%) и чистотой.

Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта и его чистоты.

Поставленная- цель достигается тем, что в способа получения фосфа- . тидилхолинов из спинного и головного мозга крупного рогатого скота и свиней, включающем измельчение исходного сырья, его обезвоживание, последовательную экстракцию ацетоном и этанолом, последующую очистку полученного экстракта и выделение целевого продукта, отличие состоит в том, что обезпоживание сырья осук ествля от методом лиофильной сушки при t от О до 50°С, а очистку полученного экстракта проводят поэтапной кристаллизацией.при температуре от -20 до 0°С с последующей хроматографией на колонке с окисью алюминия.

Пример. Измельченный спин10ной мозг крупного рогатого скота (10 кг) в виде пасты намазывают на протвини слоем 10-12 см, замораживают и затем лиофильно высушивают при температуре от -15 до -20°С и давлении 0,1 мм рт. ст. Выход обезвожен15ного мозга 3,3 КГ} содержание влаги 1%.

В прюизводственных условиях сушка 1«ззга может быть проведена в суб 2Q лимационных установках различных

типов при температуре от О до .

К 100,00 г лиофильно высушенного .мозга добавляют 300 мл ацетона. Реакционную массу перемешивают при

20-25 С в течение часа. Ацетоновый

25 экстракт отфильтровывают. К остатку приливают 250 мл ацетона. Реакционную массу перемешивают при 2025 С в течение часа. Таких экстракций проводят 5. Из объединенного

0 :экстракта после отгонки растворителя в вакууме (.10 мм и двухкратной перекристаллизации из этанола выход холестерина 13,96 г (13,9б%)от сухого веса мозга). Жмых после извлечения холестерина сушат в вакууме (1 мм), получают 75,4 г (75,4% от сухого веса мозгаJ. Жмых 50,0 г экстрагируют 150 мл 96%-ного этанола в течение часа при 50°С. Экстракт отфильтровывают. Таких экстракций проводят четыре, объединенные экстракты охлаждают до 20°С к. выдерживают при этой температуре в течение 10 ч. Выпавший в осадок концентрат, сфинголипидов отфильтровывают и высушивают в вакууме (1 мм) Выход концентрата сфигнолипидов 10,90 г (21,8% от веса жмыха,16,4% от сухого веса мозга), ссЗдержание основного вещества 81,.0%, в том числе це ре брони до в 73,2%,сульфатидов 7,8%. Маточный-раствор охлаждают до 0°С-и выдерживают при этой температуре 10 ч. Осадок отфильтровывают и высушивают в вакууме (1 мм). Выход концентрата фосфатидилэтанол аминов 5,53 г (lljl от веса жмыха, 8,4% от сухого веса мозга), содержание основного вещества 80,5%, Изматочнрго раствора удаляют этанол в вакуул (10 мм ). Остаток растворяют в 600 мл смеси дихлорэтанэтанол, 95:5. Раствор перемешивают с 200 г окиси алюминия Ш степени активности по Брокману в течение часа и декантируют. К адсорбенту приливают 600 мл дихлорэтан-этанол, 95:5, перемешивают в течение часа. Эту процедуру повторяют 4 раза. Объединенный раствор перемешивают b течение часа со свежей порцией окиси алюминия (.200 г), фильтруют. Адсорбент протаивают этанолом 3 раза по 600мл. Раствор декантируют, добавляют окись алюминия ..после второй обработки, перемешивают 15 мин. После де кантации раствора адсорбент перемешивают с 300 мл этанола и фильтруют Все спиртовые растворы объединяют, этанол отгоняют в вакууме (Ю мм) , В.ыход фосфатидилхолинов 2,& г 5,8% от веса жмыха, 4,4% от сухого веса мозга), содержание основного вещества 92,5%, перекисное число 0,02.

