Способ определения ДНК в клетках на цитологическом препарате Советский патент 1983 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

Изобретение относится к медицине и- касается приготовления цитологичес.ких препаратов изолированных клетс к изсоскобов тканевых блоков.

Известен способ определения ДНК в клетках на цитологическом препарате включающий их фиксацию, заключение в,парафин и окрашивание реактивом Фельгена 1.

Однако известный способ не позволяет точно определить ДНК в клетках.

Цель изобретения - повышение точности способа при использовании длительно хранящегося материгша.

Эта цель достигается тем, чТо при осуществлении способа определения ДНК в клетках на цитологическом препарате , включающего их фиксацию, заключение в парафин и окрашивание реактивом Фельгана, из парафиновых блоков готовят соскЬбы клеток, далее их депарафинируют, центрифугируют и готовят мазки из клеточной массы.

Способ осуществляют следующим образом.

Соскоб готовят, например с поверхности парафинового тканевого блока, предварительно смоченным в ксилоле инструментом, лучше всего глазным скальпелем. Для удаления парафина

материал соскоба псшещают в пробирку с ксилолом (три порция), где интенсивно размешивают тонкой стеклянной или металлической палочкой. После осаждения материала соскоба тонкой пипеткой осторожнЬ отсасывают ксилол и добавляют абсолютный спирт, вновь взбалоывают и так последовательно проводят через 96, 70° спирты и

10 дистиллированную воду. Ксилол, cniipты и воду добавляют в количестве, превышающем осадок тканевого соскоба- в три раза. Из последней манипуляции с дистилированной водой воду 1 удаляют не Ёсю, а.часть ее оставляют на изготовление мазков из осадка-, обработанного соскоба тканевых бло- . ков.

Подсушенные мазки окрашивают по

20 Фельгену (при необходимости другими методами ), заключают в бальзам и покрывают покровными стеклами. В препаратах обнаруживаются в основном изолированные клетки, а иногда кош125лексы клеток или даже мелкие кусочки тканей.

Наличие свободных клеток и коктлексов их дает основание считать данные препараты цитологическими,

30 хотя при изготовлении соскоба часть клеток травмируется, остается достаточное количество их, чтобы судить о структуре органа или ткани, а также для количественного определения содержания ДНК тех или иных компонен тов в цитоплазме и ядрах клеток. Кроме того, данные препараты можно подвергнуть гистохимическомуf энзимохимическому и люминесцентному исследованиям. Пример 1. Больная Н., 56 лет поступила в клинику. Клинический диагноз: Киста правого яичника. По содер жанию ДНК цитологического препарата, приготовленного предлагаетлым способом, диагноз должен быть как злокачественная цилиоэпителиальная кистома яичника. Больная поступила в клинику через 6 месяцев с обширными метастазами опухоли в сальник .и внутренние органы. П р и м в р 2. Больная В., 24 года поступила в клинику. Клинический диаг ноз: Пролиферирующая киста правого яичника. По содержанию ДНК цитологического препарата диагноз должен быть как злокачественная цилиоэпителигшьная кистома яичника. Через 8,5 месяцев у больной обнаружен рецидив опухоли и несмотря на химиотерапию имелись обширные метастизированные опухо ли. В обоих случаях по содержанию ДНК гистологических срезов имелись незначительные отклонения от доброкачественной опухоли. . Была изучена группа больных из 20 человек с доброкачественными кистами Я ичников и 20 человек со злокачественными кистами яичников. При выявлении ДНК (препараты получены предложенным способом) отмечено резкое увеличение содержания ДНК в группе со злокачественными кистами яичников по сравнению с доброкачественными кистам I яичников статически достоверное. В таблице представлено содержание, дак в доброкачественных и злокачественных кистах яичников в цитологических препаратах Среднее содержание Группы ДНК (относительбольныхная единица) с доброкачествен- ной опухолью 7,36 0,20 (20 случаев) со злокачественной опухолью (20 случаев) 16,61± 0,61 Как видно из таблицы, предложенным способом удается более точно определить степень злокачественности серозных кист яичников. Предложенный способ позволяет повысить точность, а также использовать архивный материал, проводить определение ДНК в самыхразличных тканях и органах, полученных не только при операциях, но }я в эксперименте на животных. Формула изобретения Способ определения ДНК в клетках на цитологическом препарате, включающий их фиксацию, заключение в парафин и окрашивание реактивом Фельгена, отличающий ся тем, что, с целью повь1шения точности способа при использовании длительно хранящегося материала, из парафиновых блоков го товят соскобы клеток, далее их депарафинируют, центрифугируют и готовят мазки из клеточной массы. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Меркулов Г.Л. Курс патогистологической техники. М. , Ь1едицина , 1969, с. 73.