СПОСОБ ОЦЕНКИ РЕЗИСТИВНОСТИ ОРГАНИЗМА Российский патент 1994 года по МПК G01N33/535 

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано в качестве скринингового теста при диспансеризации населения для выявления групп риска и выбора тактики лечения заболеваний различной этиологии, а также служить основой для индексации стоимости страхового полиса.

Известен способ оценки сопротивляемости организма по активности гуморальных факторов противомикробной защиты [1] . Однако информативность метода ограничена параметрами выявляемой активности (высокая, средняя, низкая), что связано с широким диапазоном колебаний показателей у здоровых людей. Методы исследования факторов резистентности трудоемкие, в частности определение иммуноглобулинов по Манчини проводится в течение 24 ч.

Известен способ иммунодиагностики по содержанию IgG и лимфоцитов. Способ малоинформативен, т. к. недостаточно полно отражает нарушения в системе резистентности организма [2] .

Известен способ оценки резистентности по уровню циркулирующих иммунокомплексов и титрам антител к бактериям. Способ не надежен, т. к. информативность и точность зависят от невоспроизводимых и трудоемких бактериологических исследований [3] .

Известен способ оценки иммунологической реактивности по содержанию отдельных субклассов IgG к Salmonella minnesota R-595 (Re-мутант) у здоровых и больных [4] .

Недостаточная информативность способа обусловлена низкой чувствительностью разработанного авторами метода определения IgG-антител с помощью моноклональных антител к IgG-человека, который позволяет выявлять иммуноглобулины лишь у 35,0% доноров.

Наиболее близким является способ, описанный Barclay и др. [5] . Авторы с помощью разработанного метода, основанного на использовании поликлональных антител к IgG-человека, определяли антитела к Re-мутанту Salmonella minnesota R-595, к 5 штаммам E. coli (0,6, 0,16, 0,18, 0,86, 0,111) и к 9 другим штаммам грамотрицательных бактерий и по содержанию антител оценивали иммунологическую реактивность.

Способ имеет недостатки, которые влияют на информативность и точность. Они заключаются в том, что оценка проводится только с учетом динамики изменений показателей, нарушения устанавливаются преимущественно по содержанию Re-антител, без должного учета E. coli-антител; выводы о диагностической значимости показателей основываются на результатах обследования 3 больных одного профиля; определяются антитела относящиеся не к отдельным субклассам, а к классу IgG.

Целью изобретения является повышение точности оценки резистентности организма за счет использования в качестве критерия оценки показателей, более объективно отражающих способность организма к иммунному ответу.

Способ осуществляется следующим образом: у обследованного забирают венозную кровь, получают из нее сыворотку и проводят иммуноферментный анализ по общепринятому методу [6] . В работе использовали полистероловые планшеты микротитрования (ТУ 6-05-1871-79). Лунки планшет, в которых проводилось определение Re-антител сенсибилизировали липополисахаридом Salmonella minnesota R 595 (R-мутант), а планшеты для E. coli-антител сенсибилизировали липополисахаридом E. coli О 114. В лунки вносят по 250 мкл сыворотки, разведенной буферным раствором (1: 26). Исследования проводились в дубликатах. Планшеты инкубировали в течение 1 ч при 37^оС и промывали 5 раз буфером с 0,5% твином. В лунки вносили по 150 мкл раствор белка А, конъюгированного с ферментом (пероксидазой из корня хрена по ТУ 6.62-279481), инкубировали в течение 1 ч при 37^оС промывали 5 раз буфером с 0,5% твином и количество связавшегося конъюгата выявляли с помощью субстрата (ортофенилдиамин солянокислый по ТУ 6.09-11-64). Интенсивность окраски была пропорциональна количеству антител, содержащихся в образцах. Изменение окраски регистрировали фотометрически на многоканальном или одноканальном фотометре при длине волны 405 нм. Содержание антител оценивали по показателю экстинкции при длине волны 405 нм (Е 405). В качестве контрольных величин использовали донорскую плазму, которая была отобрана из 43 образцов и соответствовала установленной среднеарифметической. Отклонением от нормы (повышение или снижение) считали изменение показателя, равное 2 сигмам. Одновременно использовались контрольные образцы с низким и высоким содержанием антител, а также отрицательный контроль, полученный методом афинной хроматографии. Показатель соотношения E. coli-антител к Re-антителам определяли путем деления показателя экстинкции для E. coli-антител (Е 2) на показатель экстинкции для Re-антител (Е 1).

