СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПОСОМ, СОДЕРЖАЩИХ ВОДОРАСТВОРИМЫЕ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ Российский патент 1994 года по МПК A61K9/127 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способу получения липосом, содержащих водорастворимые низкомолекулярные соединения, и может быть использовано в биологии и медицине для создания систем направленного транспорта физиологически активных веществ в клетки и повышения терапевтической активности лекарственных препаратов.

Известен способ получения липосом, заключающийся в том, что в растворе липидов в диэтиловом эфире (10 мл) диспергируют водно-солевой раствор (0,3-0,5 мл), содержащий лекарственный препарат, путем обработки ультразвуком в течение 1-2 мин, диэтиловый эфир удаляют из суспензии при 30^оС в течение 9±3 мин при вакууме 400 мм Нg, полученный гель встряхивают 5 с, вакуум в системе снижают до 100 мм Нg в течение 16±2 мин, полученную суспензию липосом разбавляют фосфатно-солевым буферным раствором (1,5 мл), невключенный в липосомы материал удаляют центрифугированием (12000 об/мин, 10-15 мин), а осадок липосом промывают два раза водно-солевым раствором. Это техническое решение является наиболее близким к описываемому по технической сущности и достигаемому положительному эффекту. Однако описанный метод получения липосом, основанный на принципе обращения фаз, имеет определенные недостатки, к числу которых следует отнести низкую эффективность включения целевого препарата в липосомы, прямой контакт включаемых соединений с органическими растворителями, тепловую обработку, гетерогенность популяции липосом, наличие остаточного количества органических растворителей в конечном препарате, что является основной причиной невоспроизводимости включения целевого препарата в липосомы.

Целью изобретения является повышение эффективности включения водорастворимых низкомолекулярных соединений в липосомы.

Поставленная цель достигается описанным способом получения липосом, содержащих водорастворимые низкомолекулярные соединения, диспергирование полученного раствора липидов в водном растворе, содержащем низкомолекулярные соединения, упаривание растворителя в вакууме и удаление невключенных компонентов, причем водный раствор одновременно с включаемым низкомолекулярным соединением содержит 5-10% криопротектора, полученную водную суспензию подвергают лиофилизации и регидратируют до исходного объема.

П р и м е р 1. 150 мг смеси фосфатидилхолина и холестерина 9:1, содержащей 9 мг нафтизина (2-(α -натилметил)имидазолиннитрат, мол. м. 275) в 0,2 мл этилового спирта впрыскивают в 3 мл 5%-ного водного раствора сахарозы. Полученную суспензию подвергают лиофилизации в течение 18 ч при остаточном давлении 30 мТорр, высушенный остаток липидов регидратируют 3 мл воды. Полученную суспензию липосом диализуют в течение 40 ч против 3 л 0,01 М фосфатного буферного раствора (рН 7,4), содержащего 5% сахарозы.

П р и м е р 2. Процесс проводят аналогично процессу, описанному в примере 1, за исключением того, что для приготовления липосом использовали 10% -ный водный раствор сахарозы.

П р и м е р 3. Процесс проводят аналогично процессу, описанному в примере 1, за исключением того, что для приготовления липосом использовали 5% -ный водный раствор глюкозы.

П р и м е р 4. Процесс проводят аналогично процессу, описанному в примере 1, за исключением того, что для приготовления липосом использовали смеси димиристоилфосфатидилхолина и холестерина 8:2.

П р и м е р 5. Процесс проводят аналогично процессу, описанному в примере 1, за исключением того, что лиофилизацию проводят при остаточном давлении 200 мТорр в течение 20 ч.

П р и м е р 6. Процесс проводят аналогично процессу, описанному в примере 1, за исключением того, что диспергирование раствора липидов в органическом растворителе в водном растворе проводят путем обработки ультразвуком (22 кГц) в течение 30 с.

П р и м е р 7. 19 мл раствора (100 мг/мл) смеси фосфатидилхолина и холестерина (8:2) в диэтиловом эфире (10 мг/мл) диспергируют в 0,3 мл водного раствора (75 мг/мл) рибамидила (мол.м.245) путем обработки ультразвуком (22 КГц) в течение 30 с. Полученную суспензию упаривают в вакууме (100 мм Нg), лиофилизуют в течение 5 часов при остаточном давлении 60 мторр. Полученный препарат регидратируют 0,3 мл воды, а затем 3 мл 0,9%-ного раствора NaCl. Для удаления невключенного рибамидила липосомы диализуют против 9%-ного раствора NaCl в течение 40 ч.

