КАПИЛЛЯРОУКРЕПЛЯЮЩЕЕ СРЕДСТВО Российский патент 2006 года по МПК A61K31/56 A61P9/04 

Изобретение относится к медицине и фармакологии и касается применения природного тритерпеноида ряда лупана - бетулина в качестве капилляроукрепляющего средства.

Содержание бетулина в бересте составляет от 10 до 30%. Бетулин (луп-20(29)-ен-3, 28-диол) имеет следующую химическую формулу: С₃₀Н₅₀O₂.

Бетулин представляет собой кристаллический порошок белого цвета, хорошо растворимый в горячем хлороформе, пиридине, тетрагидрофуране, слабо растворим в спиртах и в большинстве органических растворителей, практически не растворим в воде. Бетулин отличается высокой термостабильностью, его температура плавления колеблется от 251 до 261°С, в зависимости от чистоты.

Известен способ получения бетулина, включающий активацию бересты при температуре 180-260°С, давлении 2-5 МПа в течение 1-5 мин одновременно со щелочным гидролизом, с последующим кипячением в спирте (RU 2131882, 20.06.99). Описан способ получения бетулина, предусматривающий экстракцию 90-95% этиловым спиртом при температуре 70-75°С в присутствии активированного угля (RU 2172178). Известен способ получения бетулина путем экстракции изопропиловым спиртом предварительно измельченной в водно-щелочной среде березовой коры (SU 382657). Предложен способ получения бетулина экстракцией коры березы уайт-спиритом в течение 2 часов при температуре 155°С с последующей обработкой экстракта водным концентрированным раствором гидроокиси натрия (RU 2138508). Известен способ получения бетулинола, включающий экстракцию бересты гексаном в течение 3-5 часов с последующей обработкой экстракта равным объемом воды (RU 2206572, 20.06.2003).

В последнее время проводятся интенсивные исследования фармакологического действия бетулина и других тритерпеноидов лупанового ряда. Известна пртивовирусная активность бетулина и его производных (Pavlova N.I.; Savinova О.V.; Nikolaeva S.N et.al. Antiviral activity ofbetulin, betulinic and betulonic acids against some enveloped and non-enveloped viruses // Fitoterapia, 74(5), 489-492, 2003). Изучены противоспалительные свойства бетулина и его производных (Zdzisinska Barbara; Rzeski Wojciech; Paduch Roman, et.al. Differential effect of betulin and betulinic acid on cytokine production in human whole blood cell cultures // Journal of Pharmacology, 55(2), 235-238 2003). Исследовано его желчегонное и гепатопротекторное действие (Ю.К.Василенко и др. Фармакологические свойства тритерпеноидов коры березы // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 1993, Т 56, №4, С.53-55).

Задачей изобретения является расширение спектра фармакологического действия бетулина и применение его в качестве капилляроукрепляющего средства.

Известны капилляроукрепляющие средства - рутин, кверцетин, дигидрокверцетин. Наиболее близким к предлагаемому по назначению препарату является дигидрокверцетин. Капилляроукрепляющее действие дигидрокверцетина изучалось на лабораторных мышах по методу Ойвина и Монаковой (1953). Критерием сосудистой проницаемости служило время выхода трипановой сини в очаг воспаления, вызванного нанесением на депилированную поверхность кожи 0.05 мл ксилола. В дозе 100 мг/кг дигидрокверцетин замедлял выход трипановой сини на 53.0%, а при дозе 300 мг/кг - на 73.5% (RU 2014841, 30.06.94).

Исследование токсичности бетулина.

Острая токсичность бетулина была исследована в опытах на белых беспородных мышах. Бетулин вводили в желудок в дозах от 3000 до 9000 мг/кг в виде 15% крахмальной взвеси. Токсичность оценивали по клиническим симптомам отравления, физиологическим тестам и выживаемости животных в течение 2-х недель. При внутрижелудочном введении бетулина в дозах от 3000 мг/кг до 7500 мг/кг его действие было выражено только в незначительном угнетении центральной нервной системы (ЦНС). Гибель части животных наблюдалась при введении бетулина в дозе 7500 мг/кг, причем в картине острого отравления преобладали симптомы угнетения ЦНС, нарушения дыхания, снижения двигательной активности.