П = Е 405 : Е 405
2 1
Отклонением от нормы считали изменение показателя, равное 2 сигмам. С целью установления информативной значимости показателей, отражающих содержание E. coli - и Re-антител и выявления групп риска, было обследовано 293 рабочих и служащих производственного объединения "Тасма" (г. Казань). Больные с острыми заболеваниями в состав обследованных не входили. Для контроля объективности полученных данных целенаправленно привлекались следующие специалисты: терапевт, кардиолог, пульмонолог, акушер-гинеколог, гастроэнтеролог, окулист, невропатолог. По показаниям проводились ультразвуковое исследование, гастрофиброскопия, ЭКГ. Проведено 227 анализов на раково-эмбриональный антиген, антиген рака молочной железы, альфа-фето-протеин, углеводный антиген злокачественных опухолей панкреато-гепато-дуоденальной области, кислую фосфатазу предстательной железы, бета-2-микроглобулин, ХГЧ, ЛГ, ФСГ, эстрадиол, эстриол, прогестерон, тестостерон, ТТГ, тироксин, трийодтиронин, кортизол, 23 человека дообследовались в стационарных условиях.

Обследованные в зависимости от содержания E. coli-антител, Re-антител и показателя П, были распределены на 11 групп, обозначенные как группы системы оценки резистентности иммуноферментным методом ("СОИС-ИФА"). Результаты представлены в табл. 1.

Учитывая, что основным критерием здоровья является наличие или отсутствие заболевания, проанализировали частоту выявления больных с различным числом заболеваний в группах "СОИС-ИФА" (табл. 2).

Из таблицы видно, что наиболее неблагоприятными являются группы 3,5,10.

Учитывая, что резистентность больного зависит не только от числа заболеваний, но и от того какая система или орган поражены, провели анализ структуры болезней в группах в соответствии с классификацией ВОЗ. Из табл. 3 следует, что наиболее неблагоприятными являются группы 3, 5, 6, 8, 10.

Учитывая, что резистентность больного зависит также от нозологической формы заболеваний, проанализировали частоту выявления больных диспансерной группы, требующих наибольших затрат на лечение.

Из табл. 4 следует, что наиболее неблагоприятными являются группы 3, 5, 10, а также 6 и 8.

По результатам клинических исследований, с учетом значений показателей, отражающих содержание Re-антител (Е 1) и E. coli-антител (Е 2), а также показателя отношения Е 2 к Е 1 (П), проведена оценка состояния резистентности у обследованных в группах "СОИС-ИФА".

При нормальных значениях Е 1, Е 2 и П состояние резистентности оценивают как нормальное (1-я группа); при снижении Е 1 и Е 2 и нормальном значении П - как физиологический вариант нормы (2-я группа); при снижении Е 1 и Е 2 и снижении или повышении П - как вариант угнетения резистентности (3-я группа); при повышении Е 1 и Е 2 и нормальном значении П - как вариант физиологической активации резистентности (4-я группа); при повышении Е 1 и Е 2 и повышении или снижении П - как вариант дисбалансированной активации резистентности (5-я группа); при снижении Е 1, повышении Е 2 и П - как вариант активации селективно сниженной резистентности (6-я группа); при повышении Е 1, снижении Е 2 и П - как вариант дисбалансированной активации селективно сниженной резистентности (7-я группа); при нормальном значении Е 1, снижении Е 2 и П - как вариант декомпенсированного снижения резистентности (8-я группа); при снижении Е 1, нормальном значении Е 2 и повышении П - как вариант компенсированного снижения резистентности (9-я группа); при повышении Е 1, нормальном значении Е 2 и снижении П - как вариант декомпенсированой активации сниженной резистентности (10-я группа); при нормальном значении Е 1, повышении Е 2 и П - как вариант компенсированной активации измененной резистентности (11-я группа).

