СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПАНКРЕАТИТА И ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ ОТТОРЖЕНИЯ ТРАНСПЛАНТАТА ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ И СПОСОБ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ ОТТОРЖЕНИЯ ТРАНСПЛАНТАТА ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ Российский патент 1994 года по МПК A61K31/70 

Изобретение касается способа лечения панкреатита, в особенности иммуноподавляющего лечения отторжения имплантата после пересадки поджелудочной железы.

Панкреатит является болезненным состоянием, которое может устраниться самопроизвольно или погубить больного от геморрагического некроза или может вызвать повторяющуюся боль от хронического распада железы. Специфического лечения для него не имеется.

Трансплантацию органов или тканей от донора к реципиенту проводят часто как средство замещения нефункционирующих или больных органов или тканей здоровыми альтернативами от другого хозяина (аллогенный имплантат), но эта процедура чревата опасностью того, что трансплантированные или имплантированные орган или ткань могут быть отторгнуты реципиентом, несмотря на то, что донор и реципиент генетически идентичны (сингенный трансплантат). Такое отторжение может быть ослаблено использованием различных известных лекарственных средств, проявляющих иммуно-подавляющее действие, т.е. они понижают активность механизма, с помощью которого тело отторгает имплантированный материал. Механизм полностью не изучен и испытывается большая потребность в новых лекарственных средствах и методах, которые могли бы снизить ско- рость отторжения более эффективно.

Установлено, что соединения S-аденозилметионина обладают ценными свойствами в лечении панкреатита и как синергические средства иммунноподавляющего действия циклоспорина в борьбе с отторжением имплантата после пересадки поджелудочной железы. Объект, подлежащий лечению методом согласно изобретению, может быть человеком или животным. Установлено, что метод применим к лечению всех форм панкреатита, но в особенности для лечения и/или профилактики геморрагического некроза поджелудочной железы и также в особенности для лечения отторжения у генетически высоко иммунокомпетентных реципиентов трансплантированной поджелудочной железы, подозрительных в частности, на воспалительный процесс.

S-аденозилметионин является известным соединением, описанным в литературе и поставляемым на рынок (например, Bioresearch, Spa, Milan, Italy и из Sigma Chemical Cо). Предпочтителен L-энантиомер S-аденозил-L-метионина. Так как соединение образует разнообразные соли, производные от различных кислот, и некоторые из этих солей (например, хлорид и в меньшей степени иодид) могут быть нестабильными, предпочтительно использовать соединение в форме соли, которая относительно стабильна при температуре окружающей среды, например, пара-толуолсульфонат (поставляемый Sigma Chemical Co, N по каталогу А-2408).

Согласно изобретению предусмотрены также фармацевтические композиции, полезные для лечения воспалительных процессов и состояний отторжения имплантата, содержащие в качестве активного ингредиента S-аденозилметионин.

S-аденозилметионин может быть введен в форме обычных композиций, которые могут быть растворами, дисперсиями или суспензиями в традиционном разбавителе или носителе, пригодном для системного введения соединения в организм подлежащего лечению реципиента. Так он может быть введен в любой подходящей традиционной среде, совместимой, например, с 0,2 М динатрийфосфатом.

Введение в организм, подлежащий лечению или защите, может быть осуществлено инъекцией или инфузией, используя обычную методику, например, внутримышечное, внутривенное или внутрибрюшинное, или пероральное введение, или любое сочетание этих методов. Очевидно, что соединение может постепенно разлагаться в организме и это крайне желательно для поддержания длительного поступления соединения с последующим введением дальнейших доз предпочтительным методом. Так, например, соединение обычно вводят три раза в день.

Дозный уровень может варьироваться в зависимости от тяжести заболевания и/или конкретного объекта, подлежащего лечению, но обычно он находится в интервале от 10 мг до 2,5 г на 1 кг массы тела и предпочтительно в интервале от 25 мг до 1,0 г массы тела. Введение обычно проводят в форме раствора на фармацевтически приемлемом растворителе (т.е. вода) в концентрации порядка 25 мг/мл. Могут быть использованы более высокие концентрации и дозы, если необходимо, а также более высокие соотношения соединения в композициях.

Лекарственные средства и композиции, согласно изобретению, могут содержать известные вспомогательные добавки и другие активные ингредиенты и такие активные ингредиенты могут быть введены одновременно или последовательно, если желают. Примеры таких активных ингредиентов включают антиокислители и их предшественники (например, N-ацетилцистеин), противовоспалительные средства (например, 5-аминосалициловая кислота) и их сочетания, при условии их совместимости с S-аденозилметионином.

Неожиданно было установлено, то введение S-аденозилметионина в сочетании с введением циклоспорина путем введения только одной терапевтической композиции, содержащей оба активных вещества, обеспечивает чрезвычайный успех в подавлении иммунного отторжения хозяином имплантированной поджелудочной железы. Оптимальные результаты получены при введении S-аденозилметионина в дозе 25 мг/кг веса тела в сочетании с циклоспорином в дозе 20 мг/кг веса тела. Под термином "циклоспорин" понимают все циклоспорины, известные как иммунодепрессивное средство.

Большинство трансплантатов поджелудочной железы показывают признаки панкреатита. Такое повреждение является следствием неспецифической реакции экзокринной поджелудочной железы на различные повреждающие агенты, в случае трансплантированного органа может быть обусловлено иммунной реакцией на чужеродный аллоантиген. При кистологическом исследовании различаются две основные формы панкреатита, отечная форма, которая появляется как предшественник состояния, описанного как геморрагический некроз поджелудочной железы. Реакция может быть прекращена внезапно на стадии интерстициального отека с повышенными уровнями амилазы сыворотки вследствие ацинозного повреждения клеток или может прогрессировать неумолимо до некротической формы со смертельным исходом от многосистемного повреждения органа, как имеет место в 20% случаев острого панкреатита человека. Удовлетворительное лечение отсутствует частью потому, что патогенный процесс мало изучен. Однако стереотипная реакция на повреждающие агенты предполагает, что основным механизмом повреждения ткани является тот или иной предполагаемый этиологический фактор.

Экспериментальные исследования показывают, что лечение аллотрансплантированных реципиентов одним циклоспорином притупляет иммунную реакцию, но не предотвращает панкреатита, так что животные погибают при нормальном содержании сахара со средним временем выживания 11 дней. Основным свидетельством повреждения ткани является гистология. Лечение одним S-аденозилметионином уменьшает интерстициальный отек и животные живут достаточно долго до развития гиперглинемии вследствие отторжения островков трансплантата, сочетание же двух активных оснований контролирует обе проблемы, обеспечивая при этом длительное выживание животных.

Выбирали для трансплантации панкреатолуоденальные трансплантаты крыс от РVG/c/PTI^c/ до РVG.РТI^и, так как все трансплантаты органа отторгались остро и в особенности энергично в этом "высоко иммунокомпетентном" сочетании линий. Результаты тестов сведены в табл.1. Приводим следующие комментарии.

Лечение реципиентов поджелудочной железы циклоспорином А при 20 мг/кг оказывало небольшое влияние на выживание: 6 крыс из 8 погибали при нормогликемии в течение 14-дневного периода лечения (табл.1, группа 3 и фиг. 1b). Большие изменения включали массивный отек и кровоизлияние в трансплантате во времени гибели. Гистологически определялось начало у всех, но слабый отек (табл.2, группа с) растягивался до пяти дней после трансплантации. Клеточная инфильтрация (табл. 3, группа с) также была сниженной со слабым инфильтратом от 2-5 дней, содержащим вначале полиморфные формы с последующим появлением макрофагов, затем лимфоцитов. На 6-7-й день отек увеличивался и полиморфы возвращались в инфильтрат, который становился жестким на 7-й день. Потеря ацинозных клеток была постепенной, с 4-го дня, но сильной на 7-й день. Островки оставались нормальными на протяжении периода времени с нормогинемией до смерти, (фиг.1b). Индукция экспрессии антигенов класса I МНС островков и ацинозных клеток была пониженной в сравнении с необработанными трансплантатами, но увеличенной с Т-клеточным инфильтратом с 4-го дня, и особенно сильно была выражена на 7-й день.

Кажется, что S-аденозилметионин не является иммунодепрессантом в собственном смысле, поскольку отторжение наступает несмотря на его введение. Он обладает некоторой противовоспалительной активностью в этой модели, так как понижает отечность в первые пять дней после пересадки трансплантата (табл. 2, группа d/, но не влияет на инфильтрацию (табл.3, группа d) и оказывает слабо распознаваемое действие (при приведенных дозах) на связанный с отторжением панкреатит, вызываемое активированными Т-клетками (табл.1, группа 4 и фиг.2с).

В конечной группе, когда реципиентов обрабатывали циклоспорином А и S-аденозилметионином, 7 и 8 реципиентов выживали более 100 дней (табл.1, группа 5) с нормогликемией (фиг.1d). Наблюдался слабый отек на 4-й день, но он устранялся на 8-й день (табл.2, группа c). Инфильтрат (табл.3, группа е) всегда был небольшим с несколькими полиморфными формами клеток, которые не обнаруживались на 8-й день, и лимфоцитами, которые исчезали на 12-й день (фиг. 2d). Протоки, ацинозные клетки и островки были в порядке, по меньшей мере, в течение первых двух недель, хотя наблюдалось небольшое индуцирование МНС-антигенов этими структурами.

Такие же результаты были получены в группе 5, при введении однократной дневной дозы 100 мг/кг (массы тела) S-аденозилметионина и 20 мг/кг циклоспорина А. S-аденозилметионин вводили в течение 10 дней внутримышечной инъекцией со дня трансплантации, а циклоспорин вводили в течение 14 дней.

На фиг. 1. Уровни глюкозы крови у реципиентов панкреатодоуденальных трансплантатов.

Полоса а) - накопленные данные для групп 1 и 2 (не получавших лечения и получавших носитель соответственно).

Полоса в) - данные для реципиентов группы 3, получавших лечение циклоспорином А (20 мг/кг/день) только.

Полоса с) - уровни глюкозы крови у реципиентов группы 4, получавших только S-аденозилметионин (25 мг/кг/день).

Полоса d) - данные для трансплантированных крыс в группе 5, получавших как циклоспорин А, так и S-аденозилметионин.

На фиг.2-5. Гистологический вид трансплантированных тканей от панкреатодоуденальных трансплантированных реципиентов.

На фиг.2 - Сингенная трансплантация на 8-й день после пересадки.

Н + Е (х 180) - степень увеличения.

Небольшой отек, разделяющий дольки ацинозной ткани. Очень слабая инфильтрация макрофагами и некоторыми лимфоцитами. Ацинозные клетки жизнеспособные и хорошо гранулированы. Островки также найдены в изобилии.

На фиг. 3 - Не получавший лечения аллотрансплантат на 7-й день после пересадки. Н + Е (х 180).

Обширное некротическое повреждение слева и остаточной экзокринной ткани протока справа. Посредине "палисад" нейтрофилов. Область справа сильно инфильтрирована полиморфноядерными клетками и макрофагами и налицо свидетельство обширного кровоизлияния.

На фиг.4 - Аллотрансплантат, леченный S-аденозилметионином, на 7-й день после трансплантации. Н + E (х 180).

Сильный некроз ацинозной ткани поджелудочной железы с остаточной структурой протока и инфильтрат воспалительных клеток, содержащий полиморфы и макрофаги с некоторым количеством лимфоцитов. Видны жизнеспособные островки на трансплантате: имеется деформированный, но иным образом не нарушенный островок слева.

На фиг. 5 - Аллотрансплантат, леченный циклоспорином А и S-аденозилметионином на 8-й день после пересадки. Н + Е (х 180). Нормальная ацинозная ткань показывает очень слабый отек и минимальную инфильтрацию. Основными клетками являются микрофаги, хотя их и немного. Нормальные островки можно видеть в ткани на срезе в центре и в левом углу внизу.

Изобретение относится к медецине, в частности к хирургии и трансплантологии. Цель - создание средства для лечения панкреатита и для профилактики отторжения трансплантата поджелудочной железы. Для этого предлагается использовать S-аденозилметионин в дозе 10-2500 мг/кг, а для усиления эффекта предупреждения отторжения- в дозе 25 мг/кг в сочетании с циклоспорином в дозе 20 мг/кг массы тела в сутки. 2 с.п. ф-лы, 5 ил., 3 табл.

1. Применение S-аденозилметионина и его фармакологически приемлемой соли в дозе 10 - 2500 мг/кг массы тела в сутки в качестве средства для лечения панкреатита и предупреждения отторжения трансплантата поджелудочной железы. 2. Способ предупреждения отторжения трансплантата поджелудочной железы, включающий введение лекарственных средств, отличающийся тем, что вводят S-аденозилметионин в дозе 25 мг/кг в сочетании с циклоспорином в дозе 10 мг/кг массы тела в сутки.