АНТИОКСИДАНТНОЕ, КАПИЛЛЯРОПРОТЕКТОРНОЕ, ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЕ И АНТИГИСТАМИННОЕ СРЕДСТВО Российский патент 1994 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к медицине, а именно к терапии, и касается применения индивидуального вещества Р-витаминного действия из растительного сырья в качестве капилляроукрепляющего и антиоксидантного средства.

Целью изобретения является расширение спектра действия за счет проявления капилляроукрепляющей и антиоксидантной активности.

Капилляроукрепляющим и антиоксидантным средством является дигидрокверцетин (3,3',4',5,7-пентагидроксифлаванон) структурной формулы:
С₁₅Н₁₂О₇ Мол. м.304,3
Дигидрокверцетин - мелкокристаллический порошок от светло-кремового до светло-желтого цвета, без запаха и вкуса, легко растворим в этаноле, этилацетате, ацетоне, диметилсульфоксиде; умеренно растворим в горячей воде; очень мало растворим в воде при комнатной температуре и диэтиловом эфире. В УФ-спектре имеется полоса поглощения при λ_max (этанол) 292 нм (ε 20500), оптическая активность (α)_D²⁰ + +22,2^о (с 1,0; метанол).

Дигидрокверцетин получают по известному способу (ТУ ОП-13-0279488-02-92) путем экстракции измельченной древесины лиственницы водой при нагревании с последующим охлаждением, фильтрованием и упариванием экстракта, в который после охлаждения вносится полиамидный порошок в соотношении 1:10. Смесь интенсивно перемешивается в течение 2 ч, отфильтрованный полиамидный порошок высушивается и экстрагируется этилацетатом. После испарения этилацетата сухой остаток растворяют в горячей воде, при охлаждении раствора выпадают кристаллы дигидрокверцетина.

Известно, что дигидрокверцетин обладает противовоспалительным, антигистаминным и радиозащитным действием.

Дигидрокверцетин является малотоксичным веществом. Исследование острой токсичности проводили по методу Литчфилда-Уилкинсона в опытах на мышах при внутрибрюшинном и внутрижелудочном введении. Наблюдение за животными вели в течение 14 дней. Дигидрокверцетин вводили в объеме 1 мл на мышь внутрибрюшинно в виде растворов в 5% диметилсульфоксиде в дозах 500, 600, 700, 750, 800, 850, 900, 1000 и 1500 мг/кг; внутрижелудочно - в виде взвеси в 1% растворе крахмала в дозах 2000, 2250, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500 мг/кг. Результаты представлены в табл.1.

По современной классификации вещества, имеющие ЛД₅₀ при внутрижелудочном введении мышам в интервале 500-5000 мг/кг и ЛД₅₀ при внутрибрюшинном введении - 101-1000 мг/кг, относятся к группе малотоксичных. Как видно из данных табл. 1 по значениям ЛД₅₀дигидрокверцетин удовлетворяет этим условиям.

Капилляроукрепляющее действие дигидрокверцетина изучали в лабораторных условиях в сравнении с известными капилляроукрепляющими средствами - кверцетином и рутином по методу Ойвина и Монаковой (1953) на 120 мышах массой 17-18 г. Критерием сосудистой проницаемости в этом методе служит время выхода трипановой сини в очаг воспаления, вызванного нанесением на депиллированную поверхность кожи 0,05 мл ксилола. Испытуемым мышам за 1 ч до внутрибрюшинного введения 0,25 мл 1%-ного раствора трипановой сини внутрижелудочно вводили исследуемые вещества в виде взвеси в 1,5% крахмальном клейстере в дозах 50, 100 и 300 мг/кг. Результаты опытов представлены в табл.2.

В контрольных группах животных время выхода трипановой сини составило 106,2 и 108,0 с, тогда как в каждой из опытных групп этот показатель был достоверно большим, что свидетельствует о проявлении препаратами капилляроукрепляющего эффекта. Дигидрокверцетин проявлял наибольшую капилляроукрепляющую активность по сравнению с кверцетином и рутином. Так, в дозе 100 мг/кг дигидрокверцетин замедлял выход трипановой сини на 53,0%, в то время как кверцетин и рутин только на 15,3 и 19,1% соответственно. Еще более заметное различие в выраженности эффекта наблюдалось при дозе 300 мг/кг: капилляроукрепляющий эффект дигидрокверцетина составлял 73,5%, а кверцетина и рутина- 14,8 и 26,3% соответственно. В дозе 50 мг/кг все исследуемые вещества были неэффективны.

Таким образом, установлено, что дигидрокверцетин обладает выраженным дозозависимым капилляроукрепляющим действием и превосходит кверцетин и рутин в 1,3-1,4 раза.

Подтверждением наличия у дигидрокверцетина капилляроукрепляющих свойств служат также результаты исследования гастропротекторного и противовоспалительного действия.

Гастропротекторный эффект дигидрокверцетина исследовали на моделях экспериментальных язв желудка, вызванных введением ульцерогенных агентов (этаноловые, кофеино-мышьяковистые язвы и язвы, вызванные перевязкой привратника). Дигидрокверцетин вводили в желудок до введения ульцерогенных агентов; на модели язв, вызванных перевязкой привратника, дигидрокверцетин вводили интрадуоденально после наложения лигатуры.

Как видно из данных, приведенных в табл.3, дигидрокверцетин оказывает отчетливое защитное действие на слизистую желудка животных. Так, на модели острого этанольного поражения желудка введение дигидрокверцетина в дозе 50 мг/кг приводит к снижению частоты возникновения и площади язвенных дефектов соответственно на 37,3 и 13,4% по сравнению с аналогичными параметрами в контрольной группе животных.

