Способ подтверждения аутентичности вареных колбасных изделий Российский патент 2019 года по МПК G01N33/68 G01N27/00 

Описание патента на изобретение RU2678090C1

Заявляемое техническое решение относится к области контроля качества вареных колбасных изделий по их протеомному профилю. Техническое решение может использоваться в пищевой и перерабатывающей промышленности, а также в системе технического контроля в научных, производственных, учебных и сертификационных лабораториях.

Известен способ идентификации белков в протеомных исследованиях с помощью технологии масс-спектрометрии MALDI TOF MS (Claydon, A.J., Grundy Н.Н., Charlton A.J., Romero M.R. Identification of novel peptides for horse meat speciation in highly processed foodstuffs // Food Add. Cont. Part A - Chem. Anal. Contr. Expos. Risk Assessm. 2015, 32(10): 1718-1729). Способ основан на идентификации белков и пептидов при получении одномерных электрофореграмм

Недостатком способа является подавление большинства анализируемых белков с потерей функциональной активности в следствии применения денатурирующих агентов, таких как додецил сульфат натрия или мочевины, которые используются при фракционировании белков методом одномерного электорофореза. В результате чего снижается достоверность аутентичности вареных колбасных изделий.

Известен метод двумерного электрофореза по О'Фарреллу для изучения белков скелетных мышц свиней и коров (Saisekhar Y., Reddy P.M. Use of Troponin for Species Identification of Cattle and Buffalo Meats // J. Food Sci. Technol., 1995, vol. 32, no. 1, pp. 68-70). Метод основан на получении общего профиля всех белков. Однако данными методами невозможно идентифицировать аутентичность белкового продукта по общему пулу белков происхождения.

Известен метод целенаправленного изучения белков теплового шока в мышцах свиней и коров методом двумерного электрофореза. Метод основан на определении постоянной и индуцибельной изоформе Hsp70 в скелетных мышцах свиней, (Van Laack R.L., Faustman С., Sebranek J.G.. Pork quality and the expression of stress protein Hsp70 in swine // J. Anim. Sci. 1993. Vol. 71. P. 2958-2964). Недостатком указанного способа является невозможность полной аутентичной идентификации по одному маркерному белку сложного белкового объекта, подвергнутого тепловой обработке.

Известен метод определения протеома длиннейшей мышцы спины свиней (m. longissimus lumborum) (Terlouw С.Pig Longissimus lumborum proteome: Part II: Relationships between protein content and meat quality // Meat Sci. 2008. Vol. 80(4). P. 982-996), суммарно включавший 220 белковых фракций. Метод основан на получении общего профиля всех белков и позволяет устанавливать существование тендерных различий в белковых профилях и давать оценку изменения белкового состава, оказывающего влияние на качество мяса. Однако данный метод не позволяет осуществлять однозначную идентификацию гомогенной смеси субстратов на основе животного сырья, подвергнутой тепловой обработке.

Известны также методы видовой идентификации мяса и мясной продукции методами жидкостной хроматографии, масс-спектроскопии, ИФА, ПЦР, в том числе, идентификация тканеспецифичных белков соединительной ткани комплексным методом, объединяющим пептидный фингерпринт и жидкостную хроматографию. Эти методы устанавливают ряд видоспецифичных белков, сохраняющихся в конечных мясных продуктах (пептиды HSP27, H-FABP, АТФ-синтаза, субъединица 1-цитохромного bc-комплекса), что дает возможность использования указанных белков в качестве потенциальных биомаркеров. Недостатком данных способов является перекрестная совпадающая идентификация разных филогенетических видов сырья, по достаточно узкому набору выявленных биомаркеров, что делает невозможным однозначную видоспецифическую идентификацию.

Е. REED с соавторами (США) в качестве маркера иммунного статуса предлагают сравнительный анализ фрагмента 5 килодальтон (kDa) комплемента С4 анафилотоксина (С4А) опытного и контрольного образцов животных тканей, при этом в качестве маркерных также предлагаются Аполипопротеин А1 и/или терминальный фрагмент альфа-1-анти-химотрипсина С (AACT) (United States Patent Application №2017 0030928 A1). Недостатком предлагаемого решения представляется ограниченность возможностей измерения - способ пригоден только для исследований нативных тканей-биоптатов.

Наиболее близким по совокупности существенных признаков к заявляемому способу техническим решением, принимаемым за прототип является способ идентификации меченых белков (Пат. US 20050233399 А1). В данном способе используются аффинно-меченые реакционно-способные реагенты, которые позволяют селективно выделять пептидные фрагменты или продукты реакции с данным белком (например, продуктами ферментативной реакции) из сложных смесей). При этом методе фрагмент белка одного или нескольких скелетных меченых белков или аффинно-меченых фрагментов белка секвенируют с помощью тандемной масс-спектрометрии для идентификации белка или фрагмента белка. Недостатками прототипа являются получение ложного результата вследствие перекрестного наложения белков, высокая стоимость и трудоемкость метода.

Задачей, на решение которой направлено заявляемое техническое решение, является способ подтверждения аутентичности вареных колбасных изделий, обеспечивающий высокую достоверность аутентификации, применимость для выявления фальсификации вареных колбасных изделий, снижение трудоемкости и стоимости исследований.

Решение данной задачи, с достижением указанного технического результата обеспечивается тем, что из полиакриламидного геля извлекаются маркерные белки, с последующей масс-спектрометрической идентификацией, на: Тропомиозин альфа 1 (свинина), Тропомиозин альфа 1 (говядина), Миозиновая легкая цепь (говядина), Белок подобный легкой цепи миозина 3 (свинина), фосфорилируемые легкие цепи миозина MLC1f (свинина), фосфорилируемые легкие цепи миозина MYL1 (говядина), Мышечная енолаза (свинина), Мышечная енолаза (говядина), М-цепь креатинфосфокиназы (свинина), М-цепь креатинфосфокиназы (говядина), Фруктозобисфосфат альдолаза А (свинина) Гомолог говядины, Фруктозобисфосфат альдолаза А (говядина), Глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназа (свинина), Глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназа (говядина), Миоглобин (свинина), Миоглобин (говядина); полученная двумерная электрофореграмма геля сравнивается с двумерной электрофореграммой геля эталонного образца.

Выбор маркерных белков Тропомиозин альфа 1 (свинина), Тропомиозин альфа 1 (говядина), Миозиновая легкая цепь (говядина), Белок подобный легкой цепи миозина 3 (свинина), фосфорилируемые легкие цепи миозина MKC1f (свинина), фосфорилируемые легкие цепи миозина MYL1 (говядина), Мышечная енолаза (свинина), Мышечная енолаза (говядина), М-цепь креатинфосфокиназы (свинина), М-цепь креатинфосфокиназы (говядина), Фруктозобисфосфат альдолаза А (свинина) Гомолог говядины, Фруктозобисфосфат альдолаза А (говядина), Глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназа (свинина), Глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназа (говядина), Миоглобин (свинина), Миоглобин (говядина) объясняется их стабильностью в технологии приготовления вареных колбасных изделий. Использование иного состава маркерных белков, согласно научным исследованиям, не обеспечивало достижение технического результата, прежде в обеспечении точности аутентификации.

Заявляемый способ подтверждения аутентичности вареных колбасных изделий по их протеомному профилю иллюстрируется схемой определения аутентичности вареных колбасных изделий на фиг. 1. Вареное колбасное изделие подвергают двумерному электрофорезу в полиакриламидном геле. Извлекаются маркерные белки с последующей масс-спектрометрической идентификациейя, с использованием например автоматической системы распознавания белков по международной автоматической базе данных. Идентификация осуществляется в отношении следующих маркерных белков: Тропомиозин альфа 1 (свинина), Тропомиозин альфа 1 (говядина), Миозиновая легкая цепь (говядина), Белок подобный легкой цепи миозина 3 (свинина), фосфорилируемые легкие цепи миозина MLC1f (свинина), фосфорилируемые легкие цепи миозина MYL1 (говядина), Мышечная енолаза (свинина), Мышечная енолаза (говядина), М-цепь креатинфосфокиназы (свинина), М-цепь креатинфосфокиназы (говядина), Фруктозобисфосфат альдолаза А (свинина) Гомолог говядины, Фруктозобисфосфат альдолаза А (говядина), Глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназа (свинина), Глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназа (говядина), Миоглобин (свинина), Миоглобин (говядина). Затем двумерная электрофореграмма геля исследуемого образца сравнивается с эталонной электрофореграммой геля вареного колбасного изделия.

На Фиг. 2. (а, б, в) демонстрируется подтверждение применимости выбранного метода для подтверждения аутентичности вареных колбасных изделий по протеомному профилю. Так на двумерной электрофореграмме (а) образца колбасы вареной подтверждается присутствие только свинины и говядины в соответствии с рецептурой; на 2-ДЭ (б и в) обнаруживаются также не заявленные компоненты - немышечные белки (соевые) и белок курицы, что отмечено пунктирными прямоугольниками. При этом, присутствие дополнительных белков дает менее интенсивное окрашивание других белков в маркерной группе, означающее весомое количество не заявленных белков в образце при неизменном общем содержании белка в пробе.

Похожие патенты RU2678090C1

название год авторы номер документа
СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БЕЗНИТРИТНЫХ КОЛБАСНЫХ ИЗДЕЛИЙ 2005
  • Векшин Николай Лазаревич
RU2311047C2
СПОСОБЫ И КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ПРЕДМЕТОВ ПОТРЕБЛЕНИЯ 2012
  • Браун Патрик О'Рейлли
  • Врльиц Мария
  • Варадан Ранджани
  • Айзен Майкл
  • Соломатин Сергей
RU2653751C2
СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА ВАРЕНЫХ КОЛБАСНЫХ ИЗДЕЛИЙ 1992
  • Веретова Т.В.
  • Спиркин А.Н.
  • Мотовилина А.А.
  • Вояжин М.П.
RU2037299C1
Копирующие мясо пищевые продукты 2012
  • Браун, Патрик О`Рейлли
  • Врльиц, Мария
  • Варадан, Ранджани
  • Айзен, Майкл
  • Соломатин, Сергей
RU2772991C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЗАМЕСТИТЕЛЯ ЖИРА, ЗАМЕСТИТЕЛЬ ЖИРА (ВАРИАНТЫ) И СОДЕРЖАЩИЙ ЕГО МЯСОПРОДУКТ (ВАРИАНТЫ) 2005
  • Торнберг Эва
  • Шехольм Ингегерд
RU2359476C2
ВАРЕНЫЕ КОЛБАСНЫЕ ИЗДЕЛИЯ ДЛЯ ДЕТЕЙ СТАРШЕГО ШКОЛЬНОГО ВОЗРАСТА 2007
  • Герасимова Наталия Юрьевна
  • Белокопытов Андрей Иванович
  • Воронцов Евгений Сергеевич
  • Соловьев Дмитрий Геннадьевич
  • Перевалов Сергей Сергеевич
  • Бучукури Марина Михайловна
RU2348201C1
Способ производства мясного продукта функционального питания 2023
  • Пьяникова Эльвира Анатольевна
  • Заикина Мария Анатольевна
  • Ковалева Анна Евгеньевна
  • Рязанцева Анастасия Сергеевна
  • Дорохина Ксения Андреевна
RU2817888C1
Ветчина с белково-жировой эмульсией 2021
  • Божкова Светлана Евгеньевна
  • Серкова Анастасия Евгеньевна
  • Зворыгина Анна Сергеевна
  • Серова Ольга Петровна
  • Скачков Дмитрий Александрович
  • Короткова Алина Анатольевна
RU2776046C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВАРЕНОЙ ФАРШИРОВАННОЙ КОЛБАСЫ ВЫСШЕГО СОРТА 2005
  • Васильев Михаил Алексеевич
RU2306708C2
Колбаса вареная функциональная обогащенная 2022
  • Борисенко Александр Алексеевич
  • Трунова Екатерина Дмитриевна
  • Гресева Екатерина Геннадьевна
  • Борисенко Алексей Алексеевич
  • Борисенко Людмила Александровна
  • Храмцов Андрей Георгиевич
  • Анисимов Георгий Сергеевич
  • Абадлаева Эллина Эльдаровна
  • Разинькова Виктория Геннадьевна
RU2797405C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 678 090 C1

Реферат патента 2019 года Способ подтверждения аутентичности вареных колбасных изделий

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для контроля аутентичности и качества вареных колбасных изделий. Для этого проводят двумерный электрофорез в полиакриламидном геле исследуемого изделия и эталонного образца с последующим сравнением маркерных белков в полученных электрофореграммах, которые идентифицируют масс-спектрометрически после извлечения из полиакриламидного геля. В качестве маркерных белков выбирают Тропомиозин альфа 1 (свинина), Тропомиозин альфа 1 (говядина), Миозиновую легкую цепь (говядина), Белок, подобный легкой цепи миозина 3 (свинина), фосфорилируемые легкие цепи миозина MKC1f (свинина), фосфорилируемые легкие цепи миозина MYL1 (говядина), Мышечную енолазу (свинина), Мышечную енолазу (говядина), М-цепь креатинфосфокиназы (свинина), М-цепь креатинфосфокиназы (говядина), Фруктозобисфосфат альдолазу А (свинина) Гомолог говядины, Фруктозобисфосфат альдолазу А (говядина), Глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназу (свинина), Глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназу (говядина), Миоглобин (свинина), Миоглобин (говядина). Изобретение обеспечивает высокую достоверность определения аутентичности вареных колбасных изделий. 2 ил.

Формула изобретения RU 2 678 090 C1

Способ подтверждения аутентичности вареных колбасных изделий, включающий двумерный электрофорез в полиакриламидном геле исследуемого изделия и эталонного образца с последующим сравнением маркерных белков в полученных электрофореграммах, которые идентифицируют масс-спектрометрически после извлечения из полиакриламидного геля, отличающийся тем, что в качестве маркерных белков выбирают Тропомиозин альфа 1 (свинина), Тропомиозин альфа 1 (говядина), Миозиновую легкую цепь (говядина), Белок, подобный легкой цепи миозина 3 (свинина), фосфорилируемые легкие цепи миозина MKC1f (свинина), фосфорилируемые легкие цепи миозина MYL1 (говядина), Мышечную енолазу (свинина), Мышечную енолазу (говядина), М-цепь креатинфосфокиназы (свинина), М-цепь креатинфосфокиназы (говядина), Фруктозобисфосфат альдолазу А (свинина) Гомолог говядины, Фруктозобисфосфат альдолазу А (говядина), Глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназу (свинина), Глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназу (говядина), Миоглобин (свинина), Миоглобин (говядина).

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2019 года RU2678090C1

US 2005233399 A1, 20.20.2005
Способ заряда аккумуляторной батареи и устройство для его осуществления 1983
  • Козелков Леонид Васильевич
  • Пугачев Емельян Васильевич
  • Розеншток Борис Яковлевич
  • Теньковцев Виталий Владимирович
  • Бариков Вадим Григорьевич
  • Иванов Владимир Георгиевич
  • Хохлов Владимир Николаевич
SU1129675A1
НАБОР ОЛИГОНУКЛЕОТИДНЫХ ПРАЙМЕРОВ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ ДНК ЖИВОТНЫХ В КОРМАХ И МЯСНЫХ ПРОДУКТАХ 2011
  • Прусакова Ольга Вадимовна
  • Глухова Ксения Алексеевна
  • Белецкий Игорь Петрович
RU2560579C2
Очаг для массовой варки пищи, выпечки хлеба и кипячения воды 1921
  • Богач Б.И.
SU4A1
Воздушная нефтяная форсунка 1937
  • Карабин А.И.
SU52196A1
Технические условия, 01.01.2013, найдено 23.08.2018 в Интернете [on-line] на сайте http://docs.cntd.ru/document/gost-r-52196-2011
ГОРБУШИНА Л.Ф
Сравнительная характеристика ассортимента, потребительских свойств и показателей безопасности вареных колбас, поступающих на реализацию в магазин от изготовителей, дипломная работа, Челябинск, 2014, стр
Способ гальванического снятия позолоты с серебряных изделий без заметного изменения их формы 1923
  • Бердников М.И.
SU12A1

RU 2 678 090 C1

Авторы

Ковалев Леонид Иванович

Ковалева Марина Анатольевна

Вострикова Наталья Леонидовна

Чернуха Ирина Михайловна

Даты

2019-01-23Публикация

2018-05-28Подача