На основании проведенного токсикологического исследования сделан вывод о том, что бетулин не является ядовитым и согласно международной токсикологической классификации относится к 4 классу малотоксичных веществ: среднесмертельная доза (ЛД₅₀) бетулина составляет более 9000 мг/кг (табл.1).

Пример 1. Исследование капилляроукрепляющего действия бетулина.

Изучение влияния бетулина на проницаемость сосудов кожи проводили на мышах по методу Ойвина и Монаковой (1953). Критерием сосудистой проницаемости служило время выхода 1% водного метиленового синего в очаг воспаления, вызываемого нанесением на депилированную поверхность кожи 0.05 мл ксилола. Опытным мышам за 1 час до внутрибрюшинного введения 0.25 мл 1% раствора метиленового синего внутрижелудочно вводили 1% спиртовый раствор бетулина в дозе 200 мг/кг, что соответствовало 0,2 мл. Контрольной группе мышей в желудок вводили 96% этиловый спирт. Регистрировали время выделения метиленового синего в очаге воспаления. Данные о биологической активности бетулина на проницаемость сосудов кожи мышей в сравнении с дигидрокверцетином приведены в таблице 2. В контрольной группе животных время выхода метиленового синего составило 14.7 сек, тогда как в опытной группе время выхода оказалось достоверно большим, что свидетельствует о проявлении бетулином капилляроукрепляющего эффекта.

Пример 2. Исследования проводились аналогично примеру 1, только опытной группе мышей вводили 1% спиртовый раствор бетулина в дозе 400 мг/кг, что соответствовало 0,4 мл раствора (табл.2).

При введении дозы бетулина 400 мг/кг капилляроукрепляющий эффект составил 146.9% от контроля, т.е. в этой дозе капилляроукрепляющий в 3 раза выше, чем в дозе 200 мг/кг. В дозе 400 мг/кг - капилляроукрепляющий эффект оказался в 2 раза выше, чем известного капилляроукрепляющее средство дигидрокверцетин в дозе 300 мг/кг.

На основании проведенных исследований установлено, что бетулин обладает выраженным дозозависимым капилляроукрепляющим действием.

Повышение проницаемости стенки кровеносных сосудов, в том числе капилляров, является одним из патогенетических этапов вирусных, бактериальных, аллергических, аутоиммунных, эндокринных и других заболеваний. Поэтому бетулин - вещество растительного происхождения, обладающее капилляроукрепляющими свойствами и при этом не являющееся токсичным для организма, может использоваться при лечении капилляротоксикозов и геморрагических диатезов, аллергии, аутоиммунных, бактериальных и вирусных заболеваний.

Таблица 1
Основные показатели острой токсичности бетулина и дигирокверцетина при внутрибрюшинном введенииВеществоПоказатели токсичности, мг/кгЛД₁₆ЛД₅₀Бетулин6500>9000Дигидрокверцетин28103630Таблица 2
Влияние бетулина и дигидрокверцетина на проницаемость сосудов кожиВеществоДоза, мг/кгВремя выхода метиленовой сини, секКапилляроукрепляющий эффект, разница в % от контроля1234Контроль-14.7±1.5*-Бетулин20021.7±3.8*47.640036.3±4.0*146.9Дигидрокверцетин10021.5±2.6*33.930025.4±2.8*77.7*р<0,05 по отношению к контролю

Изобретение относится к медицине и фармакологии и касается применения природного тритерпеноида ряда лупана - бетулина в качестве капилляроукрепляющего средства. Выявлены капилляроукрепляющие свойства 1%-ного спиртового раствора бетулина, который при этом не является токсичным для организма. 1%-й спиртовый раствор бетулина снижал проницаемость сосудов кожи мыши в 2 раза выше, чем известное капилляроукрепляющее средство дигидрокверцетин. Новое средство может использоваться при лечении многих заболеваний. 2 табл.

Применение 1%-го спиртового раствора бетулина в качестве капилляроукрепляющего средства.