(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИРНОКИСЛОТНОГО СОСТАВА ЛИПИДСВ МИКГООРГАНИЗМОВ
1
Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу количественного определения жирнокислотного состава липидов микроорганизмов.
Известен способ количественного определения жирнокислотного состава липидов микроорганизмов, предусматривающий обработку биомассы при нагревании с последующим анализом реакционной смеси методом газовой хроматографии 1.
Обработку ведут методом сопиролиза, согласно которому биомассу обрабатывают раствором гидроокиси тетраметаноламмония и нагревают при температуре 120-140°С. Полученную реакционную смесь подвергают газохроматографическому анализу 2.
Недостатком известного способа явля ется невозможность количественного определения полиненасыщенных жирных кислот, что ограничивает способ определения жирнокислотного состава бактерий, которые их не содержат.
Цель изобретения - определение количества полиненасыщенных жирных кислот.
Указанная цель достигается тем, что согласно способу количественного определения жириокислотного состава липидов микроорганизмов, предусматривающему обработку биомассы при нагревании с последующим анализом реакционной .смеси методом газовой хроматографии предложено в биомассу добавлять последовательно ацетилхлоРИД и метанол, кипятить до удаления растюрителей, остаток обрабатывать гексаном и анализу подвергать гексановую вытяжку, при этом соотиощение биомасса:ацетилхлорид:метанол должно составлять 100: (50- -60): (180-220).
10
Способ позволяет определять жирнокислотный состав биомассы дрожжей и грибов, содержащих полиненасыщенные жирные кислоты.
/ Пример /., В колбочках объемом 3,5мл взвешивают 100 Ml- воздушно-сухой био15массы хлебопекарных дрожжей, обрабатывают ее 4,8 мг ацетилхлорида, а затем кипятят в 2,5 мл метанола. Температура песочной бани 80°С. После упаривания в колбочку добавляют 0,1 мл гексана. Один микролитр гексановой вытяжки вводят в хроматограф. Условия анализа: длина колонки 2 м, диаметр 3 мм, сорбент - хроматон NAWHMDS (фракция 0,125-0,160 мм) пропитанный диэтиленгликольсукцината. Температура термостата колонок 190°С, температура испарителя 220°С. Расход газа-носите 1я 40 . Детектор пламенноионизационный (ПИД). Расход водорода 40 , воздуха 400 . Спектр жирных KHCJioT липидов хлебопекарных дрожжей показывает преобладание кислот Ci6;o, Ci6:i, C)g-.i. Определены также полиненасыщениые жирные кислоты с двумя двойными связями С|а-.г в количестве 0,27% и 3,15% соответственно (фиг. 1). Пример 2. Проводят анализ жирнокислотного состава липидов пивных дрожжей. Анализ осуществляют согласно примеВ составе жирных кислот липидов пивных дрожжей значительно преобладает кислота С16.о- Определены также полиненасыщенные жирные кислоты С|й-.2 и Cig-.a в количестве 1,37% и 0,08% соответственно (фиг. 2) Пример 3. Определяют жирнокислотный состав липидов биомассы грибов рода Mucor, полученной при проведении микробиологического контроля зерен риса. Рис промывают водой и производят посев в чашках Петри на агаровых средах. Выросшую колонию осторожно собирают и взвешивают по 10 мг в колбочках объемом 3,5 мл. Затем биомассу обрабатывают 5,0 мг ацетилхлорида и кипятят в 20 мг (0,25 мл) метанола. Температ рй песочной бани 80°С. После упаривания в колбочку добавляют 0,1 мл гексана. Один микролитр гексановой вытяжки вводят в хроматограф. Условия хроматографирования аналогичны примеру 1. Определены полиненасыщенные жирные кислоты Qg-.z и .з в количестве 17,95% и 18,53% соответственно (фиг. 3). Пример 4. Объектом исследования была биомасса микроорганизма рода Candida, выращенного на углеводородах. В колбочках объемом 3,5 мл взвешивают по 300 мг влажной биомассы (влажность 66%), обрабатывают ее 60 мг ацетилхлорида и кипятят в 220 мг метанола. Температура песочной бани 80°С. После упаривания в колбочку добавляют 0,1 мл гексана. Один микролитр гексановой вытяжки вводят в хроматограф. Условия хроматографирования анализа аналогичны примеру 1. Определены полиненасыщенные жирные кислоты Ci6:2, Cie-. и Ci8-.j в количестве 0,43%, 21,69% и 8,97% соответственно (фиг. 4). Таким образом, предлагаемый способ количественного определения жирнокислотного состава липидов микроорганизмов позволяет определять количество полиненасыщенных жирных кислот, что делает возможным анализировать биомассу микроорганизмов различных родов. Формула изобретения Способ количественного определения жирнокислотного состава липидов микроорганизмов, предусматривающий обработку биомассы при нагревании с последующим анализом реакционной смеси методом газовой хроматографии, отличающийся тем, что с целью определения количества полиненасыщенных жирных кислот, в биомассу добавляют последовательно ацетилхлорид и метанол, кипятят до удаления растворителей, остаток обрабатывают гекса ном и анализу подвергают гексановую вытяжку, при этом соотношение биомасса:ацетилхлорид:метанол составляет 100:(50-60):(180-220). Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Андреев Л. В., Склифас А. П. О хемотаксономических аспектах липидного обмена бактерий. Сб. «Биохимия и биофизика микроорганизмов. Горький, изд-во ГГУ, 1977, с. 3.