П р и м е р 1. Обследуемый В. , 35 лет.

При исследовании сыворотки крови предлагаемым способом установлено, что показатель экстинкции для Re-антител (Е 1) равен 0,199; показатель экстинкции для E. coli-антител (Е 2) равен 0,458; показатель отношения Е 2 к Е 1 (П) равен 2,3. Нормальные значения для Е 1 колебались в пределах 0,190-0,230; для Е 2 - в пределах 0,435 - 0,520; для П - в пределах 2,1-2,5.

Заключение: Резистентность нормальная (группа 1).

При врачебном осмотре. Практически здоров.

П р и м е р 2. Обследуемый К. , 42 года.

При исследовании сыворотки крови предлагаемым способом было установлено, что показатель экстинкции для E. coli-антител (Е 1) был равен 0,146, показатель экстинкции для Re-антител (Е 2) был равен 0,319, показатель отношения Е 2 к Е 1 (П) был равен 2,5. Нормальные значения для Е 1 колебались в пределах 0,199-0,239, для Е 2 в пределах 0,390-0,470, для П - в пределах 1,8-2,2. При сравнении показателей больного с нормальными значениями установлено снижение обоих показателей и повышение значения их соотношения.

Заключение: Резистентность угнетена (группа 3).

При врачебном осмотре у больного выявлено следующее заболевание: Язвенная болезнь желудка. Узловая мастопатия. Хронический пиелонефрит.

П р и м е р 3. Обследуемый М. 43 года.

Получены следующие результаты: Е 1 = 0,165, Е 2 = 0,862, П = 5,2. Диапазон колебаний нормальных значений: для Е 1 в пределах 0,221-0,261, для Е 2 в пределах 0,407-0,947, для П в пределах 1,7-2,1.

Отмечается снижение показателя Е 1 и повышение показателей Е 2 и П.

Заключение: Активация селективно сниженной резистентности (группа 6).

При врачебном осмотре: Миома матки. Хронический аднексит. Хронический гастрит. Хронический холецистит. Хронический колит.

Следует указать, что при составлении заключения по результатам оценки резистентности должны учитываться данные анамнеза и (или) врачебного осмотра, особенно при нормальных показателях, так как такие значения могут наблюдаться в периоде ремиссии хронических заболеваний, а в отдельных случаях при их обострении, когда защитная реакция организма ограничена пределами нормальных значений, что свойственно всем существующим способам иммунодиагностики и многим и другим лабораторным методам исследований, например, наиболее часто применяемому в практике, общему анализу крови. Однако даже в этом случае результаты оценки резистентности предлагаемым способом будут иметь преимущество перед всеми другими за счет разнообразия устанавливаемых вариантов нарушений и могут дать дополнительную информацию о характере нарушений гуморального звена иммунитета у обследуемого для целенаправленного проведения лечебно-оздоровительных мероприятий, индивидуализации лечения.

Предлагаемый способ применялся при обследовании более чем 5.000 рабочих и служащих ВИАМа и заводом низковольтной аппаратуры (г. Москва), производственного объединения "Тасма" (г. Казань), Шевченковского завода пластических масс (г. Актау) и ряда других предприятий СНГ.

Способ позволил выявить группы риска, латентно протекающей формы болезни, состояния предболезни, впервые несколько онкобольных.

Предлагаемый способ не требует дорогостоящего оборудования, прост в исполнении, позволяет повысить эффективность профилактики и лечения, сократить потери по временной нетрудоспособности.

Осуществление на протяжении 3 лет лечебно-профилактических мероприятий позволило снизить количество больничных листов до 17-18% (г. Актау), что дало экономический эффект в несколько миллионов рублей.