I ..,

П р и м е р ,2, Измельченный с

помощью мясорубки парной или дефростированный головной мозг крупного рогатого скота (3,0 кг) лиофильно высушивают при температуре от -10°С до -15°С и давлении 0,1 мм рт.ст.Выход обезвоженного мозга 0,9 кг; содержание воды 5,2%. Лиофильно высушенный мозг (500,0 г) перемешивают с 1500 мл ацетона в. течение 1 ч при 18-20°С. Таких экстракций проводят пять. Объединенный экстрак

упаривают в вакууме досуха, остаток дважды перекристаллизовывают из 95%-ного этанола, получают 43,3 г холестерина (9,1%от сухого веса мозга, 86,0% от содержания холестерина в головном мозге). Жмых после извлечения холестерийа сушат в вакууме (1 мм рт. ст.) , получают 393,0 г (83,2% от сухого веса мозга) материала,50,0 г которого экст0 рагируют 300 мл 96%-ного этанола в течение 1 ч при 50°С. Экстракт фильтруют через стеклянный пористый фильтр № 3 способом обратного фильтрования. . Твердой остаток еще трижды

5 экстрагируют указанным, методом. Все полученные экстракты объединяют и выдерживают 10 ч при 20°С. Выпавший осадок, представляющий собой концентрат сфинголипидов, отфильтроQ вывают в вакуумном эксикаторе над едким кали до постоянного веса, Вы,ход концентрата сфинголипидов 8,3 г 1(.1б,6% от веса жмыха, 13,8% от сухого веса мозга), содержание основс ного вещества 82,3%, Маточный раствор выдерживают 12 ч при 0°С, осадок отфильтровывают на стеклянном фильтре t 3 и сушат в вакуумном эксикаторе над едким кали, получают 4,2 г концентрата фосфатидилэтанол- ,

аминов (8,3% от веса жмыха, 6,3% от сухого веса головного мозга), содержание ОСНОВНОГО вещества 79,9%, Фильтрат упаривают в вакууме (10 мм) досуха, остаток растворяют в 200 мп

5 смеси хлористый метил-этанол (95:5 по объему), раствор помещают в хроматографическую колонку (50x4 см), заполненную 500.г окиси алюминия (не.йтральная, активность П ) в той

0 же смеси растворителей. Колонку промывают последовательно 1200 мл указанной смеси растворителей и 2000 мл этанола. После упаривания спиртового алюата в вакууме полу5 чают 4,9 г концентрата фосфатидилхолинов (9,8% от веса жмыха, 7,8% от сухого веса мозга ), содержание ocHOBHOiro вещества 91,9%, перекисное число 0,01).

По аналогичным методикам получают концентраты фосфатидилхолинов из спинного и головного мозга свиней.

Таким образом, по сравнению с известным способом содержание фосфатидилхолинов в целевом продукте увеличивается с 17-20% до 90-94%. Уменьшается содержание токсичных и канцерогенных перекисей (перекисное число не выше 0,03), Предлагаемый способ представляет собой комплексную технологическую схему выделения органопрепаратов из нервных тканей сельскохозяйственных

животных и позволяет с достаточно

высокими выходами получать наряду с фосфатидилхолинами выход 4,34,5% от сухого веса мозга с достаточно высокими выходами получать и 98%-ный холестерин выход(13,313,8%), 78,81%-ный концентрат сфинголипидов выход(8,6-8,9%;, 80 2%-ньай«концентрат фосфатидилэтанЬламинов (выход 5,9-6,2% и белковый гидролиэат, содержащий до 50% незаменимых аминокислот (выход 1718%),

Формула изобретения

Способ получения фосфатидилхолинов из спинного ti головного мозга крупного рогатого скота и свиней, включающий измельчение исходного сырья, его обезвоживание, последонательную экстракцию ацетоном иi

этанолом, последующую очистку полученного экстракта и выделение целевого продукта, отличающийся тем, что,- с целью повыгиения выхода целевого продукта и его чистоты, обезвоживгшие сырья осуществляют методом лиофильной сушки при t от О до 50°С, а очистку полученного экстракта проводят

0 поэтапной кристаллизацией, при температуре от -20 до 0°С с последующей хроматографией на колонке с окисью aлю линия.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

5

0