СПОСОБ ТЕСТИРОВАНИЯ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ ТОЛЕРАНТНОСТИ У ЖИВОТНЫХ Российский патент 1994 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к экспериментальной медицине и биологии, преимущественно к патфизиологии и иммунологии, и может быть использовано для установления приобретенного состояния специфической иммунологической ареактивности при искусственном индуцировании иммунологической толерантности.

Известно множество способов оценки иммунологической реактивности, направленных на изучение различных звеньев иммунной системы, осуществляемых как in vitro, так и in vivo и основанных на выявлении и определении функциональной активности клеток, участвующих в формировании клеточного и гуморального иммунитета, определении иммуноглобулинов и циркулирующих иммунных комплексов, антителозависимой клеточной цитотоксичности, оценке реакций гиперчувствительности замедленного типа, немедленного типа, в частности реакции дегрануляции тучных клеток и базофилов крови.

Однако известные и широко используемые способы оценки иммунологической реактивности макроорганизма не дают полной гарантии и точной оценки индуцированного состояния иммунологической ареактивности к специфическому антигену. В этой связи требуется обязательный комплексный подход с одновременной постановкой многих тестов.

Целью изобретения является получение дополнительного, достаточно надежного теста, направленного на оценку состояния развившейся иммунологической ареактивности к специфическому антигену, например белку или другим антигенам, при искусственном индуцировании у подопытных животных иммунологической толерантности к конкретному антигену.

Поставленная цель достигается тем, что у животного с индуцируемой иммунологической толерантностью для определения или констатирования развившегося состояния иммунологической ареактивности к специфическому антигену, предварительно получают кровь, подсчитывают в ней количество базофилов, затем этому животному производят внутрибрюшинное тест-введение специфического антигена в разведении 1:50-1:100 в количестве 5,0 мл на 1,0 кг массы тела животного. Далее в динамике (ежедневно) в течение 7 сут после этого введения антигена, определяют количественные изменения базофилов крови.

Впервые продемонстрировано, что при внутрибрюшинном введении специфического антигена животным с индуцированной иммунологической толерантностью к специфическому антигену абсолютное количество циркулирующих в крови базофилов не изменяется, либо колебания их количества несущественны.

Если у животных не развилось состояние иммунологической ареактивности, то у подопытных животных в ответ на введение специфического антигена, обязательно регистрируются существенные изменения количества базофилов в единице объема крови.

Использование предлагаемого способа тестирования иммунологической толерантности с целью определения или констатирования состояния развившейся иммунологической ареактивности к специфическому антигену при ее искусственном индуцировании, обеспечивает по сравнению с известными методами оценки иммунологической реактивности организма простоту воспроизведения, позволяет точно и надежно определить состояние развившейся толерантности к специфическому антигену.

П р и м е р 1. В эксперименте были взяты 3 морские свинки одинакового возраста, пола (самцы) и массы (400 г). Одна морская свинка была интактная, вторая морская свинка взята спустя три недели после сенсибилизации ее к овальбумину, третья свинка была с индуцированной иммунологической ареактивностью к овальбумину.

Всем трем морским свинкам было введено внутрибрюшинно по 2 мл раствора овальбумина в разведении 1:100.

На фиг. 1 представлена динамика количественных сдвигов базофилов в ед. объема крови в ответ на введение антигена (внутрибрюшинно - овальбумин) интактной морской свинке. Видны выраженные и разнонаправленные колебания количества базофилов в крови в различные сроки после поступления антигена. В первые сутки количество циркулирующих базофилов значительно уменьшилось, к концу вторых суток их количество приблизилось к исходному уровню, далее количество базофилов увеличивалось и на 4-5-е сутки достигло максимума, затем их количество постепенно снижалось, но оставалось еще на достаточно высоком уровне, включая и седьмые сутки.

На фиг. 2 представлена подобная динамика изменения количества базофильных лейкоцитов в ед. объема крови, но только с более выраженными колебаниями. Эта динамика наблюдалась при внутрибрюшинном введении овальбумина сенсибилизированной морской свинке.

У морской свинки с индуцированной иммунологической толерантностью к овальбумину существенных колебаний количества базофилов в ед. объема крови в ответ на тест-введение специфического антигена не было зарегистрировано, что следует из фиг.3, на которой изображена динамика изменения количества базофильных лейкоцитов после вн утрибрюшинного тест-введения специфического антигена морским свинкам с индуцированной иммунологической толерантностью к овальбумину.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и биологии, преимущественно к патфизиологии и иммунологии, и может быть использовано для установления приобретенного состояния иммунологической ареактивности при искусственном индуцировании иммунологической толерантности. Цель изобретения - упрощение способа. Сущность предлагаемого способа заключается в том, что у животного с индуцируемой иммунологической ареактивностью определяют количество базофилов крови до и после внутрибрюшного введения специфического антигена в разведении (1 : 50) - (1 : 100) в количестве 5,0 мл на 1,0 кг массы тела животного, исследуя при этом динамику количественных сдвигов циркулирующих в крови базофилов в течение семи суток после тест-введения специфического антигена, и при отсутствии количественных сдвигов базофилов или несущественных колебаниях их количества в крови в эти сроки делают заключение о развившемся состоянии иммунологической ареактивности к специфическому антигену. Применение предлагаемого способа делает возможным исключение необходимости процедуры одновременной постановки большого комплекса сложных иммунологических методов, направленных на изучение иммунологической реактивности у подопытного животного с целью установления у него иммунологической толерантности, обеспечивает простоту воспроизводства, позволяет достаточно точно и надежно констатировать состояние развившейся иммунологической ареактивности к специфическому антигену. 3 ил.

СПОСОБ ТЕСТИРОВАНИЯ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ ТОЛЕРАНТНОСТИ У ЖИВОТНЫХ, включающий исскуственное индуцирование ареактивности к антигену, последующее введение в организм разрешающей дозы антигена и исследование базофилов крови, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, исследуют динамику количественных сдвигов циркулирующих в крови базофилов в течение семи суток после однократного внутрибрюшного введения специфического антигена в разведении 1 : 50 - 1 : 100 в количестве 5 мл на 1 кг массы тела и при содержании количественных параметров на уровне до введения антигена тестируют иммунологическую толерантность.