Обобщая все изложенное, можно заключить, что исследования с помощью белка А содержания IgG, 1, 2, 4 - антител к Salmonella minnesota R 595 (Re-мутант) и к E. coli 0 114, а также введение показателя, отражающего отношение E. coli-антител к Re-антителам (П= Е 1 : Е 2), повышает точность оценки резистентности за счет увеличения информативности.

Кроме того, способ воспроизводим, объективен, доступен и достаточно надежен.

Практическая значимость способа определяется целесообразностью использования данного способа для оценки резистентности организма (выявления групп риска) при диспансеризации населения.

Необходимость и важность предлагаемого способа обоснована тем, что он может служить основой для определения стоимости страхового полиса.

(56) 1. Зайцева Г. А. и др. Генетические маркеры крови и активность гуморальных факторов противомикробной резистентности. Вестник академии медицинских наук СССР, 1988, N 7, с. 35-38.

2. Авторское свидетельство СССР N 1578657, кл. G 01 N 33/53, 1990.

3. Авторское свидетельство СССР N 1492280, кл. G 01 N 33/53, 1989.

4. Nys M. и др. Enzyme-linked immunosorbent assay for immunoglobulin G subclass antibodies specific for enterobacterial Re core glycolipid in healthy individials and in patients infected by gram-negative bacteria. J. Clin. Microbiol. 26: 857-862, 1988.

5. Barclay G. Robin, Scott Boyd B. и Wrigth lan H. Changes in anti-Endotoxin-IgG antibody and Endotoxaemia in Three Cases of Gram-Negative Septic Shock. Circulatory Shock 29: 93-106, 1989.

6. Теория и практика иммуноферментного анализа. М. : Высшая школа, 1991, с. 191.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано в качестве скринингового теста при диспансеризации населения и служить основой для индексации стоимости страхового полиса. Цель - повышение точности оценки резистентности. Сущность способа заключается в том, что методом ИФА с помощью белка А определяют содержание IgG 1,2,4-антител к липополисахариду /ЛПС/ SalmonellaminnesotaR595 /Re-мутант/ и к ЛПС E. Coli о 114, устанавливают показатель соотношения между ними и по трем показателям, сравнивая их с нормой, устанавливают характер нарушений в системе резистентности организма. 4 табл.

СПОСОБ ОЦЕНКИ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА путем определения в сыворотке крови содержания JgG-антител к Re-мутанту Salmonella minesota R 595 (Re-мутант) и к E. Coli с помощью иммуноферментного анализа, отличающийся тем, что в сыворотке крови с помощью белка А определяют содержание JgG 1,2,4-антител к Salmonella minesota R 595 (Re-мутант) и к E. Coli антител О 114, рассчитывают показатель отношения E. Coli-антител к Re-антителам по формуле
П = E₂/E₁,
где П - показатель отношения;
E₁ - показатель экстинкции, отражающий содержание антител к Re-мутанту;
E₂ - показатель экстинкции, отражающий содержание антител к E, Coli О 114,
далее сравнивают значения показателей с нормой и оценивают состояние резистентности организма как нормальное при нормальных значениях E₁ и E₂, как физиологический вариант нормы при снижении E₁ и E₂ и нормальном значении П, как вариант угнетения разистентности при снижении E₁ и E₂ и снижении при повышении П, как вариант физиологической активации резистентности при повышении E₁ и E₂ и нормальном значении П, как вариант дисбалансированной активации резистентности при повышении E₁ и E₂ и повышении или снижении П, как вариант активации селективно сниженной резистентности при снижении E₁, повышении E₂ и П, как вариант дисбалансированной активации селективно сниженной резистентности при повышении E₁, снижении E₂ и П, как вариант декомпенсированного снижения резистентности при нормальном значении E₁, снижении E₂ и П, как вариант компенсированного снижения резистентности при снижении E₁ нормальном значении E₂ и повышении П, как вариант декомпенсированной активации сниженной резистентности при повышении E₁, нормальном значении E₂ и снижении П, как вариант компенсированной активации измененной резистентности при нормальном значении E₁, повышении E₂ и П.