Способ дезинтеграции микроорганизмов Советский патент 1982 года по МПК C12N1/00 

(54) СПОСОБ ДЕЗИНТЕГРАЦИИ МИКРООРГАНИЗМОВ

1

Изобретение относится к микробиологи.и и охране окружгиощей среды, в частности к способам дезинтеграции микроорганизмов.

По основному авт. св. № 825626 известен способ дезинтеграции микроорганизмов, предусматривающий приготовление суспензии микроорганизмов и ее обработку электрическим полем в присутствии анион- и катионобменных смол или их смесей 1.

Недостатком данного способа является то, что процесс ведут с использованием дистиллированной воды) в результате чего после обработки микроорганизмов электрическим полем в дезинтеграте .создаются физиологические условия реакции среды (рН 4,76,6). В этих условиях интенсив ио работгиот протеолитические ферменты, имеющиеся в любой микробной клетке и освобождающиеся из неё при обработке по известному собу, что приводит к энзиматйческому разложению белков, в том числе и ферментов, разрушающих гексаметилендиамин (ГМД). Это не дает возможности получить из микроорганизмов-деструкторов ГМД ферментный препарат с высокой активностью разрушения этого соединения. Кроме того, обработку

электрическим полем осуществляют в присутствии дорогостоящих и дефицитных ионобменных смол

Цель изобретения - увеличение активности извлекаемого из микробных клеток ферментного препарата, разрушающего гексаметилендиамин, а также удешевление способа.

10

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу дезинтеграции микроорганизмов по авт,,св. № 825626 обработку биомассы электрическим полем осуществляют в сточной воде, со15 Держащей гексаметилендиамин при рН 912,при этом при обработке биомассы в электрическом поле используют обработанные ионообменные смолы.

Пример. 1г сырой биомассы микроорганизмов-деструкторов ГМД суспендируют в 5 мл сточной воды, содержащей ГМД в концентрации 3 г/л с рН 10. Суспензию помещают в стеклянную цилиндрическую ячейку диаметром 19 мм,высотой 65 мм,с двумя круглыми электродами диаметром 3 мм из нержавеющей стали, расположенными на максимальном расстоянии друг от друга. Ячейка предварительно запол2Q няется 15 г влажной смеси отработанных ионообменных смол АВ-17 и КУ-2, На электроды подают постоянное напряжение 25 В. Через 7 мин электриче кое поле отключают, дезинтеграт, отделяют от ибнобменных смол, а последмне дополнительно промывают 35 мл сточной воды. Часть полученного дезинтегрйта центрифугируют 10 мин при 6000 об/ми Определение ферментативной активности супернатанта отцентрифугированного дезинтеграта и деэинтеграта, не подвергнутого центрифугированию, про водят следующим образом. 1. мл супернатанта и дезинтеграта вносят в 100 МП сточной воды, содержащей ГМД в концентрации 3 г/л, и ин кубируют в течение 5 мин, при . По истечении периода инкубации определяют концентрацию ГМД в пробах известным методом с помощью реакции с 2,4-динитрохлорбензолом. Опыты показали, что после пя1 иминутнбго контакт-а исследуемых проб с реальной бточной водой, содержащей ГМД, концентрация последнего снизилась до 10 мг/л в случае инкубации с супернат нтом и до 5 мг/л - в случае инкубации с дезинтегратом, не по вергающемся центрифугированию (таблица) . i П р и м е р 2 (известный способ). 1 г сзырой биомассы NmKpoopraHH3MOBдеструкторов ГМД суспендируют в 5 мл дистиллированной воды и iпомещают в н полненную смесью обработанных смол йтеклянную цилиндрическую ячейку, ансшогичную примеру 1. Клетки разрушают аналогичным образом. После с5тделения полученного дезинтеграта от ионобменных I смол последние дополнительно промывают 3 мл дистиллированной воды. Затем определяют ферментативную, активность супернатанта и дезинтеграта: в 1 мл супернатанта и в 1 мл дезинтеграта добавляют по 1 мл сточной воды, содержащей ГМД в концентрации 3 г/л (т. образом, в пробах устанавливаются концентретий ГМД 1,5 г/л), и инкубируют в течение 5 мин. По истечении периода инкубации определяют остаточную концентрсщию ГМД в пробах. Опыты показали, что после пятиминутного контакта исследуемых проб со сточной водой, содержащем ГВД, концентрация последнего снизилась до 30 мг/л в случае инкубирования сточной воды с супернатантом и до 15 мг/л в случае инкубации с дезинтегратом, не подвергающимся центрифугированию. Таким образом, ферментный препарат, полученный по предлагаемому способу при обработке культуры в сточной воде с рН 9 11, обладает более высокой (в 6 и 15 раз) диструктивной активностью до отношению в ГМД в сравнении с ферментным препарате, полученным по известному способу при обработке суспензии микроорганизмов-деструкторов ГЩ в дистиллированной воде.- Зависимость активности ферментного препарата от способа разрушения биомассы представлена в таблице.

Формула .изpбpefeния способ дезинтеграции микроорганизмов по авт. св. № 825626, о т л и чающийся тем, что, с целью увеличения активности извлекабмого из микробных клеток Ферментного преЙарата, разрушающего гексаметилендиамин, а также удидевления способа, обработку биомассы электрическим.по-. 65 лем осуществляют в сточной воде, со59623016

держгицёй гексаметилендиамин при рН 9-Источники информации,

12, при этом при обработке биомассыпринятые во внимание при экспертизе в электрическом поле используют от-1. Авторское свидетельство СССР

работанные йонобменные скюлы. 825626, кл. С 12 К 1/00, 1979.