На модели кофеиново-мышьяковистых язв желудка дигидрокверцетин также проявлял отчетливый дозозависимый гастропротекторный эффект. В дозе 150 мг/кг девятидневное введение препарата за 1 ч до введения кофеиново-мышьяковистой смеси уменьшало частоту возникновения и площадь язвенных дефектов соответственно на 42,0 и 38,9% по сравнению с этими параметрами у животных контрольной группы. В случае однократного введения препарата интрадуоденально на модели язв, вызванных перевязкой привратника, отмечен 50% эффект в отношении предупреждения увеличения площади язвенных дефектов.

Защитный эффект на слизистую желудка дигидрокверцетина связан с его капилляроукрепляющим действием на стенки кровеносных капилляров слизистой желудка.

Противовоспалительный эффект дигидрокверцетина исследовали на модели экспериментального перитонита у крыс. Воспаление брюшины вызывали путем введения 0,2% раствора нитрата серебра. Дигидрокверцетин и препараты сравнения - кверцетин и рутин - вводили крысам внутрь в дозе 300 мг/кг через 1 ч после воспроизведения патологии. Через 5 ч животных забивали и измеряли собранную из брюшной полости серозную жидкость. По результатам опытов (табл. 4) видно, что все исследуемые препараты угнетают образование серозной жидкости в бpюшной полости. При этом наиболее активным оказался дигидрокверцетин.

Полученные данные по гастропротекторному и противовоспалительному действию дигидрокверцетина полностью подтвердили наличие у него выраженного капилляроукрепляющего эффекта, проявляющегося как в условиях профилактического (экспериментальные язвы желудка), так и лечебного (перитонит) введения.

Антиоксидантное действие дигидрокверцетина изучали в лабораторных условиях в опытах in vitro в сравнении с известным антиоксидантным средством - кверцетином. Влияние препаратов на уровень пероксидного окисления липидов (ПОЛ) изучали на гомогенате печени по методу Plazer, Kuzela (1968) на 40 крысах-самцах массой 180-200 г. Критерием выраженности процессов ПОЛ в этом методе служит количество малонового диальдегида (МДА), образующегося в гомогенате печени крыс спонтанно (неиндуцированно) или при индуцировании реакции ПОЛ ионами двухвалентного железа в присутствии НАДФН. В случае индукции ПОЛ инкубационная смесь содержала 12˙10^-6 М FeSO₄, 1 мМ НАДФН, 0,2˙10^-3 М дифосфата натрия и трис-НСl буфер (рН 7,4). Препараты в виде растворов добавляли в гомогенат печени вместе с реакционной смесью в конечных концентрациях 100, 500 и 1000 мкг/г печени. Контрольные пробы содержали реакционную смесь без препаратов. Количество МДА определяли спектрофотометрическим методом при длине волны 532 нм, проведя предварительно взаимодействие МДА с тиобарбитуровой кислотой (0,8% раствор) при высокой температуре и в кислой среде, в результате чего образовалось окрашенное комплексное соединение.

Как видно из полученных данных (табл.5), дигидрокверцетин подавлял индуцированное ПОЛ, что проявлялось в уменьшении количества МДА на 38-41% по сравнению с контролем.

Антиоксидантный эффект дигидрокверцетина возрастал с увеличением его концентрации в гомогенате. Антиоксидантный эффект кверцетина при концентрации 100 мкг/г выражен на 10% слабее, чем у дигидрокверцетина. На основании проведенного исследования выявлено, что дигидрокверцетин обладает антиоксидантной активностью, превосходящей активность кверцетина.

Выпускаемые в нашей стране капилляроукрепляющие и антиоксидантные средства - кверцетин и рутин - не имеют прочной сырьевой базы. Производство их основано на использовании импортного сырья - бутонов софоры японской. Такой сырьевой источник, кроме экономических факторов, связан также с нестабильностью урожая, трудностями немеханизированного сбора сырья и т.п.

Производство дигидрокверцетина в этом отношении выгодно отличается тем, что основано на использовании доступного отечественного сырья в виде измельченной древесины лиственницы. Эта сырьевая база не имеет каких-либо ограничений в объеме заготовки. Важным обстоятельством является то, что стадия выделения дигидрокверцетина из древесины лиственницы совмещена с технологией производства целлюлозы и тем самым способствует повышению уровня безотходной технологии производства.

На основании изложенного видно, что дигидрокверцетин по фармакологическим показателям, характеризующим капилляроукрепляющее и антиоксидантное действие, имеет преимущество перед рутином и кверцетином и, кроме того, дигидрокверцетин обеспечен стабильной сырьевой базой. В настоящее время производство дигидрокверцетина внедрено на Байкальском целлюлозно-бумажном комбинате (ТУ ОП-13-0279488-02-92) и имеет перспективу расширения на других целлюлозно-бумажных комбинатах Сибири.

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, и касается применения индивидуального вещества р-витаминного действия из растительного сырья в качестве капилляроукрепляющего, антиоксидантного, противовосполительного и антигистаминного средства. В качестве последнего применяют флавоноидное соединение-дигидрокверцетин. По формокологическим показателям дигидрокверцетин имеет преимущество перед рутином и кверцетином и может широко использоваться в практической медицине при лечении различных заболеваний. 5 табл.

АНТИОКСИДАНТНОЕ, КАПИЛЛЯРОПРОТЕКТОРНОЕ, ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЕ И АНТИГИСТАМИННОЕ СРЕДСТВО, отличающееся тем, что оно представляет собой флаванонол следующей формулы: транс-5,7,3', 4'-тетрагидроксилфлаванонол: