Способ идентификации лосося,кумжи и их гибридов Советский патент 1983 года по МПК A01K61/00 

Изобретение относится к рыбной npONttJuuieHнести, а именно к способам иденти кации лосося, кумжи и их гибридов, и может быть использовано для определения качественного сост ва и количественной оценки промысловых уловов лососей в Балтийском море отдельно по видам при искусственном воспроизводстве, включающем селекцию производителей рыб отдельно по виду лосось. (Salто sal и виду кумжа (Sal то trutta Z) c последукяцей выбраковкой межвидовых гибридов, а также при осуществлении контроля чистоты видов в возрастных группах молоди, выращиваемой на рыбоводных заводах. Известен способ идентификации лосося, кумжи и их гибридов, вклю ающий взятие у рыб образца скелетной мышцы, измельчение его в равном объеме трис НС1 буфера и центрифугирование в течение 1 ч для получения экстракта белков, электрофорез белков в крахмальном геле в течение 25 ч, после чего гель помещают на 4 ч в 7%-ную уксусную кислоту для коагуляции белков и их локализации, белки окрашивают путем.выдерживания геля в течение 15 мин в 7%-ной уксусной кислоте, содержащей 1% красителя Амидочерный 10В, затем избыток красителя удаляют из геля, промывая его несколькими объемами 7%-ной уксусной кислоты в течение 14-18 ч и получают на геле полосы окрашенных белков в виде спектров, которые сравнивают со стандартными спектрами видоспецифических белков скелетных мышц, на основании чего идентифицируют принадлежность исследованных рыб к определенному виду ij. Однако известный способ не требует больших затрат времени и не может быть использован при оценке показателей вылова лосбсей по видам поскольку Операция по иссечению образцов скелетных мышц нарушает целостность кожного покрова и, следовательно, снижает товарную ценность рыб из промысловых уловов, поступаю щих на предприятия рыбообрабатываюгчей промьтленности. Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности является способ идентификации лосося, кумжи и их гибридов, сущность которого со стоит в том, что у исследуемых рыб берут образец крови, образец центрифугируют и фильтруют для получения экстракта белков, проводят электрофорез полученного экстракта белков в полиакриламидном геле в течение 3 ч, затем гель инкубируют в течение ночи в слабом растворе индоксилацетата и получают электрофореграммы видеоспецифических белков и сопоставляют последние со стандартами 2. Этот способ также является длительным, что не позволяет использовать его в производственных условиях. Не может быть использован способ и при работе с молодью рыб, поскольку у последних очень сложно получить образец крови ввиду незначительных их размеров. Кроме того, известный способ недостаточно точен. Целью изобретения является ускорение процесса и повышение точности видовой идентификации, а также возможность проведения анализа различных возрастных групп рыб. Для достижения поставленной цели в способе идентификации лосося, кумжи и их гибридов, предусматривающем взятие у рыб образцов тканей, приготовление экстракта белков этих тканей, электрофорез экстракта белков в полнакриламидном геле, инкубирование геля, получение электрофореграмм видеоспецифических белков и сопоставление последних со стандартами, электрофорез экстракта белков i в полиакриламидном геле осуществляют в течение 30-40 мин, гель инкубируют в растворе 4-метилумбеллиферилацетата в течение 20-60 с, а получение электрофореграмм проводят. путем сканирования геля в ультрафиолетовом свете. Способ осуществляют следуквдим образом. У исследуемых рыб берут образец тканей мышц или внутреннего органа (скелетная мышца, мышца сердца, печень, мозг, кишечник. Образец обрабатывают 20%-ной сахарозой в процессе его измельчения, отстаивают измельченный образец для палучения экстракта белков данной ткани в течение 1-2 мин и проводят электрофорез в блоке полиакриламидного геля известным способом в течение 30-40 мин, затем гель помещают в 0,003%-ный раствор флюоресцирующего субстрата-4-метилумбеллиферилаЦетата для инкубации, которую осуществля ют в течение 20-60 с. После инкубации сканируют гель в проходящем или отраженном ультрафиолетовом, свете для получения электрофореграмм видеосцецифичного белка 4-метилумбеллиферилацетатэкстразы, которые сравнивают с известными стандартными электрофоретическими вариантами 4-метилумбеллиферилацетатэкстеразы лосося, кумжи и их гибридов. Пр и м е р. У исследуемых рыб получают образец ткани, например, кишечника весом 50 мг. Образец помещают в пробирку, приливают 3 объема (по весу образца 20%-ной сахарозы, раздавливают его стеклянной палочкой, отстаивают измельченный образец в теченме 1 мин, отсасывгцот надосадочную жидкость, содержащую белки данной ткани, и проводят элек трофорез в блоке полиакриламидного геля в течение 30 мин. После окончания электрофореза гель извлекают из электрофоретической камеры, помещают в 0,003%-ный раствор флюорес цирующего субстрата-4-метилумбеллиферилацетата (4МУО) на 30с и затем сканируют гель в проходящем или отр женном ультрафиолетовом свете. При сканировании в геле видны четкие флюоресцирующие электрофоретические варианты 4-11УФ-Эст в виде дискретных полос, которие сопоставляют с известными стандартными электрофоре тическими вариантами 4-МУФ-Эст лосося, кумжи и их гибридов. Результа ты видовой идентификации рыб регист рируют в.протоколе. В 1979 и 1980 г этим-способом были проанализированы промысловые уловы лососей из рек Ленинградской области и группы мололи, выращиваемой на рыбоводных заводах Латвийско ССР и Ленинградской области. Результаты видовой идентификации производителей и молоди лососей приведены в таблице. Результаты генетико-биохимического определения долей лосося, кумжи |и их гибридов в промысловых уловах и в группах заводской молоди (Латвийская ССР, Ленинградская обл). Использование предлагаемого способа генетико-биохимической идентификации лосося, кумжи и их гибридов в прогысловых уловах и в группах заводской молоди дает возможность осуществлять видовую идентификацию лососевых рыб в течение 1 ч, начиная с момента получения образца тканей для анализа, позволяет использовать для анализа наряду с кровью и скелетными мышцами другие виды тканей или органов рыб, что не нарушает их товарной ценности. Кроме того, предлагаемый способ может быть использован для качественной и количественной опенки по видам промысловых уловов лососей, поступающих на предприятия рыбообрабатывающей промышленности и на рыбоводные заводы, а также для осуществления в сжатые сроки эффективной селекции производителей, используемых в искусственном воспроизводстве запасов лосося и кумжи и для контроля чистоты видов в группах молоди, ;выращенной на рыбоводных заводгис.

СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ЛОСОСЯ, КУМХИ И ИХ ГИБРИДОВ, предусматриBaKKfift взятие у рыб образцов тканей, приготовление экстракта белков этих тканей, электрофорез экстракта белков в полиакриламидном геле, и нкубйрование геля, получение электрофорегра1«1« видеоспецифических белков и сопоставление последних со ста«дарта1Ф1, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью ускорения процесса и повышения точности видовой идентификации, а также возможности проведения анализа раз- личных возрастных групп р«б, элек-. трофорез экстракта белков в полиакриламидном геле осуществляют в течение 30-40 мин, гель инкубируют в растворе 4-метилумбеллиферилацетата в течение 20-60 с, а получение электрофореграмм проводят путем сканирования геля в ультрафиЬлетов я4 свете. СО О) 00 со о hd