П р и м е р 8. Процесс проводят аналогично процессу, описанному в примере 7, за исключением того, что для приготовления липосом используют смесь липидов фосфатидилхолина, холестерина и дицетилфосфата (7:2:1).

П р и м е р 9. Процесс проводят аналогично процессу, описанному в примере 7, за исключением того, что лиофилизацию проводят при остаточном давлении 200 мм Нg в течение 18 ч.

П р и м е р 10. 0,1 мл спиртового раствора, содержащего 25 мг смеси фосфатидилхолина и холестирина (8: 2), впрыскивают в 1 мл 50 мМ раствора 6-карбоксифлуоресцеина (мол.м. 366), содержащего 5% сахарозы.

Полученную суспензию подвергают лиофилизации в течение 14 ч при остаточном давлении 60 мТорр, высушенный остаток липидов регидратируют 1 мл воды и полученную суспензию липосом подвергают диализу против 2000 мл 5%-ного раствора сахарозы в течение 48 ч.

П р и м е р 11. Процесс проводят аналогично процессу, описанному в примере 10 за исключением того, что для приготовления липосом использовали 5%-ный водный раствор маннита.

Описываемый способ обеспечивает более высокую эффективность включения. Из данных табл.1,2 и 3 видно, что описываемый способ обеспечивает получение липосом, содержание низкомолекулярных соединений в которых в 1,5-2 раза выше, чем в липосомах, полученных по известному методу. Существенно более высокое удельное включение низкомолекулярных соединений в липосомы обеспечивает большую терапевтическую эффективность липосом и более полную утилизацию включаемого вещества в липосомы.

Применение описываемого способа дает возможность использования больших концентраций этилового спирта в среде получения липосом вплоть до 20% (см. табл.4), тогда как в случае известного метода инжекции липосомы не образуются, если концентрация спирта в среде превышает 10%.

Описываемый способ дает возможность получения полупродукта, т.е. лиофильно высушенного препарата липосом, который можно длительно хранить и использовать после кратковременной регидратации. Эта процедура может существенно упростить технологию получения, хранения и транспортирование препаратов липосом. Препарат липосом, полученный по описываемому способу, более стабилен при хранении после регидратации, чем препарат липосом, полученный известным методом обращения фаз (данные в табл.5).

Таким образом описываемый метод позволяет существенно повысить эффективность включения водорастворимых низкомолекулярных соединений в липосомы.

Данный способ не был реализован ранее потому, что повышение степени включения низкомолекулярных соединений в результате лиофилизации водной суспензии липосом и последующей регидратации не было очевидным на данном уровне развития липосомной технологии.

Данное изобретение может быть использовано в биотехнологии и медицине для создания липосомальных форм лекарственных препаратов и биологически активных веществ.

Изобретение относится к биотехнологии и касается способа получения липосом, содержащих водорастворимые низкомолекулярные соединения. Целью изобретения является повышение эффективности включения. Сущность изобретения заключается в растворении липидов в органическом растворителе, диспергировании полученного раствора в водном растворе, содержащем низкомолекулярные соединения, одновременно с 5 - 10% криопротектора, лиофилизации полученной водной суспензии, регидратации до исходного объема и удалении невключенных соединений диализом. Положительный эффект заключается в повышении включения в липосомы указанных соединений в 1,5 - 2 раза выше по сравнению с прототипом. 1 з.п.ф-лы, 5 табл.

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПОСОМ, СОДЕРЖАЩИХ ВОДОРАСТВОРИМЫЕ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ, включающий растворение липидов в органическом растворителе, диспергирование полученного раствора в водном растворе, содержащем низкомолекулярные соединения, упаривание растворителя в вакууме и удаление невключенных компонентов, отличающийся тем, что, с целью повышения эффективности включения, водный раствор одновременно с включаемым низкомолекулярным соединением содержит 5 - 10% криопротектора, полученную водную суспензию подвергают лиофилизации и регидратируют до исходного объема. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве криопротектора используют сахарозу или глюкозу, или маннит.